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文檔簡介

食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定第四章食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定第一節(jié)食品中農(nóng)藥殘留的測定第二節(jié)食品中獸藥的測定食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定第一節(jié)

食品中農(nóng)藥殘留的測定

一、食品中有機氯農(nóng)藥殘留量的測定

(一)氣相色譜法

1、原理

樣品中六六六、滴滴涕經(jīng)提取、凈化后用氣相色譜法測定,與標準比較定量。電子捕獲檢測器對于電負性強的化合物具有較高的靈敏度,利用這一特點,可分別測出微量的六六六和滴滴涕。在適合的色譜條件下,不同異構(gòu)體和代謝物可同時分別測定。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

2、試劑使用的試劑一般系分析純,有機溶劑需經(jīng)重蒸餾。丙酮、正己烷石油醚(沸程30~60℃)、苯、硫酸、無水硫酸鈉、硫酸鈉溶液(20g/L)。六六六、滴滴涕標準使用液將上述標準儲備液以己烷稀釋至適宜濃度,一般為0.01μg/mL。

3、儀器小型粉碎機、小型絞肉機、組織搗碎機、電動振蕩器、旋轉(zhuǎn)濃縮蒸發(fā)器、吹氮濃縮器、氣相色譜儀:具有電子捕獲檢測器(ECD)。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

4、測定步驟(1)提?、俜Q取具有代表性的樣品(適用于生的及烹調(diào)加工過的蔬菜、水果或谷類、豆類、肉類、蛋類)約200g,加適量水,于搗碎機中搗碎,混勻。稱取勻漿2.00~5.00g,于50mL具塞三角瓶中,加10~15mL丙酮,在振蕩器上振蕩30min,過濾于100mL分液漏斗中,殘渣用丙酮洗滌四次,每次4mL,用少許丙酮洗滌漏斗和濾紙,合并濾液30~40mL,加石油醚20mL,搖動數(shù)次,放氣。振搖lmin,加20mL硫酸鈉溶液(20g/L),振搖1min,靜置分層,棄去下層水溶液。用濾紙擦干分液漏斗頸內(nèi)外的水,然后將石油醚液緩緩放出,經(jīng)盛有約10g無水硫酸鈉的漏斗,濾入50mL三角瓶中。再以少量石油醚分三次洗滌原分液漏斗、濾紙和漏斗,洗液并入濾液中,將石油醚濃縮,移入10mL具塞試管中,定容至5.0mL或10.0mL。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

②稱取具有代表性的乳樣品2.00g,于10mL具塞試管中,加4mL丙酮,振搖lmin,加4mL石油醚,振搖lmin。靜置分層。將上層石油醚溶液移入另一25mL具塞試管中,再加lmL石油醚于原試管中,不搖。取出上層石油醚合并于25mL試管中,重復兩次。再加與石油醚等體積的硫酸鈉溶液(20g/L),搖混,分層。將上層石油醚溶液取出經(jīng)無水硫酸鈉濾入10mL具塞試管中,再加lmL石油醚于原25mL試管中,不搖。取出上層液合并于10mL試管中,重復兩次。提取液定容至4.0mL。③稱取具有代表性的均勻食用油樣品0.50g以石油醚溶解于10mL試管中,定容至10.0mL。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定(2)凈化5.0mL提取液加0.50mL濃硫酸,蓋上試管塞。振搖數(shù)次后,打開塞子放氣,然后振搖0.5min,于1600r/min,離心15min,上層清液,供氣相色譜法分析用。(3)測定①.氣相色譜參考條件色譜柱內(nèi)徑3~4mm,長1.2~2m的玻璃柱,內(nèi)裝涂以O(shè)V-17(15g/L)和QF-1(20g/L)的混合固定液的80~100目硅藻土。

Ni-電子捕獲檢測器汽化室溫度:215℃;色譜柱溫度:195℃;檢測器溫度:225℃;載氣(氮氣)流速:90mL/min;紙速:0.5cm/min。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

②測量與計算電子捕獲檢測器的線性范圍窄,為了便于定量,選擇樣品進樣量使之適合各組分的線性范圍。根據(jù)樣品中六六六、滴滴涕存在形式,相應的制備各組分的標準曲線,從而計算出樣品中的含量。六六六、滴滴涕及異構(gòu)體或代謝物含量按下式計算。

式中X——樣品中六六六、滴滴涕及其異構(gòu)體或代謝物的單一含量,mg/kg;

Al——被測定用樣液中六六六或滴滴涕及其異構(gòu)體或代謝物的單一含量,ng;

V1——樣品凈化液體積,mL;

V2——樣液進樣體積,μL;

m1——樣品質(zhì)量,g。

結(jié)果的表述:報告平行測定的算術(shù)平均值的二位有效數(shù)。允許差:相對誤差≤15%。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

(二)薄層色譜法1.原理樣品中六六六、滴滴涕經(jīng)有機溶劑提取,并經(jīng)硫酸處理,除去干擾物質(zhì),濃縮,點樣展開后,用硝酸銀顯色,經(jīng)紫外線照射生成棕黑色斑點,與標準比較,可概略定量。

2.分析步驟(1)提取、凈化同氣相色譜法。(2)薄層板的制備稱取氧化鋁G4.5g,加lmL硝酸銀溶液(10g/L)及6mL水,研磨至糊狀,立即涂在三塊5cm×20cm的薄層板上,涂層厚度0.25mm,于100℃烘0.5h,置于干燥器中,避光保存。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

(3)點樣離薄層板底端2cm處,用針劃一標記。在薄層板上點1~10μL樣液和六六六、滴滴涕標準溶液,一塊板可點3~4個。中間點標準溶液,兩邊點樣品溶液。也可用濾紙移樣法點樣。(4)展開在展開槽中預先倒入10mL丙酮-己烷(1+99)或丙酮-石油醚(1+99)。將經(jīng)過點樣的薄層板放入槽內(nèi)。當溶劑前沿距離原點10~12cm時取出,自然揮干。(5)顯色將展開后的薄層板噴以10mL硝酸銀顯色液,干燥后距紫外燈8cm處照10~20min,六六六、滴滴涕等全部顯現(xiàn)棕黑色斑點。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定3.計算

式中X——樣品中六六六、滴滴涕及其異構(gòu)體或代謝物的單一含量,mg/kg;

A——被測定用樣液中六六六或滴滴涕及其異構(gòu)體或代謝物的單一含量,μg;

V1——樣品濃縮液總體積,mL;

