大學(xué)課程 組織學(xué)與胚胎學(xué)PPT 01-組織學(xué)緒論

第1章組織學(xué)緒論IntroductionofHistology一、組織學(xué)的研究?jī)?nèi)容和意義組織學(xué)（histology）是研究機(jī)體微細(xì)結(jié)構(gòu)及其相關(guān)功能的科學(xué)。只有學(xué)好組織學(xué)，認(rèn)識(shí)人體的微細(xì)結(jié)構(gòu)及其相關(guān)功能，才能全面掌握人體的形態(tài)結(jié)構(gòu)，探索生命現(xiàn)象的物質(zhì)基礎(chǔ)。也只有認(rèn)識(shí)了人體的正常結(jié)構(gòu)，才能更好地分析和理解人體的生理過(guò)程和病理過(guò)程，才能學(xué)好生理學(xué)、病理學(xué)及其他醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)課程和臨床課程。三、組織學(xué)的研究方法和技術(shù)

（一）普通光鏡標(biāo)本的制備和光鏡觀察應(yīng)用普通光鏡觀察組織切片是組織學(xué)研究的主要技術(shù)，可獲得有關(guān)組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能的許多信息。光鏡的放大作用由其光學(xué)部分實(shí)現(xiàn)，后者主要由聚光鏡、物鏡和目鏡組成。（一）普通光鏡標(biāo)本的制備和光鏡觀察生物組織和器官不能直接在光鏡下觀察，制備能使光線透過(guò)、微細(xì)結(jié)構(gòu)清晰可辨的組織切片是組織學(xué)研究的基本方法，主要包括固定、切片、染色等步驟，常用石蠟切片、HE染色。石蠟切片組織塊必須有一定的硬度方可切成薄片。首先用酒精和二甲苯將固定后的組織塊脫水(dehydration)和透明(clearing)，再用熔化的石蠟浸透、包埋(embedding)，制成有一定硬度的組織蠟塊，然后用切片機(jī)(microtome)將其切成5～10μm厚的組織切片(tissuesection)，貼于載玻片上

