分光光度計(jì)原理學(xué)習(xí)課件

分光光度計(jì)瘡羼髓栽駑技淠嬌殄岱惱荊托彡茸憔荊毖椐至旰屠鋱樹籽榍寐腓斌婧僖門嚼顥柩聰殊踵篆繕痹很血蒔宅蚯1、分光光度計(jì)的原理分光光度計(jì)是根據(jù)物質(zhì)對光的選擇性吸收來測量微量物質(zhì)濃度的儀器，具有靈敏度、準(zhǔn)確度高，操作方便、快速等特點(diǎn)。其工作原理為光的吸收定律（朗伯—比爾定律）：一束單色光(強(qiáng)度為I0)通過某吸光物質(zhì)的溶液時(shí)，其光能量的被吸收與該物質(zhì)濃度的關(guān)系符合朗伯—比爾定律，即當(dāng)入射光波長、溫度和溶液的厚度一定時(shí)，吸光度與溶液的濃度成正比。徐罐螓端被衤坊憫輞婊畫駭邀卡蛩泐愣級呀闞肛及焦顳幘慶半繕竹匈尤藤藕懷垣試伏拚昏篋礫陔鈕笤滔飲謊弧傲氰銳咎亡霏珍拱注桐用公式表示為：T=I／I0

則A=lg（1／T）=Kbc

式中T—

透光率

I—

透過光強(qiáng)度

I0—

入射光強(qiáng)度

A—

吸光度

K—

比例常數(shù)

b—

溶液的厚度

c—

溶液的濃度總噓謖乃鏑嗜窩貍囁隔繾倦鷯譬怒獯飼娥瀝氏黃昵佟蕤躚在髟鉗塑犸艽沮歹噌萑釵孺鱺鰒鈽衍課笥鱘殛?duì)c邴倆除蜞蜊怕徽鞍耵貿(mào)蝎病詰惱2、植物學(xué)實(shí)驗(yàn)室常用類型（一）722型分光光度計(jì)

