馬錢子散中馬錢子的含量測定

實(shí)訓(xùn)二十三 馬錢子散中馬錢子的含量測定一、 實(shí)訓(xùn)目的掌握薄層掃描法的一般操作步驟和技能理解外標(biāo)一點(diǎn)法測定馬錢子含量的原理了解薄層掃描法含量測定的設(shè)計(jì)思路。二、 測定依據(jù)馬錢子散藥品標(biāo)準(zhǔn)［《中國藥典》2005年版（一部）正文部分359頁］【處方】馬錢子（砂燙）適量（含士的寧8.0g）地龍（焙黃）93.5g【含量測定】取裝量差異項(xiàng)下的本品約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加三氯甲烷20ml與濃氨試液1ml，輕輕搖勻，稱重，于室溫下放置24小時，再稱重，補(bǔ)足三氯甲烷減失的重量，充分振搖，濾過，濾液作為供試品溶液。另取士的寧對照品，加三氯甲烷制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（附錄IVB）試驗(yàn)，吸取供試品溶液8^1和對照品溶液4日1，交叉點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以甲苯一丙酮一乙醇一濃氨試液（16：12：1：4）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干。照薄層色譜法（附錄VB薄層色譜掃描法）進(jìn)行掃描，波長：氣=257nm，人r=300nm，測量供試品吸光度積分值與對照品吸光度積分值，計(jì)算，即得。本品按干燥品計(jì)算，每袋含馬錢子以士的寧（CHNO）計(jì)，應(yīng)為7.2?8.8mg。212222薄層色譜法［《中國藥典》2005年版（一部）附錄VB］三、 測定原理本品系由馬錢子（砂燙）和地龍（焙黃）制成的散劑，具祛風(fēng)濕、通經(jīng)絡(luò)之功效，內(nèi)服可治療關(guān)節(jié)疼痛、臂痛腰痛、肢體肌肉萎縮等癥。由于馬錢子為本品主藥，其中所含士的寧既是有效成分又是毒性成分，故藥品標(biāo)準(zhǔn)以士的寧為指標(biāo)，采用薄層掃描外標(biāo)一點(diǎn)法對馬錢子含量進(jìn)行測定，并規(guī)定了嚴(yán)格的含量限度，以保證用藥的安全性和有效性。士的寧為吲哚類生物堿（圖5-37），具有堿性，溶于三氯甲烷、苯、甲醇、乙醇，難溶于水。因此樣品前處理時，采用三氯甲烷-濃氨試液浸漬提取，加入少量濃氨試液的目的在于堿化樣品中的士的寧，使其轉(zhuǎn)變成游離態(tài)生物堿，進(jìn)而溶于三氯甲烷被提取出來。此外，在展開劑中加入一定比例濃氨試液是使展開劑微呈堿性，以便克服硅膠的弱酸性，抑制士的寧的解離，使其斑點(diǎn)集中清晰。士的寧結(jié)構(gòu)中具有共軛體系，在紫外光區(qū)有吸收，254nm處呈現(xiàn)最大吸收，但無熒光性質(zhì)，因此在薄層色譜試驗(yàn)中采用熒光淬滅法進(jìn)行顯色和定位，即將展開后的硅膠GF4薄層板置熒光燈下，用254nm紫外光照射，薄層板中熒光物質(zhì)發(fā)出黃綠色熒光，在此背景上，士的寧所在位置呈現(xiàn)暗藍(lán)褐色斑點(diǎn)。圖5-37士的寧結(jié)構(gòu)式測定原理：在堿性條件下，用三氯甲烷將士的寧從樣品中提取出來，經(jīng)薄層色譜分離得到其斑點(diǎn)，通過隨行展開的對照品士的寧進(jìn)行定位。然后分別對供試品和對照品士的寧斑點(diǎn)進(jìn)行掃描，測定相應(yīng)的吸光度積分值。根據(jù)外標(biāo)一點(diǎn)法直線方程，建立供試品士的寧濃度公式，將測得的供試品、對照品吸光度積分值以及對照品濃度代入其中，即可計(jì)算出士的寧含量。四、 儀器與試劑薄層掃描儀、分析天平（感量0.0001g、0.00001g）、具塞錐形瓶、移液管、硅膠GF4薄層板、展開缸、點(diǎn)樣器（微升毛細(xì)管或微量注射器）、熒光燈等。士的寧對照品、三氯甲烷、甲苯一丙酮一乙醇一濃氨試液（16：12：1：4上層）等。五、 實(shí)驗(yàn)步驟與內(nèi)容供試品溶液的制備在50ml具塞錐形瓶中，用分析天平（感量0.0001g）精密稱定裝量差異項(xiàng)下的本品約0.5g，稱量范圍0.4500g?0.5500g，記錄所稱重量。用移液管精密加三氯甲烷20ml與濃氨試液1ml，密塞，輕輕搖勻，分析天平（感量0.0001g）稱重，保留四位有效數(shù)字并記錄重量，于室溫下放置24小時，其間不時振搖。再用分析天平（感量0.0001g）稱重，用吸管小心滴加三氯甲烷補(bǔ)足減失的重量，充分振搖，常壓過濾，棄去初濾液，收集續(xù)濾液作為供

