酮康唑溶液給大鼠的藥動學(xué)行為及生物利用度研究

酮康唑溶液給大鼠的藥動學(xué)行為及生物利用度研究

托吡唑酮是一種廣泛的抗真菌藥物。它被用作淺表或深層真菌感染的治療，如全身感染、慢性皮膚粘膜感染、鵝口傷口和全身真菌感染。副作用包括肝臟損害、尿失禁和器官網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)，其中肝臟損害最為嚴重。而將一些藥物制成生物黏附性給藥系統(tǒng),可避免肝臟首過作用,減少不良反應(yīng),延長給藥時間;或?qū)⑺幬镏苯臃胖糜谒柚委煵课?可達到提高局部濃度和生物有效性的目的。本課題組研制的酮康唑生物黏附性陰道片,用于治療成年及絕經(jīng)期女性陰道念珠菌感染并降低酮康唑的肝毒性。本研究考察大鼠靜脈注射酮康唑和陰道內(nèi)給予酮康唑生物黏附片后的藥動學(xué)行為,對酮康唑生物黏附性陰道片的安全性進行探討。材料和方法1材料表面1.1生物黏附片類酮康唑(批號:20040302)及對照品(純度:99.91%):由南京白敬宇制藥有限責(zé)任公司提供;地西泮對照品(純度>99%):由湖北中天愛百顆藥業(yè)提供;酮康唑生物黏附性緩釋片:自制,每片含酮康唑100mg,以Carbopol934P和HPMC(K4M)為生物黏附材料,內(nèi)加泡騰劑增加藥物釋放。其處方篩選、體外釋放、黏附力數(shù)據(jù)另文報道。其他試劑均為色譜純或分析純,水為重蒸水。1.2實驗動物Wistar大鼠6只,雌性,體重240～260g,購自沈陽藥科大學(xué)實驗動物中心,合格證號:SCXT[遼]2003-008。2血液中藥物濃度的測定2.1高效液相色譜法HitachiD7000高效液相色譜系統(tǒng),HMS色譜工作站;色譜柱:PhenomenexC18色譜柱(250mm×4.6mm,5μm);流動相:乙腈-水-三乙胺(45∶55∶0.5),用磷酸調(diào)節(jié)pH至7.0;流速:1.0mL·min-1;檢測波長:243nm;柱溫:室溫。2.2地西料甲醇液的制備參照文獻,準(zhǔn)確吸取大鼠血漿100μL,置5mL具塞離心試管中,加入10μL濃度為50μg·mL-1的地西泮甲醇液(內(nèi)標(biāo))、氨水20μL,用2mL乙醚渦旋振蕩提取,離心,取上清液置10mL尖底離心管中,40℃水浴通氮氣吹干。殘留物用100μL流動相溶解,精密吸取20μL注入液相色譜儀測定,記錄內(nèi)標(biāo)峰面積(As)、樣品峰面積(Ai),計算峰面積比Y(Y=Ai/As)。2.3大鼠血漿中酮康唑含量的測定在選定的色譜條件下,地西泮的保留時間約為13min,酮康唑的保留時間約為16min,大鼠空白血漿、空白血漿加入酮康唑和內(nèi)標(biāo)、靜脈注射15min后大鼠血漿樣品及內(nèi)標(biāo)的色譜圖,見圖1。血漿中內(nèi)源性物質(zhì)不干擾測定。2.4血藥濃度測定精密稱取一定量的酮康唑置5mL量瓶中,加甲醇溶解定容。再精密量取一定量稀釋,得其系列標(biāo)準(zhǔn)液濃度為0.02,0.1,0.5mg·mL-1。取大鼠空白血漿100μL,加入不同體積、不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)液,使血漿中所含酮康唑濃度分別為0.5,1.0,5.0,10.0,20.0,50.0,100.0和200.0μg·mL-1,充分混勻后,照“2.2”項下操作,記錄Y值。采用最小二乘法以血藥濃度(C,μg·mL-1)和Y作線性回歸,得直線方程Y=8.77×10-2C-1.53×10-2,r=0.9998(n=6)。結(jié)果表明血漿中酮康唑濃度在0.5～200.0μg·mL-1范圍內(nèi),線性關(guān)系較好,最低定量濃度為0.5μg·mL-1。2.5提取回收率及精密度分別于100μL空白血漿中加入3種不同濃度的酮康唑溶液,得到濃度為0.5,20.0和200.0μg·mL-1的酮康唑血漿樣品,按“2.2”項下操作,測定其提取回收率、日內(nèi)及日間精密度。