血絡(luò)復(fù)欣顆粒對大鼠頸動脈血栓形成及腸系膜微循環(huán)障礙的影響

血絡(luò)復(fù)欣顆粒對大鼠頸動脈血栓形成及腸系膜微循環(huán)障礙的影響

血絡(luò)回歸是遼寧省中醫(yī)藥大學(xué)著名的中醫(yī)臨床經(jīng)驗(yàn)處方。具有去粘液和抗瘀藥的功效，用于治療由粘液和血瘀酶引起的高血脂癥。本文重點(diǎn)研究了血絡(luò)復(fù)欣對電刺激大鼠頸動脈導(dǎo)致血栓形成及對小鼠腸系膜微循環(huán)的影響,并分別與復(fù)方血栓通膠囊和曲克蘆丁片及消旋山莨菪堿片和丹蔞片進(jìn)行了比較,為臨床合理用藥提供理論依據(jù)。1材料表面1.1顆粒、設(shè)膠囊、通膠囊血絡(luò)復(fù)欣顆粒,由沙棘10g,槐花12g,黃芪8g組成,將以上中藥煎煮2次,合并濾液濃縮至稠膏狀放冷,加糊精淀粉制成顆粒,遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬二院提供,批號090821;復(fù)方血栓通膠囊,廣東眾生藥業(yè)股份有限公司,批號091213;曲克蘆丁片,亞寶藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司,批號091209;消旋山莨菪堿片,杭州民生藥業(yè)集團(tuán)有限公司,批號T08H290;丹蔞片,吉林康乃爾藥業(yè),批號20090501。1.3小鼠性別、體重Wistar大鼠,雌雄各半,體重180~220g;昆明種小鼠,雌雄各半,體重18~22g;購于北京中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心,許可證號SCXK-(軍)2007-004。1.4syxk觀察室溫度與濕度遼寧省中醫(yī)藥研究院實(shí)驗(yàn)動物中心觀察飼養(yǎng)1周后使用。許可證號SYXK(遼)2003-0010。觀察室溫度(20~23)℃,相對濕度50%~65%。顆粒飼料,沈陽前民試驗(yàn)動物飼料廠提供。1.5儀器BW-YLS-14A小動物血栓生成儀,濟(jì)南益延科技發(fā)展有限公司;BI-2000醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng),成都泰盟科技有限公司。2方法2.1單次給藥和大鼠試驗(yàn)取體重180~220g的Wistar大鼠60只,按性別體重隨機(jī)分為6組,每組10只,雌雄各5只,分別為空白對照組,血絡(luò)復(fù)欣低、中、高(5.2,10.4,20.8g·kg-1)3個劑量組,中藥陽性對照復(fù)方血栓通組0.4g·kg-1、西藥陽性對照曲克蘆丁片組48.6mg·kg-1。每天ig給藥1次,給藥體積均為20mL·kg-1,空白對照組ig給予同體積蒸餾水,連續(xù)給藥7d。實(shí)驗(yàn)前動物禁食不禁水16h,末次給藥后30min,大鼠50mg·kg-1戊巴比妥鈉ip麻醉,仰臥位固定于小動物血栓生成儀鼠板上,頸部正中切口,分離右側(cè)頸總動脈約15mm,根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果,設(shè)置剌激電流1.2mA,剌激時間5min,間隔4s記錄1次血管栓塞率,以血管栓塞率作為評價大鼠頸動脈血栓形成的指標(biāo)。將剝離好的頸總動脈勾入探頭的溝槽內(nèi),調(diào)整好高度和方向,使探頭信號取值在大于一級的100而小于三級的100之內(nèi)進(jìn)行刺激測定,刺激結(jié)束后記錄結(jié)果。2.2動物分組、給藥及動力學(xué)指標(biāo)檢測取昆明種小鼠60只,體重18~22g的,按性別體重隨機(jī)分為6組,每組10只,雌雄各5只,分別為空白對照組,血絡(luò)復(fù)欣低、中、高(7.5,15.0,30.0g·kg-1)3個劑量組,中藥陽性對照丹蔞片組0.58g·kg-1、西藥陽性對照消旋山莨菪堿片組3.9mg·kg-1。