V2——點板樣液體積,μL;

m——樣品質(zhì)量,g。結(jié)果的表述:報告平行測定的算術(shù)平均值的二位有效數(shù)。允許差:相對誤差≤15%。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

二、食品中有機磷農(nóng)藥殘留量的測定有機磷農(nóng)藥種類很多,按照其結(jié)構(gòu)可分為磷酸酯和硫化磷酸酯兩大類,常見的有機磷農(nóng)藥有:內(nèi)吸磷(又名1059)、對硫磷(又名1605)、甲拌磷(又名3911)、敵敵畏(DDVP)、敵百蟲、樂果、馬拉硫磷(又名4049)、倍硫磷、殺螟硫磷(又名殺螟松)、稻瘟凈(又名EBP)等,此外還有毒性很高的甲基對硫磷、乙基對硫磷(E-1605)、甲胺磷等。

有機磷農(nóng)藥殘留的測定常采用氣相色譜法、薄層色譜-酶抑制法等。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定(一)水果、蔬菜、谷類中有機磷農(nóng)藥的多殘留測定方法

1.原理含有機磷的樣品在富氫焰上燃燒,以HPO碎片的形式,放射出波長526nm的特性光;這種光通過濾光片選擇后,由光電倍增管接收,轉(zhuǎn)換成電信號,經(jīng)微電流放大器放大后被記錄下來。樣品的峰面積或峰高與標準品的峰面積或峰高進行比較定量。

2.試劑丙酮、二氯甲烷、氯化鈉、無水硫酸鈉、助濾劑Celite545、含磷農(nóng)藥標準品。含磷農(nóng)藥標準溶液的配制分別準確稱取標準品,用二氯甲烷為溶劑,分別配制成1.0mg/mL的標準儲備液,儲于冰箱(4℃)中,使用時用二氯甲烷稀釋配成單一品種的標準使用液(1.0μg/mL)。再根據(jù)各農(nóng)藥品種的食品相應值或最小檢測限,吸取不同量的標準儲備液,用二氯甲烷稀釋成混合標準使用液。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

3.儀器組織搗碎機、粉碎機、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、氣相色譜儀:附有火焰光度檢測器(FPD)

4.試樣的制備取糧食樣品經(jīng)粉碎機粉碎,過20目篩制成糧食試樣;取水果、蔬菜樣品洗凈,晾干,去掉非可食部分后制成待分析試樣。

5.測定步驟(1)提?、偎?、蔬菜稱取50.00g試樣,置于300mL燒杯中,加入50mL水和100mL丙酮(提取液總體積為150mL),用組織搗碎機提取1~2min。勻漿液經(jīng)鋪有二層濾紙和約10gCelite545的布氏漏斗減壓抽濾。從濾液中分取100mL移至500mL分液漏斗中。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

②谷物

稱取25.00g試樣,以下步驟同①自“置于300mL燒杯中,加入50mL水和100mL丙酮”起,依法操作。(2)凈化

向提取的濾液中加入10~15g氯化鈉使溶液處于飽和狀態(tài)。猛烈振搖2~3min,靜置10min,使丙酮從水相中鹽析出來,水相用50mL二氯甲烷振搖2min,再靜置分層。

將丙酮與二氯甲烷提取液合并,經(jīng)裝有20~30g無水硫酸鈉的玻璃漏斗脫水濾入250mL圓底燒瓶中,再以約40mL二氯甲烷分數(shù)次洗滌容器和無水硫酸鈉。洗滌液也并入燒瓶中,用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至約2mL,濃縮液定量轉(zhuǎn)移至5~25mL容量瓶中,加二氯甲烷定容至刻度。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

(3)氣相色譜測定

色譜參考條件

色譜柱

玻璃柱2.6m×3mm(i.d),填裝涂有4.5%(m/m)DC-200+2.5%(m/m)OV-17的ChromosorbWAWDMCS(80~100目)的擔體。

玻璃柱2.6m×3mm(i.d),填裝涂有1.5%(m/m)DCOE-1的ChromosorbWAWDMCS(60~80目)。

氣體速度

氮氣(N2)50mL/min、氫氣(H2)100mL/min、空氣50mL/min。

溫度

柱箱240℃、汽化室260℃、檢測器270℃。(4)測定吸取2~5μL混合標準液及樣品凈化液注入色譜儀中,以保留時間定性。以試樣的峰高或峰面積與標準比較定量。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

6.計算式中Xi——i組分有機磷農(nóng)藥的含量,mg/kg;

Ai——試樣中i組分的峰面積,積分單位;

Asi——混合標準液中i組分的峰面積,積分單位;

V1——試樣提取液的總體積,mL;

V2——凈化用提取液的總體積,mL;

V3——濃縮后的定容體積,mL;

V4——進樣體積,mL;

Esi——注入色譜儀中的i標準組分的質(zhì)量,ng;

m——樣品的質(zhì)量,g。

結(jié)果的表述:報告算術(shù)平均值的二位有效數(shù)。相對誤差≤15%。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

(二)食品中辛硫磷農(nóng)藥殘留量測定方法1.原理

含有機磷的樣品在富氫焰上燃燒,以氫磷氧(HPO)碎片的形式,放射出波長526nm的特征光,這種特征光通過濾光片選擇后,由光電倍增管接收,轉(zhuǎn)換成電信號,經(jīng)微電流放大器放大后,分別記錄標準和樣品的峰高,以外標法定量樣品的含量。

2.試劑丙酮、石油醚、無水硫酸鈉、活性炭(用3mol/L鹽酸浸泡過夜,抽濾,用水洗至中性,在120℃下烘干備用)。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定辛硫磷標準品

①辛硫磷(phoxim)99%。

②標準溶液的配制

準確稱取辛硫磷標準品,用丙酮溶解,配成lmg/mL標準儲備液,使用時用丙酮稀釋成lμg/mL的標準使用液,儲藏于冰箱中。

3.儀器氣相色譜儀(帶火焰光度檢測器)、電動振蕩器、K-D濃縮器、索氏提取器、具塞錐形瓶(250mL)、分液漏斗(250mL)。

4.試樣的制備

取谷物實驗樣品,經(jīng)粉碎機粉碎,過20目篩后,制成谷物試樣。取蔬菜和水果實驗樣品洗凈、晾干,去掉非食部分后,剁碎或經(jīng)組織搗碎機搗碎,制成蔬菜或水果試樣。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

