中藥新藥研發(fā)中的中醫(yī)動(dòng)物模型研究

中藥新藥研發(fā)中的中醫(yī)動(dòng)物模型研究

中醫(yī)動(dòng)物模型是研究中醫(yī)證候、中醫(yī)西藥藥理的重要方法。中醫(yī)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)從古代即有記載,但多為簡單的藥效與毒性試驗(yàn)。中醫(yī)動(dòng)物模型的研究始于60年代,經(jīng)40年的研究,取得了一定的成績,但存在的問題也較多。為此,我們將檢索到多年來研制的證的動(dòng)物模型46種及197個(gè)造模方法進(jìn)行了分析研究,并總結(jié)如下。1模型成功關(guān)鍵影響因素造模因素和方法有目的、有依據(jù)的選擇是模型能否成功的關(guān)鍵。研究發(fā)現(xiàn),中醫(yī)動(dòng)物模型建立的因素,可歸納為中醫(yī)傳統(tǒng)病因因素、西醫(yī)疾病造模因素及其兩者的結(jié)合。1.1其他動(dòng)物模型資料中傳統(tǒng)病因模型有16種,造模方法43種,占34.8%,其中涉及臟腑的模型較多。如恐傷腎的腎虛證動(dòng)物模型,飲食失節(jié)的脾(胃)虛證動(dòng)物模型,睡眠剝奪法心虛證動(dòng)物模型,模具法激怒肝郁證動(dòng)物模型等。其他有氣、血、陰、陽、痰飲、血瘀證(風(fēng)寒、熱壅、氣虛、血虛等)、暑風(fēng)、濕熱下注、食積等動(dòng)物模型。此外,還有雙因素或多因素造模法,如勞倦過度加飲食失節(jié)或勞倦過度加飲食失節(jié)加苦寒瀉下脾虛證動(dòng)物模型等。這些模型的共同特點(diǎn)是依據(jù)中醫(yī)理論,如“飲食勞倦則傷脾”、“勞則氣耗”、“恐懼而不解則傷精”、“血為熱搏,留于經(jīng)絡(luò)”、“氣有余便是火”、“怒傷肝”等,確定了傳統(tǒng)造模因素及其可能引起的病理變化,圍繞該思路進(jìn)行癥狀、體征、理化指標(biāo)的觀察,或選擇病因相關(guān)的一組治療藥物進(jìn)行驗(yàn)證。若能引起指標(biāo)變化,就判定病因模型制作成功。但是采用傳統(tǒng)造模因素有如下局限性。1.1.1中醫(yī)證候的病因理論上講,某一證候動(dòng)物模型的造模因子應(yīng)當(dāng)符合該證候的中醫(yī)傳統(tǒng)病因,這是合理的。所以,已有的中醫(yī)動(dòng)物模型建立的思路和方法多以此為切入點(diǎn)。但目前學(xué)術(shù)界對中醫(yī)動(dòng)物模型爭議較大,且大多數(shù)集中在造模因素上。中醫(yī)在一個(gè)階段的證候所得病因,主要以“審癥求因”獲得,即多從臨床辨識而來。況且,由于當(dāng)時(shí)科學(xué)檢測技術(shù)和手段的滯后,對引起病證的真正病因尚不能弄清楚,因此,“審癥求因”后的病因并不一定是疾病或證候產(chǎn)生的原發(fā)病因。且傳統(tǒng)病因造模時(shí)作用時(shí)間、施加強(qiáng)度均不宜控制。此外,綜合性的病因與機(jī)體內(nèi)在因素相互作用,是導(dǎo)致中醫(yī)臨床復(fù)雜證候的一個(gè)特點(diǎn)。因此,模擬中醫(yī)病因施加于動(dòng)物建造中醫(yī)證候模型的許多條件控制是比較困難的,確定動(dòng)物模型證的屬性值得深思。1.1.2中醫(yī)病因與動(dòng)物模型的關(guān)系中醫(yī)傳統(tǒng)病因多為非特異的,一種病因可致多種病證,多種病因又可致同一種證。而制作中醫(yī)動(dòng)物模型的病因多半是事先確定的,如飲食不節(jié)的脾虛證、食積等模型,情志刺激引起的腎精不足、肝氣郁結(jié)模型,勞倦過度可引起脾氣虛、血瘀證等動(dòng)物模型。事實(shí)上飲食不節(jié)、情志刺激、勞倦過度,往往是脾虛、腎虛、心虛等共同致病因素。由此可知,中醫(yī)病因與動(dòng)物模型的病因很難相互吻合,與傳統(tǒng)病因相似的造模因素可能造不出所需的證候模型。