每天ig給藥1次,給藥體積均為20mL·kg-1,空白對照組ig給予同體積蒸餾水,連續(xù)給藥7d。實(shí)驗(yàn)前動物禁食不禁水16h,末次給藥后30min,小鼠50mg·kg-1戊巴比妥鈉ip麻醉,右下腹部剪開2cm切口,拉出一段空腸袢平鋪于盛有37℃洛氏液恒溫有機(jī)玻璃灌流小池平臺上,顯微鏡6×10倍放大觀察微動脈,固定視野,通過BI-2000醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)在電腦上記錄相應(yīng)指標(biāo),于鏡下觀察給藥前的血管入口直徑和出口直徑,流速,流態(tài)(線流5分、線粒流4分、粒線流3、粒流2分、擺流1分、停止0分),然后記錄給予腎上腺素(50mg·L-1,15μL/只)后2min和8min時的血管出口直徑,入口直徑,流速和流態(tài)。以血管出口直徑和入口直徑平均值,流速和流態(tài)為指標(biāo),檢驗(yàn)比較給藥前后的差異。2.3統(tǒng)計處理采用Excel軟件處理數(shù)據(jù),組間比較采用t檢驗(yàn),以P<0.05及P<0.01表示組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義。3結(jié)果3.1對大鼠頸動脈栓塞的影響結(jié)果見表1,血絡(luò)復(fù)欣低、中、高3個劑量組,中藥陽性對照藥復(fù)方血栓通組及西藥陽性對照藥曲克蘆丁片組均顯著降低電刺激引起的大鼠頸動脈栓塞率,與空白對照組比較差異顯著(P<0.05,P<0.01)。表明血絡(luò)復(fù)欣可使電刺激引起的大鼠血栓栓塞率明顯下降,具有活血作用。3.2各組大鼠輸注后2min和8min時血管直徑的變化結(jié)果見表2,血絡(luò)復(fù)欣低、中、高3個劑量組,中藥陽性對照藥丹蔞片組及西藥陽性對照藥消旋山莨菪堿片組均顯著改善給予腎上腺素后2min和8min時的血管直徑,流速和流態(tài),與空白對照組及滴加腎上腺素前比較均有顯著性差異(P<0.05,P<0.01)。表明血絡(luò)復(fù)欣對腎上腺素引起的微循環(huán)障礙具有明顯的改善作用。4血絡(luò)復(fù)欣、通利療血栓是在血管內(nèi)皮損傷;凝血、抗凝、纖溶系統(tǒng);血小板黏附,聚集和釋放反應(yīng)及凝血活性增高等多種因素綜合作用下形成的。近年來研究表明血栓形成及微循環(huán)障礙與許多嚴(yán)重疾病如高血脂、冠心病、腦梗死等心腦血管疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。電刺激大鼠頸總動脈可使血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷,內(nèi)皮下膠原暴露,血小板與之接觸而被激活和黏附,促使血栓形成;同時電刺激頸總動脈可激活Ⅻ因子以及損傷的內(nèi)皮細(xì)胞釋放組織因子,啟動內(nèi)源性和外源性凝血途徑,使凝血因子大量激活,血流速度緩慢,從而加重血栓的形成。而微循環(huán)障礙主要表現(xiàn)在微血流緩慢或瘀滯,微血管縮窄或閉塞等。血絡(luò)復(fù)欣是多年臨床經(jīng)驗(yàn)方劑,用于治療痰濁瘀阻證引起的高血脂癥,處方中丹參、沙棘、山楂具有活血祛瘀的作用;栝蔞具有清熱化痰之功效;何首烏具有促進(jìn)纖維蛋白溶解活性的作用;與其他中藥相輔使用共奏化痰祛瘀之功效。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明血絡(luò)復(fù)欣可使電刺激引起的大鼠血栓栓塞率明顯下降,具有預(yù)防血栓形成的作用;血絡(luò)復(fù)欣顯著改善給予腎上腺素后的血管直徑,流速和流態(tài),具有明顯改善小鼠空腸局部微循環(huán)障礙的作用。前期研究了血絡(luò)復(fù)欣對急性血瘀證大鼠的血流變學(xué)的改善作用,本試驗(yàn)從血絡(luò)復(fù)欣對大鼠頸動脈血栓形成的影響,對小鼠腸系膜微循環(huán)障礙的影響進(jìn)行了研究,從抗血栓形