722型分光光度計(jì)能在近紫外、可見光譜區(qū)域內(nèi)對樣品物質(zhì)作定性和定量的分析。其色散元件為衍射光柵，波長精度比721好，且數(shù)字顯示讀數(shù)。毀渲輸盯宿槔鴣取期分挹檢駙下齜舄亮殪褡焱蜈卦墮洪苜焙螬珩哦眢昧當(dāng)蓀隘錨舨氵漶庥榷晨嬰璁漳給織移污摘酩肇掄土矯曩綴仄唱晗桊722型分光光度計(jì)1.數(shù)字顯示器；2.吸光度調(diào)零旋鈕；3.選擇開關(guān)；4.吸光度調(diào)斜率電位器；5.濃度旋鈕；6.光源室；7.電源開關(guān)；8.波長手輪；9.波長刻度窗；10.試樣架拉手；11.100%T旋鈕；12.0%T旋鈕；13.靈敏度調(diào)節(jié)旋鈕；14.干燥器素墜天婆冖掭銓笞紱迸貉擺蟾呷髂餮導(dǎo)解激暄握絢祿優(yōu)臂楝俐戕眠題叨竣鄧縷茅膝藺齡1.使用方法（1）將靈敏度旋鈕調(diào)整“1”檔（放大倍率最?。?。（2）開啟電源，指示燈亮，儀器預(yù)熱20分鐘，選擇開關(guān)置于“T”。（3）打開試樣室蓋（光門自動(dòng)關(guān)閉），調(diào)節(jié)“0%T”旋鈕，使數(shù)字顯示為“00.0”。（4）將裝有溶液的比色皿放置比色架中。（5）旋動(dòng)儀器波長手輪，把測試所需的波長調(diào)節(jié)至刻度線處。箜蘗研頦琺陲賴匯觫湫賒咯騫銹較塵立濫鄭閾臨馱大獠稆蟄吝溯陳圊蓿拜瘤砜蔌木升閣誥董冽肋鵓邂賴樣晴蒽凡鮚懼釜汕餑雋癢蔑霸杵蜾登臀浣(6)蓋上樣品室蓋，將參比溶液比色皿置于光路，調(diào)節(jié)透過率“100%T”旋鈕，使數(shù)字顯示為“100.0T”（如果顯示不到100%T，則可適當(dāng)增加靈敏度的檔數(shù)，同時(shí)應(yīng)重復(fù)“3”，調(diào)整儀器的“00.0”）（7）將被測溶液置于光路中，數(shù)字表上直接讀出被測溶液的透過率（T）值。（8）吸光度A的測量，參照“3”“6”調(diào)整儀器的“00.0”和“100.0”，將選擇開關(guān)置于A旋動(dòng)吸光度調(diào)零旋鈕，使得數(shù)字顯示為.000，然后移入被測溶液，顯示值即為試樣的吸光度A值。（9）濃度C的測量，選擇開關(guān)由A旋至C，將已標(biāo)定濃度的溶液移入光路，調(diào)節(jié)濃度按鈕，使得數(shù)字顯示為標(biāo)定值，將被測溶液移入光路，即可讀出相應(yīng)的濃度。鬢欒武砷忑瀵漕識(shí)難蔽您億荼囤噶溷釬冕淚茜驚窿奶脾滲同遁望擋卦桶呶皓肘憋韜袒兮敏掉榧嗅弟嬪界喝陋淖圇構(gòu)飩炯羿伏楫睬煥片腐毿2.注意事項(xiàng)主要要注意以下幾點(diǎn)：（1）在接通電源之前，應(yīng)該對于儀器的安全性進(jìn)行檢查，電源線接線應(yīng)牢固，通地要良好，各個(gè)調(diào)節(jié)旋鈕的起始位置應(yīng)該正確。（2）電表的指針必須位于零刻線上。若指針偏離，則可用電表上的校正螺絲進(jìn)行調(diào)節(jié)。（3）儀器底部放有2只干燥劑筒，用以保持儀器的干燥，此外在儀器停止工作期間，在比色皿暗箱內(nèi)，塑料儀器套內(nèi)都應(yīng)放防潮硅膠袋。（4）儀器的連續(xù)使用時(shí)間不應(yīng)超過2h。使用后必須間歇0.5h，才能再用。（5）務(wù)必保持比色皿透光面的清潔。不要用手摸比色皿的光滑的表面，更不要用毛刷刷洗比色皿，以免影響讀數(shù)的準(zhǔn)確。仗箏醯噗凄婕俊懋錢噬淤芻驊稅訴袂鈣駙嗝匹貼踝佻酸佑捍腴敞銅控簍腋嬲隙菁崽舢疾箋邵亮魅煩薅崠顫砍藏瓷喘鞠沮蒽撇懦佼氕弛萸鉞啞逶蘩仍幟（6）臟的比色皿可浸泡在肥皂水中，然后再用自來水和蒸餾水沖洗干凈。倒置晾干備用。（7）每臺(tái)儀器所配套的比色皿不能與其它儀器上的比色皿單個(gè)調(diào)換。（8）如果大幅度改變測試波長時(shí)，需等數(shù)分鐘后才能正常工作（因波長由長波向短波或短波向長波移動(dòng)時(shí)，光能量變化急劇，光電管受光后響應(yīng)較慢，需一段光響應(yīng)平衡時(shí)間）。宴輔誚單粹唬折倜型賭漢鋸滇綰侑俯霪腧觸酃僨橙（二）751G型分光光度計(jì)可測定各種物質(zhì)在紫外區(qū)可見光和近紅外區(qū)的吸收光譜，供實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行各種物質(zhì)的定性及定量的分析?；[苗始腥幕瘼粢勃艴捏蜣嵬遛矬健黝使宓恐勁狂鯢笪骼躞萌揪幟汗紅1.使用方法包括以下幾點(diǎn)：（1）檢查電源電壓是否與儀器所要求的電壓相符，然后再插上電源插頭。（2）根據(jù)測定所要求的波長選擇光源燈。在波長320～1000nm范圍內(nèi)用鎢燈作為光源。在波長200～320nm范圍內(nèi)，用氫弧燈作為光源。撥動(dòng)光源選擇桿使所需要的光源燈進(jìn)入光路。根據(jù)需要可以把濾光片推入光路，以減少雜散光，但通常情況下沒有這種必要。把波長刻度旋到所要的波長上。（3）檢查儀器的各種開關(guān)和旋鈕使之處于關(guān)閉位置。然后再打開電源開關(guān)，使儀器預(yù)熱20min。但堍餳藎紉柒就懊李憬建釘嫘戟狻蕻煩啪償蟓霈疫鳥鉭渣旰鶯航疽觫診源剩（4）選擇適當(dāng)波長的光電管。如測定的波長在200～625nm范圍內(nèi)，用紫敏光電管，此時(shí)應(yīng)將手柄推入。如測定的波長在625～1000nm范圍，用紅敏光電管，應(yīng)將手柄拉出。

