微生物與免疫學(xué)01 實驗一 微生物培養(yǎng)基的配制滅菌及純培養(yǎng)

實驗一微生物培養(yǎng)基的配制和滅菌及純培養(yǎng)一、微生物培養(yǎng)基的配制和滅菌（不做）目的要求實驗材料實驗程序1、目的了解培養(yǎng)基的配制原理和方法，掌握其配制過程。了解幾種滅菌方法，掌握干熱滅菌法和加壓蒸汽滅菌法的原理及其使用方法。2、材料和器皿主要藥品：牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂、營養(yǎng)瓊脂等。儀器：高壓蒸汽滅菌器、恒溫干熱滅菌箱、紫外線殺菌燈。其它：天平、藥匙、電爐、1NHCl、1NNaOH、pH試紙、三角燒瓶、量筒、玻棒、試管、培養(yǎng)皿、吸管、牛皮紙、紗繩、硅膠塞、標(biāo)簽等。3、方法和步驟培養(yǎng)基的配制培養(yǎng)基和玻璃器材的滅菌方法培養(yǎng)基的概念及種類培養(yǎng)基的配方、配制步驟（1）培養(yǎng)基的配制培養(yǎng)基是指由人工配制的、適合微生物生長繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物用的混合營養(yǎng)料。培養(yǎng)基的介紹碳源、氮源、無機鹽、能源、生長因子、水營養(yǎng)物質(zhì)的濃度要適宜營養(yǎng)物質(zhì)之間的配比要適宜培養(yǎng)基的pH值、滲透壓、水活度和氧化還原電勢等物理化學(xué)條件要適宜。細菌：pH7.0~8.0放線菌：pH7.5~8.5酵母菌：pH3.8~6.0霉菌：pH4.0~5.8藻類：pH6.0~7.0原生動物：pH6.0~8.0初始pH通常培養(yǎng)條件：培養(yǎng)基的種類按照培養(yǎng)基的物理狀態(tài)可分為1.液體培養(yǎng)基：不加凝固劑的液體狀態(tài)培養(yǎng)基。2.固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入2%左右的凝固劑的固體狀態(tài)的培養(yǎng)基。3.半固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入0.2—0.5%凝固劑而成的半固體狀培養(yǎng)基。瓊脂是最優(yōu)良的凝固劑，自1880年代開始用于配制微生物培養(yǎng)基以來，至今經(jīng)久不衰。實驗室的常用培養(yǎng)基：細菌：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基；放線菌：高氏1號合成培養(yǎng)基培養(yǎng)；酵母菌：麥芽汁培養(yǎng)基；霉菌：查氏合成培養(yǎng)基；培養(yǎng)基的配制配方、配料加熱溶解調(diào)pH(略)過濾（略）分裝(倒平板不分裝）滅菌包扎(試管放在燒杯)擺斜面、倒平板貯存牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配制1、液體培養(yǎng)基2、固體培養(yǎng)基3、半固體培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基配方(P.78)：牛肉膏0.3g蛋白胨1g氯化鈉0.5g瓊脂1.5g水100mLpH7.2~7.4滅菌121℃，20min牛肉膏蛋白胨半固體培養(yǎng)基配方：

瓊脂0.3g牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基配方：

瓊脂0g牛肉膏蛋白胨營養(yǎng)瓊脂：按照配方生產(chǎn)的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，屬于固體培養(yǎng)基。今天固體培養(yǎng)基用營養(yǎng)瓊脂。液體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基按照上述配方稱量。配制步驟：P.78任何一種培養(yǎng)基一經(jīng)制成就應(yīng)及時徹底滅菌，以備純培養(yǎng)用。一般培養(yǎng)基的滅菌采用高壓蒸汽滅菌。常用的滅菌的方法有：干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌、常壓蒸汽滅菌、常壓間歇式滅菌超高溫滅菌、過濾除菌、輻射滅菌、化學(xué)藥品滅菌等方法。本實驗培養(yǎng)基的滅菌常使用的是高壓蒸汽滅菌，它是利用高溫濕熱空氣使菌體蛋白質(zhì)凝固變性而達到滅菌的。P.90

（2）培養(yǎng)基和玻璃器材的滅菌方法高壓蒸氣滅菌一般培養(yǎng)基:

121.3℃,15-30min

含糖培養(yǎng)基:

112.6℃,15-30min

培養(yǎng)基的滅菌器皿的滅菌：

干熱空氣：160℃，2小時無菌室的消毒：

紫外光化學(xué)藥物熏蒸（苯酚；高錳酸鉀+甲醛）二、微生物的純培養(yǎng)

（微生物的培養(yǎng)特征）

1、實驗?zāi)康?）掌握常用的分離純化微生物的基本操作技術(shù)：平板劃線法；2）掌握微生物無菌操作技術(shù)；3）熟悉不同微生物在固體斜面、半固體和液體培養(yǎng)基上的生長特征。2、實驗原理1）微生物在自然界中無處不在，尤其在土壤中存在極其豐富。但自然界中的微生物都以混雜狀態(tài)存在。要研究某種微生物的性質(zhì)，首先要獲得這種微生物的純培養(yǎng)物。2）在固體平板、固體斜面、半固體和液體培養(yǎng)基上，不同的微生物有其固有的培養(yǎng)特征。這些培養(yǎng)特征可以作為微生物分類鑒定的指標(biāo)。今天接種的菌種：枯草桿菌

芽孢桿菌屬的一種。單