高壓蒸汽滅菌課件

實(shí)驗(yàn)二

培養(yǎng)基的配制和滅菌實(shí)驗(yàn)二

培養(yǎng)基的配制和滅菌1一、目的要求了解培養(yǎng)基的配制原理和方法，掌握其配制過(guò)程。學(xué)習(xí)并掌握高壓蒸汽滅菌的原理和操作技術(shù)。一、目的要求了解培養(yǎng)基的配制原理和方法，掌握其配制過(guò)程。2二、實(shí)驗(yàn)原理由人工方法配制的適合微生物生長(zhǎng)繁殖或積累代謝產(chǎn)物的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)稱為培養(yǎng)基。主要用于微生物的分離、培養(yǎng)、鑒定、菌種保藏或積累代謝產(chǎn)物等方面。不同微生物的生長(zhǎng)繁殖需要不同的環(huán)境、營(yíng)養(yǎng)和酸堿條件，因此需要配制不同的培養(yǎng)基。二、實(shí)驗(yàn)原理由人工方法配制的適合微生物生長(zhǎng)繁殖或積累代謝產(chǎn)物3培養(yǎng)基的種類從培養(yǎng)基的組成成分可分為:1.合成培養(yǎng)基：由各種純化學(xué)物質(zhì)按一定比例配制而成。2.半合成培養(yǎng)基：一部分純化學(xué)物質(zhì)和一部分天然物質(zhì)配制而成。3.天然培養(yǎng)基：利用天然來(lái)源的有機(jī)物配制而成。從培養(yǎng)基的物理狀態(tài)可分為:

1.液體培養(yǎng)基：不加凝固劑。2.固體培養(yǎng)基：加入2%左右的凝固劑。3.半固體培養(yǎng)基：加入0.2—0.5%凝固劑。從培養(yǎng)基的用途可分為:

1.選擇培養(yǎng)基：加入目的菌特別需要的或抑制非目的菌生長(zhǎng)的物質(zhì)。2.鑒別培養(yǎng)基：加入能夠和目的菌的代謝產(chǎn)物發(fā)生可見(jiàn)反應(yīng)的物質(zhì)。培養(yǎng)基的種類從培養(yǎng)基的組成成分可分為:4高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌法是微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)、發(fā)酵工業(yè)、醫(yī)療保健以及食品檢測(cè)中最常用的一種滅菌方法。高壓蒸汽滅菌是把待滅菌的物品放在一個(gè)可密閉的高壓蒸汽滅菌鍋中進(jìn)行的，通過(guò)加熱，產(chǎn)生大量蒸汽使其中壓力升高，從而使沸點(diǎn)增高，得到高于100℃的溫度，導(dǎo)致菌體蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。當(dāng)蒸汽壓達(dá)到1.055kg/cm2時(shí)，鍋內(nèi)溫度可達(dá)到121℃，一般維持20min,即可殺死一切微生物的營(yíng)養(yǎng)體或芽孢，而達(dá)到滅菌目的。注意：高壓蒸汽滅菌開(kāi)始之前，要將鍋內(nèi)的冷空氣排盡。高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌法是微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)、發(fā)酵工業(yè)、醫(yī)療保健5高壓蒸汽滅菌課件6三、實(shí)驗(yàn)材料各種藥品：牛肉膏、蛋白胨、瓊脂等；稱量工具：托盤天平、量筒、稱量紙、角匙；分裝工具：鐵架臺(tái)、漏斗、pH試紙；包扎工具：牛皮紙、扎繩、膠塞。三、實(shí)驗(yàn)材料各種藥品：牛肉膏、蛋白胨、瓊脂等；7四、實(shí)驗(yàn)步驟1、細(xì)菌培養(yǎng)基（牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基）：600ml/組配方：NaCL0.5％、蛋白胨1％、牛肉膏0.3％，瓊脂2.0％，

pH7.5(使用1NNaOH和1NHCL調(diào)節(jié))。配制:計(jì)算----稱量及溶化----定容----調(diào)pH----加瓊脂

分裝：1)分別稱取2%瓊脂加入2個(gè)三角瓶，后各分裝入150ml培養(yǎng)基，加棉塞，包扎。2）將剩余的300ml培養(yǎng)基中加入2%瓊脂，加熱溶化，分裝大試管（裝量為試管長(zhǎng)度的1/4～1/5），加塞，包扎。（一）培養(yǎng)基的配制與分裝四、實(shí)驗(yàn)步驟1、細(xì)菌培養(yǎng)基（牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基）：600m82、霉菌培養(yǎng)基（察氏培養(yǎng)基）300ml/組

配方：

K2HPO40.1%MgSO4.7H2O0.05%KCL0.05%FeSO40.001%（加2滴即可）NaNO30.2%蔗糖3%瓊脂2.0％pH自然

配制：

計(jì)算----稱量及溶化----定容----加瓊脂

分裝：各稱取2%瓊脂加入2個(gè)三角瓶中，再將培養(yǎng)基平均分裝在2個(gè)三角瓶中，加塞，包扎。2、霉菌培養(yǎng)基（察氏培養(yǎng)基）300ml/組9高壓蒸汽滅菌課件10

★取7支小試管各加生理鹽水4.5ml,包扎滅菌。

★取1只三角瓶加90ml蒸餾水及10~15粒玻璃球，包扎滅菌。（二）無(wú)菌水的制備★取7支小試管各加生理鹽水4.5ml,★取111.打開(kāi)鍋蓋，將包扎好的物品放入滅菌器內(nèi)，蓋緊鍋蓋。2.接通電源，打開(kāi)加水閥，加水至高水位，調(diào)節(jié)至所需溫度（1210C）和時(shí)間（20min

），進(jìn)行加熱。3.排除高壓鍋內(nèi)的冷空氣，可將排氣閥打開(kāi)，待排出大量蒸汽3-5min后關(guān)閉排氣閥；4.升溫至1210C后，自動(dòng)控制并保持恒溫

20min。（對(duì)熱不穩(wěn)定的培養(yǎng)基如含有葡萄糖、氨基酸等物時(shí)，應(yīng)適當(dāng)降低壓力，延長(zhǎng)時(shí)間。）5.降溫：滅菌時(shí)間到后，自動(dòng)切斷電源，開(kāi)始降溫，6.取物：待壓力降至零時(shí)，打開(kāi)排氣閥，然后打開(kāi)滅菌器蓋，取出物品。（三）高壓蒸汽滅菌1.打開(kāi)鍋蓋，將包扎好的物品放入滅菌器內(nèi)，蓋緊鍋蓋。（三）高12

★將5支三角瓶放回儀器櫥中，小試管放到小燒杯中，不能放倒。

★將滅好菌的試管，趁熱擺成斜面，備用。（四）制作試管斜面及其他善后工作★將5支三角瓶放回儀器櫥中