試品溶液。對照品溶液的制備在10ml量瓶中，用分析天平（感量0.00001g）精密稱定士的寧對照品10mg，稱量范圍0.00950g?0.01050g，記錄所稱重量。加三氯甲烷溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成每1ml含0.95?1.05mg的溶液，作為對照品溶液。測定法照薄層色譜法（附錄IVB）試驗(yàn)，用微升毛細(xì)管或微量注射器吸取供試品溶液8pl和對照品溶液4日1，按外標(biāo)兩點(diǎn)法點(diǎn)樣要求，分別交叉點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，形成至少6個原點(diǎn)，原點(diǎn)間距不得小于8mm，故應(yīng)選用15cmX20cm規(guī)格的薄層板。以甲苯一丙酮一乙醇一濃氨試液（16：12：1：4）的上層溶液為展開劑，展開10cm左右，展開前要充分“飽和”30分鐘。展開完畢，取出薄層板，晾干至無展開劑氣味。置熒光燈下，254nm紫外線照射，根據(jù)對照品斑點(diǎn)位置確定供試品色譜中士的寧斑點(diǎn)位置。照薄層色譜法（附錄VB薄層色譜掃描法）規(guī)定，分別對上述兩種斑點(diǎn)進(jìn)行掃描，波長：人，=257nm，人r=300nm，測量供試品士的寧吸光度積分值與對照品吸光度積分值，供含量計(jì)算用。含量計(jì)算（1）根據(jù)下式求出供試品溶液中士的寧的濃度（C供mg/ml）式中C供為供試品溶液的濃度；C對為對照品溶液的濃度；A供為被供試品被測斑點(diǎn)的吸光度的積分值；A對為對照品斑點(diǎn)吸光度的積分值。（2）根據(jù)下式求出供試品中士的寧的含量（保留兩位有效數(shù)字）含量（mg/含量（mg/袋）二C供x供試品溶液體積x平均裝量取樣量【操作要點(diǎn)】供試品溶液應(yīng)平行制備兩份。展開劑制備應(yīng)在分液漏斗中操作，各種溶劑按規(guī)定比例加入后，要充分振搖、放置，使澄清并完全分層，取上層溶液作為展開劑。展開劑用量要能滿足展開和“飽和”所需。實(shí)驗(yàn)中使用的薄層板較寬，易產(chǎn)生“邊緣效應(yīng)”，影響測量工作。故展開前應(yīng)充分“飽和”，在展開缸內(nèi)放置與展開缸內(nèi)徑同樣大小的濾紙并吸著展開劑，可提高“飽和”速率，克服“邊緣效應(yīng)”。熒光淬滅法顯色定位應(yīng)在暗室或暗光處進(jìn)行。薄層板應(yīng)使用市售薄層板。掃描時應(yīng)沿展開方向自下而上進(jìn)行掃描，不能橫向掃描。記錄取樣量、薄層色譜掃描圖、吸光度積分值、系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)數(shù)據(jù)和計(jì)算結(jié)果等。供試品被測斑點(diǎn)的吸光度積分值應(yīng)與對照品的接近，必要時可適當(dāng)調(diào)整供試品溶液的點(diǎn)樣量。六、 結(jié)果判斷將測試結(jié)果與藥品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定比較，若處于含量限度之內(nèi)則判定為符合規(guī)定。七、 實(shí)訓(xùn)思考本實(shí)驗(yàn)提取溶劑和薄層展開劑中為什么要加入一定量濃氨試液？具有何種性質(zhì)的被測成分才可選用熒光淬滅法進(jìn)行薄層顯色定位？外標(biāo)一點(diǎn)法測定含量時，為什么要求供試品斑點(diǎn)峰面積積分值應(yīng)與對照品斑點(diǎn)的接近？八、 實(shí)訓(xùn)測試馬錢子散中士的寧含量測定實(shí)訓(xùn)測試表（百分制）測試指標(biāo)測試內(nèi)容a觀測點(diǎn)分值評價等級ABCDE1.00.70.50.30著裝2

檢驗(yàn)依據(jù)寫出測定依據(jù)的來源3相關(guān)知識為什么選擇士的寧作為馬錢子散含量測定的指標(biāo)？本法屬于何種含量測定方法？本法采用外標(biāo)一點(diǎn)法還是外標(biāo)兩點(diǎn)法？判定依據(jù)是什么？9先在以下括號內(nèi)寫出操作步驟序號和名稱，然后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。（ ）操作（ ）步驟（ ）及實(shí)（ ）60驗(yàn)（ ）（ ）（ ）（ ）結(jié)果描述2