重組DNA技術(shù)的基本工具 高二下期生物人教版選擇性必修3

第三章基因工程第1節(jié)

重組DNA技術(shù)的基本工具人教版·選擇性必修3（第三課時）三、基因進入受體細胞的載體——“分子運輸車”探究

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實踐：DNA的粗提取與鑒定1.實驗原理提取DNA的基本思路（DNA的粗提取）：利用DNA與RNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等在物理和化學(xué)性質(zhì)方面的差異，提取DNA，去除其他成分。a、DNA不溶于酒精，某些蛋白質(zhì)溶于酒精b、DNA在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同，能溶于2mol/LNaCl溶液提取提取鑒定c、在一定溫度下，DNA遇二苯胺試劑會呈現(xiàn)藍色。0DNA溶解度NaCl濃度0.14mol/L2mol/L在2mol/L的NaCl溶液中溶解度最高，在0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度最低三、基因進入受體細胞的載體——“分子運輸車”探究

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實踐：DNA的粗提取與鑒定2.材料用具①選材：新鮮洋蔥或香蕉、菠菜、菜花、豬肝等。②試劑：染色體數(shù)目多，細胞分裂旺盛，DNA含量較高。SDS（十二烷基磺酸鈉）：EDTA（乙二胺四乙酸）：使DNA保持穩(wěn)定狀態(tài)。能有效的破壞細胞膜的磷脂和膜蛋白。是一種DNA酶的抑制劑，可防止細胞破碎后DNA酶降解DNA;Tris-HCl的緩沖體系（PH=8.0）：研磨液體積分數(shù)為95%的酒精析出DNA2mol/L的NaCl溶液溶解DNA二苯胺試劑鑒定DNA，要現(xiàn)配現(xiàn)用NaCl：DNA與蛋白質(zhì)分離。三、基因進入受體細胞的載體——“分子運輸車”探究

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實踐：DNA的粗提取與鑒定3.方法步驟研磨1稱取約30g洋蔥，切碎，然后放入研缽中，倒入10mL研磨液，充分研磨；提取上清液2在漏斗中墊上紗布，將洋蔥研磨液過濾到燒杯中，在4℃冰箱中放置幾分鐘后，再取上清液?；?qū)⒀笫[研磨液倒入塑料離心管中離心，在1500r/min的轉(zhuǎn)速下離心5min,再取上清液放入燒杯中。①ＤＮＡ的提?。貉心ゲ怀浞郑瑫笵NA分子不能從細胞核中釋放出來，從而影響提取的DNA含量不能用濾紙代替紗布，因為DNA會被吸附到濾紙上而大量損失。上清液可能含有DNA、RNA以及蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、糖類等。三、基因進入受體細胞的載體——“分子運輸車”探究

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實踐：DNA的粗提取與鑒定3.方法步驟①ＤＮＡ的提?。杭泳凭龀?在上清液中加入體積相等的、預(yù)冷的酒精溶液（體積分數(shù)為95%），靜置2～3min，溶液中出現(xiàn)的白色絲狀物就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一個方向攪拌，卷起絲狀物，并用濾紙吸去上面的水分；或者將溶液倒入塑料離心管中，在10000r/min的轉(zhuǎn)速下離心5min，棄上清液，將管底的沉淀物（粗提取的DNA）晾干。ａ、抑制核酸水解酶活性，防止DNA降解；ｂ、低溫有利于增加DNA分子的柔韌性，減少斷裂。ｃ、抑制分子運動，使DNA易形成沉淀析出動作要輕緩，以免加劇DNA分子的斷裂，導(dǎo)致DNA分子不能形成絮狀沉淀。避免破壞DNA攪拌時動作要輕緩的原因三、基因進入受體細胞的載體——“分子運輸車”探究

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實踐：DNA的粗提取與鑒定3.方法步驟②ＤＮＡ的鑒定：溶解ＤＮＡ4鑒定ＤＮＡ5取兩支20mL的試管，各加入2mol/L的NaCl溶液5mL。將絲狀物或沉淀物溶于其中一支試管的NaCl溶液中。向兩支試管中各加入4mL的二苯胺試劑?；旌暇鶆蚝?，將試管置于沸水中加熱5min。待試管冷卻后，比較兩支試管中溶液顏色的變化。空白對照組：

在等體積的NaCl溶液中加入二苯胺試劑，將試管置于同等沸水浴中加熱5min。對照組實驗組水浴加熱三、基因進入受體細胞的載體——“分子運輸車”探究

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實踐：DNA的粗提取與鑒定４.結(jié)果分析與評價試管編號A（對照組）B（實驗組）步驟12mol/L的NaC1溶液5mL步驟2不進行任何處理步驟3步驟4沸水浴加熱5min實驗現(xiàn)象溶液不變藍色實驗結(jié)論加絲狀物或沉淀物加4mL的二苯胺試劑溶液逐漸變藍DNA在沸水浴的情況下遇二苯胺試劑會被染成藍色【請同學(xué)們補充完整以下實驗步驟】三、基因進入受體細胞的載體——“分子運輸車”探究

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實踐：DNA的粗提取與鑒定思考·討論：1.你提取出白色絲狀物或沉淀物了嗎？用二苯胺試劑鑒定的結(jié)果如何？

觀察提取的DNA的顏色，如果不是白色狀物，說明DNA中的雜質(zhì)較多。二苯胺試劑鑒定呈現(xiàn)藍色，說明實驗基本成功；如果不呈現(xiàn)藍色，可能原因有所提取的DNA含量低，或者在實驗操作過程中出現(xiàn)了失誤等。2.你能分析出粗提取的DNA中可能含有哪些雜質(zhì)嗎？本實驗出提取的DNA可能仍然含有核蛋白、多糖等雜質(zhì)。3.與其他同學(xué)提取的DNA進行比較，看看實驗結(jié)果有何不同分析產(chǎn)生差異的原因。

從多種方面比較實驗結(jié)果，如DNA的純度、DNA的顏色、二苯胺試劑顯色的深淺等，看看哪種實驗材料，哪種提取方法的效果更好。三、基因進入受體細胞的載體——“分子運輸車”探究

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實踐：DNA的粗提取與鑒定本試驗只是對DNA進行了粗提取，請查閱資料，了解實驗室提取純度較高的DNA的一種方法，并與本實驗中所使用的方法進行比較，總結(jié)兩種方法的異同。

實驗室提取純度較高的DNA的方法有不少。例如，可以先添加質(zhì)量分數(shù)為25%的SDS溶液，使蛋白質(zhì)變性后與DNA分開；隨后，加入氯仿——異丙醇混合液（體積比為24:1），通過離心將蛋白質(zhì)及其它雜質(zhì)除去，取清液；可重復(fù)上述操作幾次，直至上清液變成透明的粘稠液體。此外，由于苯酚可以迅速使蛋白質(zhì)變性，抑制核酸酶的活性，因此還可以先用苯酚處理，然后離心分層，這時DNA溶于上層水相，蛋白質(zhì)變性后存在于酚層中，用吸管、微量移液器等實驗用具就可以將二者分開。５.進一步探究（3）DNA能與二苯胺試劑在常溫下反應(yīng)生成藍色沉淀。(

)（2）研磨之后，通過過濾或離心，DNA會保留在沉淀物中。()三、基因進入受體細胞的載體——“分子運輸車”探究

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實踐：DNA的粗提取