低、中、高濃度的平均提取回收率分別為71.74%,100.31%,92.43%(n=6),平均日內(nèi)精密度為(5.98±0.26)%,平均日間精密度為(7.76±2.81)%。提取回收率和精密度均較好。3離心血漿制備組采用自身對照法給藥。取Wistar大鼠6只,禁食12h,自由飲水。給藥前用乙醚麻醉,分別按體重股靜脈注射酮康唑溶液2mg,于給藥后的0.083,0.25,0.5,1,1.5,2,4,6,8,10,12和24h眼眶取血約0.3mL,置于肝素化離心塑料管中,離心15min(5000r·min-1),分離出血漿0.1mL,于-20℃冷凍保存?zhèn)溆谩４笫蠼?jīng)過1周代謝后,取1片自制酮康唑生物黏附性陰道片(100mg/片)置大鼠陰道中,于給藥后2,4,8,12,16,20,24,28,32,36,40,44,48和52h眼眶取血,分離血漿,冷凍保存?zhèn)溆谩?處理數(shù)據(jù)血藥濃度和藥動學(xué)參數(shù)采用xˉ±sxˉ±s表示,用3P97藥動學(xué)處理軟件進行隔室擬合,藥動學(xué)參數(shù)由矩量法計算得出。結(jié)果1藥動學(xué)參數(shù)結(jié)果大鼠靜脈注射酮康唑2mg后,藥時曲線見圖2。測得的血藥濃度經(jīng)3P97藥動學(xué)處理軟件擬合隔室模型,結(jié)果符合三室模型。經(jīng)矩量法計算藥動學(xué)參數(shù):Ke=(0.0905±0.0158)h-1;t1/2=(7.88±1.50)h;AUC0～∞=(115.73±18.91)μg·mL-1·h;MRT=(8.92±1.63)h;C1=(18.5±2.8)mL·h-1;Vss=(0.156±0.025)L。2mtt2.2大鼠陰道給予100mg自制黏附片后,藥時曲線見圖3。經(jīng)矩量法計算藥動學(xué)參數(shù):Ke=(0.117±0.019)h-1;t1/2=(6.03±0.97)h;AUC0～∞=(1186.0±274.1)μg·mL-1·h;MRT=(35.71±1.65)h;C1=(88.7±23.0)mL·h-1;Vss=(0.063±0.014)L。絕對生物利用度(20.7±4.5)%?！半p雙”現(xiàn)象所產(chǎn)生的原因本實驗觀察了大鼠靜脈注射酮康唑后藥動學(xué)行為,表明其符合三室模型。靜注后的藥時曲線出現(xiàn)了“雙峰”現(xiàn)象(Tmax,2≈1.5h),給予陰道片后無“雙峰”現(xiàn)象。陳繩林等報道給山羊靜注酮康唑后,體內(nèi)藥動學(xué)配置符合二室開放模型,與本實驗結(jié)果不同,其原因可能是種屬差異或數(shù)據(jù)處理方法不同造成的。該文獻同時報道山羊靜注和給予陰道栓后,酮康唑的藥時曲線均出現(xiàn)“雙峰”現(xiàn)象,與本實驗結(jié)果也不同,其原因尚待進一步研究。酮康唑在水中基本不溶,難以制成高濃度溶液給藥,因此本實驗中靜脈注射劑量與陰道黏附片劑量相差較大。酮康唑是肝臟專屬性代謝藥物,在體內(nèi)氧化降解成無抗真菌活性的代謝物,大部分通過肝臟由膽囊排到腸道,僅有2%～4%以原形由尿中排出。劉皋林等報道,酮康唑隨著劑量增加,代謝和消除變慢;該藥也是細胞色素P450的強抑制劑,可抑制細胞色素P450底物的代謝,提高其生物利用度。根據(jù)非線性藥動學(xué)理論,藥物代謝酶以及藥物轉(zhuǎn)運過程(如主動轉(zhuǎn)運、膽汁排泄等)涉及的載體系統(tǒng)均呈現(xiàn)一定的容量限制性,這種容量限制性來自代謝酶及載體系統(tǒng)的飽和性,故其動力學(xué)呈現(xiàn)明顯的劑量(濃度)依賴性。另外,某些藥物的代謝產(chǎn)物消除較慢,當(dāng)達到足夠高的血藥濃度時可競爭性抑制催化原形藥物代謝的酶,從而能夠抑制原形藥物的自身代謝,此