5.測定步驟(1)提取和凈化

①谷物

稱取谷物試樣20g,精確至0.001g,置于具塞錐形瓶中,加入50mL石油醚,避光浸提5h,抽濾,殘渣用100mL石油醚分三次洗滌,合并濾液過無水硫酸鈉,于K-D濃縮器上濃縮,定容至5mL,待氣相色譜分析。

②蔬菜

稱取蔬菜試樣50g,精確至0.001g,置于具塞錐形瓶中,用石油醚-丙酮(1:1)(V/V)溶液100mL避光浸提12h,后加1~3g(根據(jù)蔬菜色素含量)活性炭振蕩0.5h,靜置5min,抽濾,濾渣用50mL丙酮洗滌,向濾液中加入100mL2%硫酸鈉水溶液,用150mL石油醚分三次萃取,合并萃取液,濃縮并定容至10mL,待氣相色譜分析。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

③水果稱取水果試樣25g,加入1.5g活性炭拌勻,用濾紙將試樣包好,置于索氏抽提器中,加入120mL石油醚-丙酮(1:1)(V/V),避光浸泡一夜后,在60℃下回流4h,每小時4~5次,提取液轉(zhuǎn)移到分液漏斗中,加入30mL2%硫酸鈉水溶液,振搖,分出石油醚層,水層用30mL石油醚萃取二次,合并石油醚,通過無水硫酸鈉,濃縮石油醚層,定容至5mL,待氣相色譜分析。(2)氣相色譜分析①氣相色譜條件

a.色譜柱玻璃柱,內(nèi)徑3mm,長lm,內(nèi)裝5%OV-101/Chro-mosorbW·AW·DMCS80~100目。

b.氣流速度載氣(N2)80mL/min,空氣60mL/min,氫氣60mL/min。c.溫度柱溫175℃,進樣口185℃;,檢測器200℃。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

②測定

a.定性以辛硫磷標準品的保留時間定性。

b.定量用外標法定量,以辛硫磷標準品作外標物,按峰高計算。6.結(jié)果計算式中X——樣品中辛硫磷含量,mg/kg;

Es——注入的標樣中辛硫磷的含量,ng;

V1——樣品進樣體積,μL;

V2——最后定容體積,mL;

h1——標準樣品的峰高,mm;

h2——樣品的峰高,mm;

m——樣品質(zhì)量,g。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

(三)柑橘中水胺硫磷殘留量測定方法1.原理柑橘樣品經(jīng)硅藻土545、丙酮和活性炭搗碎提取,過濾,濾液用二氯甲烷萃取,濃縮,進帶火焰光度檢測器和526nm濾光片的氣相色譜儀測定。利用含有機磷的樣品在富氫焰上燃燒,以HPO碎片的形式,放射出波長526nm的特征光,這種特征光通過濾光片選擇后,由光電倍增管接收,轉(zhuǎn)換成電信號,經(jīng)微電流放大品放大后,被記錄下來,樣品的峰高與標準品的峰高相比,計算出樣品相當?shù)暮?。本方法最小檢出限為1.4×10-12g。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

2.試劑丙酮、二氯甲烷、無水硫酸鈉、助濾劑Celite545、氯化鈉,以上試劑均為分析純。

酸洗活性炭300g活性炭粉末,用1000mLlmol/L鹽酸煮沸4h后,用水洗至洗滌水中無氯離子,烘干備用。弗羅里硅土60~100目,在650℃下烘3h后,加5%水混勻,儲于干燥器中,用前在130℃下烘2h。水胺硫磷標準品

純度為99%。

3.儀器氣相色譜儀:附火焰光度檢測器(FPD)和526nm濾光片、組織搗碎機、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、K-D濃縮器、真空泵(30L/min)、250mL分液漏斗、內(nèi)徑0.5cm的微型層析柱。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

4.實驗步驟

(1)樣品提取

取有代表性的柑橘樣品切碎后充分混勻,稱取50.0g于組織搗碎機中,加5gCelite545和100mL丙酮。搗碎30s后,轉(zhuǎn)移至布氏漏斗抽濾,然后用丙酮洗滌殘渣和濾器二次,每次20mL,合并濾液和洗濾液。

(2)液-液分配萃取

取上述濾液1/2于250mL分液漏斗中,加氯化鈉5g,充分振搖使其溶解,然后用30mL、15mL二氯甲烷分別振蕩萃取,靜置分層后,收集有機相,合并兩次有機相萃取液于100mL具塞錐形瓶中,加10g無水硫酸鈉振蕩脫水,然后再經(jīng)φ8mm×120mm無水硫酸鈉層析柱進一步脫水,最后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在60℃水浴濃縮至2mL待凈化用。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

(3)凈化

用φ8mm×120mm的層析柱,由下至上緊密均勻地填裝玻璃棉少許,lcm無水硫酸鈉,3.5cm弗羅里硅土,2.5cm酸洗活性炭,lcm無水硫酸鈉。用少量二氯甲烷預淋層析柱后,將2mL樣品濃縮液倒入柱內(nèi),待液面進入無水硫酸鈉層,用二氯甲烷少量多次洗滌濃縮瓶,并倒入層析柱內(nèi),收集10mL洗脫液,用K-D濃縮器濃縮至2~5mL,供氣相色譜測定用。(4)氣相色譜測定①色譜條件

a.色譜柱柱1)3mm(內(nèi)徑)×1100mm玻璃柱,裝填鍵合固定相-D(固定相DEGS鍵合于410擔體60~80目)。柱2)3mm(內(nèi)徑)×1600mm玻璃柱,裝填1.5%OV-17+1.98%QF-1涂漬于ChromosorbW(AW-DMCS)80~100目。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

b.氣體速度

柱1)

載氣(氮氣)85mL/min;氫氣60mL/min;空氣60mL/min。

柱2)

載氣(氮氣)60mL/min;氫氣60mL/min;空氣60mL/min。c.溫度

柱1)

汽化室與檢測器275℃;柱溫225℃。

柱2)

汽化室與檢測器280℃;柱溫230℃。

②測定

采用外標法定性定量。

食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

5.計算

式中X——樣品中水胺硫磷含量,mg/kg;

A——進樣體積中水胺硫磷含量,ng;

m——進樣體積(μL)相當于樣品的質(zhì)量,g。

注:計算時注意凈化樣品過程只吸取抽濾液的1/2。允許差取樣量在50g,二次平行允許差為10%。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

三、食品中氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的測定(一)食品中氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的測定方法1.原理

