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實驗室常用載體介紹載體構(gòu)建的基本原理1.TA克隆(T4連接酶)

Promega的T-easy載體（pGEM-TEasy）TAKRAT載體(pMD18-T)2.TOPO

TA克隆(pCR8/GW/TOPO)定向克隆(pENTR)3.酶切連接

實驗室常用4.Gateway技術(shù)TOPO異構(gòu)酶Gateway?技術(shù)基于清楚了解的λ噬菌體位點特異重組系統(tǒng)(attB+attP；attL+attR)。BP反應(yīng)是DNA片段或者包含attB位點的表達克隆與包含attP位點的供載體（donorvector）之間進行的反應(yīng)。BP反應(yīng)產(chǎn)生入門克隆。LR反應(yīng)是含attL位點的入門克隆和包含attR位點的目的載體之間的重組反應(yīng)。LR反應(yīng)產(chǎn)生表達克隆。表達克隆包含目的基因和目的載體特異的啟動子或者一些元件。Gateway?技術(shù)1.創(chuàng)建入門克隆，通過PCR或傳統(tǒng)的克隆方法將目的基因克隆進入門載體。2.混合包含目的基因的入門克隆和合適的目的載體及Gateway?LRClonase?酶，產(chǎn)生表達克隆。致死基因：DB3.1GatewayattB引物attB15’-GGGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTNN-3’

attB25’-GGGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTN-3’Prolinerichproteinlikeprotein(PRPL)SenseprimerGGGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTATGAACATAAGCCCCCTGTCAntisenseprimerGGGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTCCATAAGCACTCTCGCTAGT酶切連接載體超表達

pCAMBIA2300S啟動子

pBINm-gfp5-ER和pBI121Gateway技術(shù)載體超表達

pGWB401pGWB501pGWB402pGWB502pGWB402ΩpGWB502Ω可能都要做融合蛋白了，與gfp或者his標簽，這樣以后就可以做WESTERN了。這邊他

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