。上述方法稱(chēng)石蠟切片(paraffinsectioning)，是組織學(xué)中的常規(guī)切片方法。HE染色組織學(xué)中最常用的染色方法是蘇木精（hematoxylin）和伊紅（eosin）染色法，簡(jiǎn)稱(chēng)HE染色法（HEstaining）。蘇木精使細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中的核糖體等酸性物質(zhì)染成紫藍(lán)色，伊紅使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的堿性成分染成淡紅色。與堿性染料親和力強(qiáng)、易被染色的特性稱(chēng)嗜堿性（basophilia）；與酸性染料親和力強(qiáng)、易被染色的特性稱(chēng)嗜酸性（acidophilia）；若與兩種染料的親和力都不強(qiáng)，則稱(chēng)中性（neutrophilia）。（三）電子顯微鏡術(shù)電鏡（ElectronMicroscopy）不同于光鏡之處是用電子束代替可見(jiàn)光，用電磁場(chǎng)代替玻璃透鏡。電鏡又分為透射電鏡術(shù)和掃描電鏡術(shù)。各種顯微鏡的分辨率與人眼的比較分辨率人眼0.2mm普通光鏡0.2μm透射電鏡0.1~0.2nm掃描電鏡2.5nml．透射電鏡術(shù)透射電鏡術(shù)（Transmissionelectronmicroscopy）用電子束穿透標(biāo)本，經(jīng)過(guò)電磁透鏡的會(huì)聚、放大后，在熒光屏上成像，直接觀察，或?qū)⒂跋裢渡涞秸障嗟灼?，制成電鏡照片進(jìn)行觀察。透射電鏡的分辨率可達(dá)0.1～0.2nm，放大倍數(shù)從幾千倍到幾十萬(wàn)倍。由于電子束穿透力弱，電鏡標(biāo)本需制成50～80nm的超薄切片。2．掃描電鏡術(shù)掃描電鏡術(shù)（Scanningelectronmicroscopy）用于觀察細(xì)胞、組織和器官表面的立體微細(xì)結(jié)構(gòu)。將小塊組織（直徑約0.3cm）經(jīng)固定和臨界點(diǎn)脫水干燥后，在其表面噴鍍薄層碳膜和金屬膜。掃描電鏡發(fā)射的細(xì)電子束在樣品表面按順序逐點(diǎn)移動(dòng)掃描，使樣品表面金屬膜發(fā)射出電子（稱(chēng)二次電子），二次電子信號(hào)被探測(cè)器收集，經(jīng)過(guò)放大，在熒光屏上成像。掃描電鏡的景深長(zhǎng)，圖像清晰，富有立體感。（四）組織化學(xué)和細(xì)胞化學(xué)技術(shù)組織化學(xué)（histochemistry）和細(xì)胞化學(xué)（cytochemistry）技術(shù)是應(yīng)用化學(xué)反應(yīng)原理檢測(cè)組織和細(xì)胞的化學(xué)成分并進(jìn)行定位和定量的技術(shù)。組織細(xì)胞中的糖類(lèi)、脂類(lèi)、蛋白質(zhì)、核酸、酶等均可與相應(yīng)試劑反應(yīng)，最后形成有色反應(yīng)終產(chǎn)物或電子致密物，應(yīng)用光鏡或電鏡進(jìn)行觀察。糖類(lèi)物質(zhì)常用過(guò)碘酸-Schiff反應(yīng)(PAS反應(yīng))顯示。脂類(lèi)常用蘇丹染料、油紅O、尼羅藍(lán)等脂溶性染料染色。PAS反應(yīng)示肝細(xì)胞內(nèi)的糖原顆粒（箭頭）蘇木精復(fù)染高倍（五）免疫組織化學(xué)免疫組織化學(xué)是根據(jù)免疫學(xué)原理，應(yīng)用帶有可見(jiàn)標(biāo)記的特異性抗原-抗體反應(yīng)，檢測(cè)組織、細(xì)胞中多肽和蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)的一種技術(shù)。進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色時(shí)，首先要獲得被檢多肽或蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)的抗體。其次，要對(duì)抗體進(jìn)行標(biāo)記。常用的標(biāo)記物有熒光染料，如異硫氰酸熒光素(FITC)、得克薩斯紅(Texasred)；酶類(lèi)，如辣根過(guò)氧化物酶、堿性磷酸酶等；重金屬，如膠體金、鐵蛋白等。最后，應(yīng)用標(biāo)記抗體孵育標(biāo)本，標(biāo)記抗體即與組織細(xì)胞中的相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合，可分別在熒光顯微鏡、普通光鏡和電鏡下觀察。免疫細(xì)胞化學(xué)的方法免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)主要有直接法和間接法）。直接法是標(biāo)記某抗原的特異性抗體（又稱(chēng)第一抗體），用標(biāo)記的第一抗體孵育標(biāo)本以檢測(cè)其中的抗原成分。在間接法中，第一抗體不標(biāo)記；以第一抗體作為抗原免疫另一動(dòng)物，制備抗第一抗體的抗體，即第二抗體，并標(biāo)記第二抗體。染色時(shí)，先后以第一抗體和標(biāo)記的第二抗體處理標(biāo)本，在抗原存在部位形成抗原-第一抗體-標(biāo)記第二抗體復(fù)合物，以達(dá)到檢測(cè)該抗原的目的。為了在一張組織切片上同時(shí)顯示兩種抗原物質(zhì)，以發(fā)現(xiàn)其定位、形態(tài)、甚至功能上的相互關(guān)系，可使用免疫細(xì)胞化學(xué)雙重染色（doublestaining）。電鏡免疫細(xì)胞化學(xué)常用膠體金標(biāo)記技術(shù)。（六）原位雜交原位雜交是一種在組織細(xì)胞原位進(jìn)行的核酸分子雜交技術(shù)，敏感度高，特異性強(qiáng)，是當(dāng)前分子生物學(xué)研究的重要手段。原位雜交的原理是兩條單核苷酸鏈通過(guò)堿基互補(bǔ)原則緊密結(jié)合，形成穩(wěn)定的雜交體。根據(jù)這一原理，用一條堿基序列已知、