含氮有機化合物被色譜柱分離后在加熱的堿金屬片的表面產(chǎn)生熱分解,形成氰自由基(CN-),并且從被加熱的堿金屬表面放出的原子狀態(tài)的堿金屬(Rb)接受電子變成CN-,再與氫原子結(jié)合。放出電子的堿金屬變成正離子,由收集極收集,并作為信號電流而被測定。電流信號的大小與含氮化合物的含量成正比。以峰面積或峰高比較定量。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

2.試劑無水硫酸鈉

于450℃焙燒4h后備用丙酮

重蒸無水甲醇

重蒸二氯甲烷

重蒸石油醚

沸程30~60℃,重蒸速滅威(tsumacide)

≥99%葉蟬散(MIPC)

≥99%殘殺威(propoxur)

≥99%呋喃丹(carbofuran)

≥99%抗蚜威(pirimicarb)

≥99%西維因(carbaryl)

≥99%食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

5%氯化鈉溶液

稱取25g氯化鈉,用水溶解并稀釋至500mL甲醇-氯化鈉溶液

取無水甲醇及5%氯化鈉溶液等體積混合。氨基甲酸酯殺蟲劑標準溶液的配制

分別準確稱取速滅威、葉蟬散、殘殺威、呋喃丹、抗蚜威及西維因各種標準品,用丙酮分別配制成lmg/mL的標準儲備液。使用時用丙酮稀釋配制成單一品種的標準使用液(5μg/mL)和混合標準工作液(每個品種濃度為2~10μg/mL)。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

3.儀器氣相色譜儀:附有火焰熱離子檢測器(FTD)、電動振蕩器、組織搗碎機、糧食粉碎機(帶20目篩)、恒溫水浴鍋、減壓濃縮裝置、分液漏斗(250mL,500mL)、量筒(50mL,100mL)、具塞三角燒瓶(250mL)、抽濾瓶(250mL)、布氏漏斗(φ10cm)。

4.試樣的制備

取糧食實驗樣品經(jīng)糧食粉碎機粉碎,過20目篩制成糧食試樣。取蔬菜實驗樣品洗凈、晾干,去掉非食部分后剁碎或經(jīng)組織搗碎機搗碎制成蔬菜試樣。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

5.分析步驟

(1)提取

①糧食樣品

稱取約40g糧食試樣,精確至0.001g,置于250mL具塞錐形瓶中,加入20~40g無水硫酸鈉(視試樣的水分而定)、100mL無水甲醇。塞緊,搖勻,于電動振蕩器上振蕩30min。然后經(jīng)快速濾紙過濾于量筒中,收集50mL濾液,轉(zhuǎn)入250mL分液漏斗中,用50mL5%氯化鈉溶液洗滌量筒,并入分液漏斗中。②蔬菜樣品

稱取20g蔬菜試樣,精確至0.001g,置于250mL具塞錐形瓶中,加入80mL無水甲醇,塞緊,于電動振蕩器上振蕩30min。然后經(jīng)鋪有快速濾紙的布氏漏斗抽濾于250mL抽濾瓶中,用50mL無水甲醇分次洗滌提取瓶及濾器。將濾液轉(zhuǎn)入500mL分液漏斗中,用100mL5%氯化鈉水溶液分次洗滌濾器,并入分液漏斗中。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

(2)凈化

①糧食樣品

于盛有樣品提取液的250mL分液漏斗中加入50mL石油醚,振蕩lmin,靜置分層后將下層(甲醇氯化鈉溶液)放入第二個250mL分液漏斗中,加25mL甲醇-氯化鈉溶液于石油醚層中,振搖30s,靜置分層后,將下層并入甲醇-氯化鈉溶液中。

②蔬菜樣品

于盛有樣品提取液的500mL分液漏斗中加入50mL石油醚,振搖lmin,靜置分層后將下層放入第二個500mL分液漏斗中,并加入50mL石油醚,振搖lmin,靜置分層后將下層放入第三個500mL分液漏斗中。然后用25mL甲醇-氯化鈉溶液依次反洗第一、二分液漏斗中的石油醚層,每次振搖30s,最后把甲醇-氯化鈉溶液并入第三分液漏斗中。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

(3)濃縮

于盛有樣品凈化液的分液漏斗中,用二氯甲烷(50mL,25mL,25mL)依次提取三次,每次振搖lmin,靜置分層后將二氯甲烷層經(jīng)鋪有無水硫酸鈉(玻璃棉支撐)的三角漏斗(用二氯甲烷預洗過)過濾于250mL蒸餾瓶中,用少量二氯甲烷洗滌漏斗,并入蒸餾瓶中。將蒸餾瓶接上減壓濃縮裝置,于50℃水浴上減壓濃縮至lmL左右,取下蒸餾瓶,將殘余物轉(zhuǎn)入10mL刻度離心管中,用二氯甲烷反復洗滌蒸餾瓶并入離心管中。然后吹氮氣除盡二氯甲烷溶劑,用丙酮溶解殘渣并定容至2.0mL,供氣相色譜分析用。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

(4)氣相色譜條件

①色譜柱

色譜柱1)

玻璃柱,3.2mm(內(nèi)徑)×2.1m,內(nèi)裝涂有2%OV-101+6%OV-210混合固定液的ChromosorbW(HP)80-100目擔體。

色譜柱2)

玻璃柱,3.2mm(內(nèi)徑)×1.5m,內(nèi)裝涂有1.5%OV-17+1.95%OV-210混合固定液的ChromosorbW(AW-DMCS)80~100目擔體。

②氣體條件

氮氣65mL/min;空氣150mL/min;氫氣3.2mL/min。

③溫度條件

柱溫190℃;進樣口或檢測室溫度240℃。

(5)測定

取5.3步驟中的試樣液及標準樣液各1μL進樣,做色譜分析。根據(jù)組分在兩根色譜柱上的出峰時間與標準組分比較定性;用外標法與標準組分比較定量。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

6.計算

式中Xi——試樣中組分i的含量,mg/kg;

Ei——標準試樣中組分i的含量,ng;

Ai——試樣中組分i的峰面積或峰高,積分單位;

AE——標準試樣中組分i的峰面積或峰高,積分單位;

m——試樣質(zhì)量(糧食試樣g,蔬菜試樣20g),g;2000——樣液的定容體積(2.0mL);1000——換算單位。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

(二)糧、油、菜中西維因殘留量的高效液相色譜法

1.原理

含有西維因的糧食經(jīng)提取、弗羅里硅土凈化后,濃縮,定容作為測定溶液,取一定量注入高效液相色譜儀,經(jīng)分離用紫外280nm檢測器檢測,與標準系列比較定量。