相反,如腺嘌呤或雌激素所致性腺功能改變、DNA合成抑制及老年鼠均可引起腎陽虛樣的改變。因此,在進(jìn)行中醫(yī)證候動(dòng)物模型的研制過程中,并不一定刻板地要求造模因素與傳統(tǒng)病因相符,只要模型的病理變化符合或能揭示中醫(yī)證候特征即為一個(gè)較理想的動(dòng)物模型。1.2造腎模型的建立在中醫(yī)模型中,借用現(xiàn)代醫(yī)學(xué)方法建造證的模型有27種,造模方法達(dá)150種。如用乙酰基苯肼、馬利蘭、苯中毒、絲裂霉素等造血虛模型有8種,用不同劑量氫化可的松、地塞米松、強(qiáng)的松龍、甲狀腺素及腎上腺切處法等造腎虛模型16種等。依據(jù)其病理損害,并進(jìn)行癥狀、體征和理化指標(biāo)變化,或用一組藥物反證能改善,便予以證屬性的認(rèn)定。但是由于一種模型的造模因素較多而引起的病理變化有所不同,所以這種認(rèn)定是模糊的,是該類模型存在的共同問題。2中醫(yī)證與中醫(yī)證的關(guān)系證是存在的,盡管中醫(yī)證候標(biāo)準(zhǔn)化、客觀化的問題仍在探索之中,但其有賴以確立的診斷條件。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的一些檢測指標(biāo)與中醫(yī)證之間一定具有相關(guān)性,也就是說,某些客觀指標(biāo)可能作為證屬性認(rèn)定的診斷條件。檢索到的資科顯示,證的模型46種,但造模方法達(dá)197種,觀察指標(biāo)1860個(gè),且造模方法、指標(biāo)等的選擇帶有主觀色彩,多而分?jǐn)?shù)。2.1有苦寒瀉下,有苦寒瀉下,有苦寒瀉下,有苦寒瀉下科研人員在研制中醫(yī)證的動(dòng)物模型中,很注重傳統(tǒng)病因的挖掘,其依據(jù)主要依賴于古醫(yī)學(xué)的記載。如脾虛證模型傳統(tǒng)病因的思路,源于“苦寒之藥傷及脾胃”,“饑餒致傷中氣”,“飲食失節(jié)、甘肥過度、脾胃乃傷”,“勞體勞倦則脾病”,“脾虛忌下、降泄、破氣”等,從而有苦寒瀉下,限制營養(yǎng),飲食失節(jié),耗氣、破氣等單因素或復(fù)合因素建造脾虛模型,再加上用現(xiàn)代醫(yī)學(xué)方法建立的模型,從而一個(gè)脾虛證的造模方法達(dá)24種。同理,其他如腎虛造模方法32種(腎陽虛21種),皿瘀證23種,血虛證12種等。且多數(shù)未對每種造模方法評價(jià)體系及適用范圍進(jìn)行客觀的闡述,能應(yīng)用者甚少。2.2直接臨床診斷依據(jù)由于造模方法雜多,所以據(jù)此擬選的指標(biāo)亦個(gè)少,如脾虛證80余個(gè),腎虛證100個(gè)(腎陽虛證68個(gè)),血瘀證110余個(gè),血虛證50余個(gè)等。一旦發(fā)現(xiàn)這些指標(biāo)異?；蛞唤M方藥能糾正這一異常狀態(tài),便對模型證的屬性予以結(jié)論性的確認(rèn)。但其中有直接臨床診斷依據(jù)的不足20%,此外指標(biāo)的陽性率為94%,而對指標(biāo)在證型中特異性的強(qiáng)弱一概未去進(jìn)一步的剔選。這樣在應(yīng)用中出現(xiàn)了證與指標(biāo)選擇的困惑,客觀化、標(biāo)準(zhǔn)化的問題就更難評價(jià)了。2.3誘惑恢復(fù)治療在模型制作過程中,致病因素的作用時(shí)間、強(qiáng)度等難以控制,過強(qiáng)雖有表現(xiàn)但并不一定是病因相關(guān)之證,過弱則或無表現(xiàn),惑一撤除因素即可恢復(fù)。有些模型用外科方法建造,如結(jié)扎大腦中動(dòng)脈所致腦缺血血瘀模型等,屬不可逆的難以復(fù)健。3臨床對于模型證屬性的認(rèn)定沒有明確標(biāo)準(zhǔn)3.1缺少嚴(yán)謹(jǐn)?shù)摹⑾到y(tǒng)的診斷在造模后有見一癥或數(shù)癥后即予以模型證屬性的認(rèn)定。證的臨床診斷主要依靠癥狀學(xué),傳統(tǒng)病因下證候模型或許通過其特有的征象能表現(xiàn)出相應(yīng)的證,但在多數(shù)證模型的研究資料中,多注重病因,忽視了對模型動(dòng)物的辨證診斷,很少有對癥狀、體征、理化指標(biāo)與藥物反證進(jìn)行系統(tǒng)性的考察。