2.試劑

苯、乙腈、甲醇、二氯甲烷、無水硫酸鈉(120℃干燥4h)。弗羅里硅土120℃干燥4h,加入6%(m/m)蒸餾水,搖勻,放置過夜后使用。西維因標準溶液的配制

準確稱取西維因標準品(99.3%),用甲醇溶解并配制成10.0mg/mL的標準儲備液,儲于冰箱中,使用時用甲醇稀釋成10μg/mL的標準使用液。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

3.儀器高效液相色譜儀(帶紫外檢測器)、溶劑過濾器、超聲波儀(用于流動相脫氣)、KD濃縮器或旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)器。

4.分析步驟

(1)提取

稱取20.00g經(jīng)粉碎過20目篩的糧食試樣于250mL具塞錐形瓶中,準確加入50mL苯,浸泡過夜,次日振蕩提取1h,提取液過濾。

(2)凈化

取直徑1.5cm層析柱,先裝脫脂棉少許(柱兩頭裝2cm高無水硫酸鈉,中間裝6g弗羅里硅土),裝好的柱先用20mL二氯甲烷預淋,棄去預淋液,然后將5~10mL樣品提取液倒入層析柱,用70mL二氯甲烷少量多次淋洗,收集全部淋洗液,用KD濃縮器進行濃縮至近干(水浴溫度30℃),然后用甲醇溶解殘余物,并定容至5mL。定容后用0.5μm濾紙借助于注射器過濾,取10μL濾液注入高效色譜進行分離、檢測。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

(3)液相色譜測定參考條件①色譜柱不銹鋼柱BONAPAKCl83.9mm×30cm。②檢測器紫外檢測器波長280μm,靈敏度0.01~0.02。③流動相乙腈-水(55+45)混合溶劑,流速lmL/min。④溫度柱溫,檢測器均為室溫。(4)測定吸取10μL標準使用液及樣品液注入色譜儀,以保留時間定性,用標準曲線法定量。

5.計算

式中X——糧食中西維因的含量,mg/kg;

Al——從標準曲線求出樣液中西維因的含量,μg;

V1——樣液定容的體積,mL;

V2——注入色譜的體積,mL;

m1——樣品的質(zhì)量,g。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

(三)花生仁、棉籽油、花生油中涕滅威殘留量的氣相色譜法

1.原理

含有涕滅威及氧化代謝物涕滅威亞砜、涕滅威砜的樣品,在提取過程中加入強氧化劑使涕滅威、涕滅威亞砜氧化成在氣相色譜儀火焰光度檢測器上有較高響應的涕滅威砜進行測定。涕滅威殘留總量以涕滅威砜的量表示。

2.試劑除特殊規(guī)定外,只應使用分析純試劑和蒸餾水或同等純度水。丙酮、二氯甲烷、無水硫酸鈉、10%碳酸氫鈉溶液、過氧乙酸溶液。過氧化氫﹕乙酸=2﹕1。涕滅威砜標準儲備溶液

精密稱取涕滅威砜標準品50.0mg,置于50mL容量瓶中,加少量二氯甲烷溶解,用二氯甲烷稀釋到刻度。配成每毫升含涕滅威砜1.0mg的標準溶液。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定涕滅威砜標準使用溶液

吸取標準儲備溶液5.0mL,用二氯甲烷定容至50mL,該中間溶液濃度為0.10mg/mL。依次吸取中間溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL,以二氯甲烷分別定容至100mL,配成濃度為1.0、2.0、3.0、4.0、5.0μg/mL標準系列。

3.儀器電動振蕩器、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、凈化柱(在內(nèi)徑1.3cm×8cm層析柱中依次裝入1cm無水硫酸鈉,4g弗羅里硅土,lcm無水硫酸鈉)、氣相色譜儀(具有火焰光度檢測器)。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

4.操作方法

(1)樣品處理

①水果

樣品洗凈、擦干,取可食部分搗碎、混勻。稱取約25g試樣,精確至0.001g。置于250mL具塞錐形瓶中,加入100mL丙酮-水(3:1),振蕩0.5h。經(jīng)濾紙過濾,用50mL丙酮-水分三次沖洗錐形瓶及殘渣,合并濾液。在水浴45℃條件下減壓濃縮至約l00mL。樣液置于250mL分液漏斗中,加入5mL過氧乙酸溶液,振蕩0.5h。緩慢加入50mL碳酸氫鈉溶液,搖至無氣泡產(chǎn)生。用50、25、25mL二氯甲烷萃取三次,合并二氯甲烷,經(jīng)無水硫酸鈉干燥,在水浴45℃條件下減壓濃縮至1.0mL,待測定。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

②花生仁、糧谷等

樣品粉碎、混勻,按[4.(1)①]“稱取25g樣品,……經(jīng)無水硫酸鈉干燥?!辈僮?。萃取液濃縮至約20mL。

層析柱先用25mL甲苯-二氯甲烷(1:1)預洗

將上液轉(zhuǎn)入柱中,棄去流出部分,依次用50mL(2:98)、l00mL(1:1)丙酮-乙醚淋洗,收集、合并兩次淋洗液。在水浴45℃條件下減壓濃縮至近干,取下用氮氣吹干。加1.0mL二氯甲烷溶解殘渣,待測定。

(2)色譜條件

①色譜柱

玻璃柱:長lm,內(nèi)徑3mm;固定相:15%FFAP/ChromosorbWAW80~100目。

②檢測器

火焰光度檢測器,S濾光片。

③溫度

柱箱190℃;進樣口230℃;檢測器230℃。

④氣流

氮氣45mL/min;氫氣80mL/min;空氣l00mL/min。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

(3)測定根據(jù)氣相色譜儀靈敏度,取標準系列各濃度5~10μL分別注入氣相色譜儀。測得各濃度標準溶液的峰高,以進樣體積下的標準物含量(ng)為橫坐標,峰高(mm)為縱坐標繪制標準曲線。取樣品溶液5~10μL注入氣相色譜儀。測得涕滅威砜的峰高(mm),從標準曲線中查出相應的含量(ng)。(4)計算

式中X——樣品中涕滅威砜含量,mg/kg;

m——樣品峰在標準曲線中查得的相應含量,ng;

Vo——樣品液體積,mL;

W——稱樣量,g;

V1——進樣體積,μL;1000——單位換算系數(shù)。

5.精密度本方法相對標準差小于13%。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定四、食品中沙蠶毒素農(nóng)藥的測定主要介紹大米中殺蟲雙殘留量測定方法