雖然亦有驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn),但就動(dòng)物表現(xiàn)而言,不同證有相同的征象,如不同糖皮質(zhì)激素所致小鼠腎陽虛證模型,動(dòng)物表現(xiàn)毛發(fā)疏松、消瘦、卷曲拱背、神萎少動(dòng)、體溫下降、死亡率高?？刂骑嬍撤ㄋ茉鞖馓撟C模型,耗氣破氣脾虛證模型,乙?；诫卵撟C動(dòng)物模型,強(qiáng)的松加SO2熏法肺虛證模型等,均有上述類似表現(xiàn),有人疑似是藥物毒性反應(yīng)。因此,僅憑臨床表現(xiàn)對模型證屬性的認(rèn)定是不確切的。不可否認(rèn),人與動(dòng)物之間存在著較大的差異,中醫(yī)辨證是經(jīng)過長期經(jīng)驗(yàn)總結(jié)的結(jié)果,在人與人之間已經(jīng)存在著差異,那么將這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)用于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物身上,無疑會(huì)產(chǎn)生更大的差異。此外,在臨床上中西醫(yī)的主訴記錄多是主癥,屬于問診的內(nèi)容,同時(shí)舌脈亦是臨床辨證的一項(xiàng)重要指征,而在動(dòng)物身上如何體現(xiàn)呢?難度是可想而知的。所以,無論在臨床還是實(shí)驗(yàn)研究,都必須把握疾病表現(xiàn)的整體實(shí)證觀念,將臨床實(shí)證與實(shí)驗(yàn)實(shí)證信息緊密結(jié)合,須對模型進(jìn)行系統(tǒng)、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)脑\斷。3.2缺少觀察指標(biāo)定量或半定量的判斷,更缺少證的鑒別診斷這樣使每項(xiàng)指標(biāo)或每一類指標(biāo)在證的貢獻(xiàn)度難以闡明,導(dǎo)致上述事例中不同證有相同的表現(xiàn)。3.3缺少造模成功率、死亡率及統(tǒng)計(jì)方法的客觀評述3.4與臨床已形成的全國辨證標(biāo)準(zhǔn)脫節(jié)明顯,注重基礎(chǔ),疏于臨床3.5方藥對模型證屬性的判斷是模糊的。如在研究胃潰瘍模型中,李氏用理中湯抗實(shí)驗(yàn)性大鼠胃潰瘍觀察中,證實(shí)該模型為脾陽虛證或脾胃虛寒證,郭氏用三七賊芨散認(rèn)為,該模型為血瘀證,陳氏用一貫煎反證該模型為肝腎陰虛兼肝氣不舒證等。這樣在應(yīng)用選擇上有一定的難度。4中醫(yī)動(dòng)物模型研究一個(gè)中醫(yī)動(dòng)物模型制成后,應(yīng)該進(jìn)一步的重復(fù)驗(yàn)證,使其完善、穩(wěn)定,然后用于病理和藥理實(shí)驗(yàn)研究。但據(jù)《中藥新藥藥理學(xué)研究指南》能將證模型用于中藥新藥研究的文獻(xiàn)僅3篇,如馬氏骨片對小鼠陽虛證(氫化可的松)的影響,陽威藥酒對腎陽虛證模型的藥效學(xué)研究,治療脾虛證中藥藥效學(xué)研究。其他如治療肝郁脾虛證、氣陰兩虛證、血虛證、肝胃不和證等22種中醫(yī)證及治療高血壓、冠心病等20種病的中藥藥效學(xué)研究,采用的都是西醫(yī)病理模型。總結(jié)發(fā)現(xiàn),在中醫(yī)46種動(dòng)物模型中,多數(shù)沒有完善的可重復(fù)性的考察,多以造模成功為終止,亦有在造模時(shí)使用中藥者,但局限于用一組與造模因素相關(guān)的方藥,糾正模型指標(biāo)異常狀態(tài)為終結(jié),這是一種藥物反證法,亦屬于造模范圍,很少有人進(jìn)行證型的排比和不同類藥物應(yīng)用的排比,來探討模型證的屬性,至今不能反復(fù)應(yīng)用于中醫(yī)藥的研究,對中醫(yī)病理和藥理實(shí)驗(yàn)研究發(fā)揮不