1.原理大米樣品經(jīng)0.1mol/L鹽酸提取后,在堿性溶液中,轉(zhuǎn)化成沙蠶毒素,以三氯甲烷提取后,蒸除三氯甲烷,用甲醇定容至lmL,以FPD-GC測定。

2.試劑0.1mol/L鹽酸0.1mol/L氫氧化鈉0.1mol/L硫化鈉水溶液甲醇分析純,重蒸。三氯甲烷分析純,重蒸加無水乙醇,使含1%乙醇。無水乙醇分析純。無水硫酸鈉食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

殺蟲雙標準溶液精確稱取殺蟲雙23.8mg,以甲醇溶解,稀釋至100mL,每毫升中殺蟲雙含量相當于沙蠶毒素100μg。根據(jù)需要,吸取一定量上述標準溶液,以甲醇稀釋至一定體積,配制成應用液。殺蟲雙轉(zhuǎn)化:相當于沙蠶毒素4μg的殺蟲雙,按下述條件轉(zhuǎn)化,最終濃度為每毫升含2μg沙蠶毒素。(9)沙蠶毒素標準溶液精確稱取沙蠶毒素草酸鹽16.00mg,以甲醇溶解,稀釋至100mL,每毫升含沙蠶毒素100μg,根據(jù)需要,吸取一定量上述標準溶液,以甲醇稀釋至一定體積,配制成應用液。

3.儀器臺式離心機、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、玻璃蒸餾器、氮氣蒸發(fā)器、氣相色譜儀(具火焰光度檢測器,F(xiàn)PD)、微量注射器、一般玻璃儀器。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

4.測定步驟

(1)樣品處理

稱取大米樣品5g,加l0mL0.1mol/L鹽酸溶液,在振蕩器上振蕩30min,于1600r/min離心10min,將上清液倒于帶蓋量筒中,再以10mL0.1mol/L鹽酸洗滌樣品,如此重復三次。合并鹽酸提取液,調(diào)節(jié)pH8.5~9,加0.1mol/L硫化鈉溶液2mL放置過夜,加2倍樣品液體積的三氯甲烷于分液漏斗中,劇烈振搖1min,靜置分層。將三氯甲烷層經(jīng)無水硫酸鈉濾于三角瓶中,在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中45℃蒸除氯仿,至剩余少許時,立即取出,用甲醇定容至lmL,待測定。

(2)氣相色譜條件

①色譜柱3mm(內(nèi)徑)×2m玻璃柱;填裝涂有1.5%OV-17ChromosorbW(80~100目)的擔體。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

②溫度

柱溫160℃;

汽化室溫200℃;

FPD檢測器溫170℃。

③氣體速度

載氣(氮氣)流速70mL/min;

氫氣流速150mL/min;

空氣流速50mL/min。④其它條件

儀器靈敏度×102;衰減×32;紙速0.5cm/min。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

(3)測定按上述色譜條件調(diào)試儀器,待儀器穩(wěn)定后,用微量注射器注入樣品或標準液,以保留時間為定性指標。取殺蟲雙轉(zhuǎn)化后相當于0.5、1、2、3、4、5ng的沙蠶毒素,注入色譜儀中,測量峰高。以殺蟲雙含量為橫坐標,峰高為縱坐標,在雙對數(shù)坐標紙上繪制工作曲線,根據(jù)樣品的峰高定量。5.計算

式中

X——樣品中殺蟲雙含量,mg/kg;

B——測得樣品的峰高(或面積)值,查標準曲線后得到的沙蠶毒素量,ng;

V——定容體積,mL;

A——進樣量,μL;

m——樣品質(zhì)量,g。

殺蟲雙分子量為355,沙蠶毒素分子量為149,將測得的沙蠶毒素量乘以2.38,即為殺蟲雙含量。6.精密度大米樣品添加回收實驗結(jié)果的變異系數(shù)小于20%。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

五、食品中擬除蟲菊酯農(nóng)藥的測定

1.原理樣品中氯氰菊酯、氰戊菊酯和溴氰菊酯經(jīng)提取、凈化、濃縮后用電子捕獲-氣相色譜法測定。氯氰菊酯、氰戊菊酯和溴氰菊酯經(jīng)色譜柱分離后進入到電子捕獲檢測器中,便可分別測出其含量。經(jīng)放大器,把訊號放大用記錄器記錄下峰高或峰面積。利用被測物的峰高或峰面積與標準的峰高或峰面積比進行定量。

2.試劑石油醚分析純,30~60℃重蒸。丙酮分析純,重蒸。無水硫酸鈉分析純,550℃灼燒4h備用。層析中性氧化鋁550℃灼燒4h后備用,用前140℃烘烤1h,加3%水脫活。層析活性炭550℃灼燒4h后備用。脫脂棉經(jīng)正己烷洗滌后,干燥備用。農(nóng)藥標準品氯氰菊酯96%;氰戊菊酯94.3%;溴氰菊酯97.5%。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定標準液的配制

用重蒸石油醚或丙酮分別配制氯氰菊酯2×10-7g/mL、氰戊菊酯4×10-7g/mL、溴氰菊酯1×10-7g/mL的標準液。吸取10mL氯氰菊酯、10mL氰戊菊酯、5mL溴氰菊酯的標準液于25mL容量瓶中搖勻,即成為標準使用液,濃度為氯氰菊酯8×10-8g/mL、氰戊菊酯16×10-8g/mL、溴氰菊酯2×10-8g/mL。

3.儀器氣相色譜儀附電子捕獲檢測器、高速組織搗碎機、電動振蕩器、K-D濃縮器或恒溫水浴箱、具塞三角燒瓶、玻璃漏斗、10μL注射器。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

4.操作方法

(1)提取

①谷類

稱取10g粉碎的樣品,置于100mL具塞三角瓶中,加入石油醚20mL,振蕩30min或浸泡過夜,取出上清液2~4mL待過柱用(相當于1~2g樣品)。

②蔬菜類

稱取20g經(jīng)勻漿處理的樣品于250mL具塞三角瓶中,加入丙酮和石油醚各40mL搖勻,振蕩30min后讓其分層,取出上清液4mL待過柱用。

(2)凈化

①大米

用內(nèi)徑1.5cm、長25~30cm的玻璃層析柱,底端塞以經(jīng)處理的脫脂棉。依次從下至上加入1cm的無水硫酸鈉,3cm的層析用中性氧化鋁,2cm的無水硫酸鈉,然后以10mL石油醚淋洗柱子,棄去淋洗液,待石油醚層下降至無水硫酸鈉層時,迅速將樣品提取液加入,待其下降至無水硫酸鈉層時加入淋洗液淋洗,淋洗液用量25~30mL石油醚,收集濾液于尖底定容瓶中,最后以氮氣流吹,濃縮體積至lmL,供氣相色譜用。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

②面粉、玉米粉

所用凈化柱與[4.(2)①]相同,只是在中性氧化鋁層上邊加入0.01g層析活性炭粉(可視其顏色深淺適當增減層析炭粉的量)進行脫色凈化,操作同[4.(2)①]。

③蔬菜類

所用凈化柱與[4.(2)①]同,只是在中性氧化鋁層上加0.02~0.03g層析活性炭粉(可視其顏色深淺適當增減層析活性炭粉的量)進行脫色。淋洗液用量30~35mL石油醚,凈化操作同[4.(2)①]

(3)測定

用具有ECD的氣相色譜儀。

①色譜條件

a.色譜柱

玻璃柱3mm(內(nèi)徑)×1.5m或2m,內(nèi)填充3%OV~101/ChromosorbW(AW-DMCS)80~100目。

b.溫度

柱溫245℃,進樣口和檢測器260℃。

c.載氣

高純氮氣流速140mL/min(GC-5A型色譜儀),其它型號儀器自選流速。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

②結(jié)果計算

用外標法定量,計算公式如下。

式中

Cx——樣品中農(nóng)藥含量,mg/kg;

hx——樣品溶液峰高,mm;

Cs——標準溶液濃度,g/mL;

Qs——標準溶液進樣量,μL;

Vx——樣品的定容體積,mL;

hs——標準溶液峰高,mm;

m——樣品質(zhì)量,g;

Qx——樣品溶液的進樣量,μL。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定第二節(jié)食品中獸藥的測定

一、蜂蜜中四環(huán)素族抗生素殘留量的測定方法

1.原理樣品中四環(huán)素族抗生素經(jīng)Mcllvaine緩沖液提取后,用SEP-PAKCl8柱純化:四環(huán)素族三種抗生素四環(huán)素、土霉素及金霉素利用薄層層析生物檢測法進行分離和定性;以蠟樣芽孢桿菌為試驗菌株,用微生物管碟法進行定量檢測。

2.試劑所用試劑均為分析純,水為蒸餾水。(1)Mcllvaine緩沖液(pH4)稱取磷酸氫二鈉(Na2HPO4.12H2O)27.6g、檸檬酸(C6H8O7.H2O)12.9g、乙二胺四乙酸二鈉鹽37.2g,用水溶解后稀釋并定容至1000mL。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

(2)0.1mol/L磷酸鹽緩沖液(pH4.5)

稱取磷酸氫二鉀13.6g,用水溶解后稀釋并定容至1000mL,115℃滅菌30min,置4℃冰箱中保存。(3)5%乙二胺四乙酸二鈉鹽水溶液。

(4)WatersSEP-PAK、C18柱(或國產(chǎn)PT-C18柱)

用時先經(jīng)l0mL甲醇濾過活化,再用l0mL蒸餾水置換,然后用l0mL、5%乙二胺四乙酸二鈉鹽流過。

(5)標準抗生素

四環(huán)素、土霉素、金霉素標準品由衛(wèi)生部藥品生物制品檢定所提供。

(6)抗生素標準原液和稀釋液食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

①抗生素標準原液配制

精確稱取四環(huán)素、土霉素、金霉素標準品適量(按效價進行換算),用0.0lmol/L鹽酸溶解并定容至1000μg/mL,置4℃冰箱中(可使用7d)。

②抗生素標準稀釋液配制

臨用前取上述原液按1:0.8劑距用0.1mol/L磷酸鹽緩沖液逐步稀釋配制成標準稀釋液。制備四環(huán)素、土霉素標準曲線的標準濃度為0.16,0.21,0.26,0.32,0.40,0.50μg/mL,參考濃度為0.25μg/mL;制備金霉素標準曲線的標準濃度為0.033,0.041,0.051,0.064,0.08,0.10μg/mL,參考濃度為0.05μg/mL。定性試驗用標準液濃度四環(huán)素、土霉素為2μg/mL,金霉素為lμg/mL。(7)展開劑正丁醇-醋酸-水(4:1:5)。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

3.儀器

(1)隔水式恒溫箱

(2)冰箱(0~4℃)

(3)恒溫水浴

(4)高壓滅菌器

(5)旋轉(zhuǎn)式減壓蒸餾器

(6)離心機2000r/min。

(7)天平

感量0.1mg。

(8)層析缸

內(nèi)長20cm、寬15cm、高30cm。

(9)長方形培養(yǎng)皿1.5cm×8cm×23cm。

(10)層析紙7cm×22cm,中速濾紙。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

(11)微量注射器10μL、50μL。

(12)電吹風機

(13)游標卡尺

(14)吸管

容量為lmL和l0mL,標有0.1mL單位刻度。

(15)注射器

容量為20mL。

(16)平皿

內(nèi)徑為90mm,高16~17mm,底部平整光滑,具陶瓷蓋。

(17)不銹鋼小管(簡稱小管)

內(nèi)徑6.0mm0.1mm,外徑7.8mm0.1mm,高度l0mm0.1mm。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

4.培養(yǎng)基(1)菌種培養(yǎng)基胰蛋白胨10.0g瓊脂14~16g

牛肉浸膏5.0g蒸餾水1000mL

氯化鈉2.5g

將上述各成分混合于蒸餾水中,攪拌加熱至溶解,110℃滅菌30min,最終pH為7.2~7.4。(2)檢定用培養(yǎng)基胰蛋白胨5.0g瓊脂14~16g牛肉浸膏3.0g蒸餾水1000mL磷酸氫二鉀3.0g

將上述各成分混合于蒸餾水中,攪拌加熱至溶解,110℃滅菌30min,最終pH為6.5±0.1。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

5.試樣處理(1)定量試驗用樣液制備稱取混勻的蜂蜜樣品10.0g,加入30mLpH4.0的Mcllvaine緩沖液,攪拌均勻,待溶解后進行過濾,濾液分數(shù)次置于注射器中,用經(jīng)預處理的SEP-PAKCl8柱濾過,用50mL水洗柱,再用10mL甲醇洗脫,洗脫液經(jīng)40℃減壓濃縮蒸干后,準確加入pH4.5磷酸鹽緩沖液3~4mL溶解,備定量檢測用。(2)定性試驗用樣液制備稱取蜂蜜樣品5g,按5.(1)步驟處理,甲醇洗脫液經(jīng)40℃減壓濃縮蒸干后,用0.1mL甲醇溶解,備定性試驗用。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

6.菌液和檢定用平板的制備

(1)試驗菌種

蠟樣芽胞桿菌(Bacilluscereusvar.mycoides),菌號63301,由衛(wèi)生部藥品生物制品檢定所提供。

(2)菌液的制備

將菌種移種于盛有菌種用培養(yǎng)基的克氏瓶內(nèi),于37℃培養(yǎng)7d,使鏡檢芽胞數(shù)達85%,先用10mL滅菌水洗下菌苔,離心20min,棄去上清液,重復操作一次,再加10mL滅菌水于沉淀物中,混勻。然后,將此芽胞懸浮液置65℃恒溫水浴中加熱30min,從水浴中取出,于室溫下放置24h,再于65℃恒溫水浴中加熱30min,待冷后置4℃冰箱保存。用時可取此芽胞懸液以滅菌水稀釋10倍成稀菌液。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

(3)芽胞懸液用量的測定

把不同量的稀菌液加入檢定用培養(yǎng)基中,按本法進行操作,0.25μg/mL的四環(huán)素參考濃度可產(chǎn)生15mm以上的清晰、完整的抑菌圈,選擇出最適宜的芽胞懸液用量。一般為每100mL檢定用培養(yǎng)基加入0.2~0.5mL稀菌液。

(4)檢定用平板的制備

試驗用平皿內(nèi)預先鋪有20mL檢定培養(yǎng)基作為底層,將適量稀菌液(已于[6.(3)]中確定)加到溶化后冷卻至55~60℃的檢定用培養(yǎng)基中,混勻后往上述平皿內(nèi)加入5mL作為菌層。前后搖動平皿,使菌層均勻覆蓋于底層表面,置水平位置上,蓋上陶瓷蓋,待凝固后,每個平板的培養(yǎng)基表面放置6個小管,使小管在半徑2.3cm的圓面上成60°角的間距。所用平板需當天準備。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

7.定量試驗(1)標準曲線的制備

取3個檢定用平板為一組,6個標準濃度需要六組,在該組每個檢定用平板的3個間隔小管內(nèi)注滿一參考濃度液,在另3個小管內(nèi)注滿一標準濃度液,于37℃±1℃培養(yǎng)16h,然后測量參考濃度和標準濃度的抑菌圈直徑,求得各自9個數(shù)值的平均值,并計算出各組內(nèi)標準濃度與參考濃度抑菌圈直徑平均值的差值F,以標準濃度C為縱坐標,以相應的F值為橫坐標,在半對數(shù)坐標紙上繪制標準曲線。

食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

(2)樣品測定

每份樣品取3個檢定用平板,在每個平板上3個間隔的小管內(nèi)注滿0.25μg/mL四環(huán)素參考濃度(或0.25μg/mL土霉素或0.05ug/mL金霉素,視所含抗生素種類而定),另3個小管內(nèi)注滿被檢樣液,于37℃±1℃培養(yǎng)16h,測量參考濃度和被檢樣液的抑菌圈直徑,求得各自9個數(shù)值的平均值,并計算出被檢樣液與參考濃度抑菌圈直徑平均值的差值Ft。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

8.定性試驗

取層析用濾紙(7cm×22cm)均勻噴上0.1mol/L磷酸鹽緩沖液(pH4.5),于空氣中晾干、備用。在距濾紙底邊2.5cm起始線上,分別滴加l0μL,2μg/mL四環(huán)素、土霉素及1μg/mL金霉素標準稀釋液與定性試驗樣液,將濾紙掛于盛有展開劑[2.(7)]的層析缸中,以上行法展開,待溶劑前沿展至15cm處將濾紙取出,于空氣中晾干,貼在事先加有60mL含有試驗用菌菌層的長方形培養(yǎng)皿上,30min后移去濾紙,在37℃±1℃培養(yǎng)16h,由抑菌圈測得比移值,以確定被檢樣品中所含四環(huán)素族抗生素的種類。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

9.樣品中四環(huán)素族抗生素殘留量計算

根據(jù)被檢樣液與參考濃度抑菌圈直徑平均值的差值Ft,從該種抗生素標準曲線上查出??股氐臐舛萩t(μg/mL),樣品中若同時存在兩種以上四環(huán)素族抗生素時,除了四環(huán)素、金霉素共存以金霉素表示結(jié)果外,其余情況均以土霉素表示結(jié)果。樣品中四環(huán)素族抗生素殘留量按下式進行計算:

式中

X——樣品中四環(huán)素族抗生素殘留量,mg/kg;

ct——檢定用樣液中四環(huán)素族抗生素的濃度,μg/mL;

V——待檢定樣液的體積,mL;

m——樣品質(zhì)量,g。

食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

二、畜禽肉中土霉素、四環(huán)素、金霉素殘留量測定方法(高效液相色譜法)

1.原理樣品經(jīng)提取,微孔濾膜過濾后直接進樣,用反相色譜分離,紫外檢測器檢測,與標準比較定量,出峰順序為土霉素、四環(huán)素、金霉素。標準加入法定量。

2.試劑(1)乙腈(分析純)(2)0.0lmol/L磷酸二氫鈉溶液稱取1.56g(±0.0lg)磷酸二氫鈉(NaH2pH4·2H2O)溶于蒸餾水中,定容到100mL,經(jīng)微孔濾膜(0.45μm)過濾,備用。(3)土霉素(OTC)標準溶液稱取土霉素0.0100g(±0.0001g),用0.1mol/L鹽酸溶液每毫升含土霉素lmg。食品中農(nóng)藥及獸藥殘留的測定

(4)四環(huán)素(TC)標準溶液

稱取四環(huán)素0.0100g(±0.001g),用0.01mol/L鹽酸溶液溶解并定容10.00mL,此溶液每毫升含四環(huán)素lmg。

(5)金霉素(CTC)標準溶液

稱取金霉素0.0100g(±0.0001g),溶于蒸餾水并定容成10.00mL,此溶液每毫升含金霉素lmg。

以上標準品均按1000單位/mg折算。[2.(3)~2.(5)]溶液應于4℃以下保存,可使用1周。

(6)混合標準溶液

取[2.(3)、2.(4)]標準溶液各1.00mL,取[2.(5)]標準溶液2.00mL,置于10mL容量瓶中,加蒸餾水至刻度。此溶液每毫升含土霉素、四環(huán)素各0.1mg,金霉素0.2mg,

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