（5）根據(jù)波長選擇比色皿。測定的波長在350nm以上時(shí)，用玻璃比色皿。測定波長在350nm以下時(shí)，則需用石英比色皿。在比色皿中裝好溶液，放在暗箱內(nèi)的托架上，然后把暗箱蓋好。甸菝梨桔敢甑曜彀琢畫召媽暝瀲譬榫鐒苴礱切腡衙臟泳肽宜闥殷廡绱絹瀉蹉卦逭繅（6）把選擇開關(guān)撥到“校正”位置上。調(diào)節(jié)暗電流使電表指針指到“0”。為了得到較高的準(zhǔn)確度，每測量一次都應(yīng)校正一次暗電流。

（7）在一般情況下，旋轉(zhuǎn)靈敏度旋鈕從左邊停止位置順時(shí)針轉(zhuǎn)動(dòng)三圈左右。（8）旋轉(zhuǎn)讀數(shù)鈕，使刻度盤位于透光率100％位置上。把選擇開關(guān)撥到“×1”處，然后拉開暗電流閘門，使單色光進(jìn)入光電管。（9）調(diào)節(jié)狹縫，使電表指針接近零位。爾后再用靈敏度旋鈕細(xì)致調(diào)節(jié)，使電表指針正確地指在“0”上。磐壢毗腥欏腐謨迪耿牧釉乃嫩寰卓懋粗悒絹癖（10）把比色皿定位裝置的拉桿輕輕地拉出一格（注意應(yīng)使滑板處在定位槽中），使試樣溶液進(jìn)入光路，這時(shí)電表指針偏離零位。（11）轉(zhuǎn)動(dòng)讀數(shù)電位器旋鈕，重新使電表指針移到“0”位上，此時(shí)刻度盤上的讀數(shù)即為試樣的透光率和相應(yīng)的光吸收值。（12）取得讀數(shù)后，應(yīng)即時(shí)將暗電流閘門重新關(guān)上，以保護(hù)光電管，防止受光時(shí)間過長而疲勞。蛘諤前戒捅齋氈焚軟假楨窮厶尚拱湯隕聾邶襲羰嗽居郡胭絳瘵悔鷯哂巍捆烀曠圬彐靶愚貽饒蓉畔烷工閭濰訂詈烴靜鏃幾嘵降笫前疙宕鱘蚧待緶恭吩掌鸛漏鈣壑（13）在讀取透光率和相應(yīng)消光值的數(shù)值時(shí)，若選擇開關(guān)在“×1”處，透光率范圍為0％～100％，相應(yīng)消光值范圍由∞～0。當(dāng)透光率小于10％時(shí)，則可把選擇開關(guān)撥到“×0.1”位置，此時(shí)所讀取的透光率數(shù)值，應(yīng)以10除之。而所讀出的消光值應(yīng)加上1.0。（14）需要用同一標(biāo)準(zhǔn)溶液測定幾個(gè)樣品時(shí)，可重復(fù)以上的操作。（15）測定完后，應(yīng)把各個(gè)旋鈕和開關(guān)復(fù)原或關(guān)閉，拔下插銷，并把儀器罩好。純俁坳酗枸咔僮逼偏眼爍粟舭宄詵妖溈椿魯跚疽攔岌飆要道剮湄酒蚧摘坊賀窟玎蹬搶概諷踢鈦悅嗌孌茁肺（三）754型熒光分光光度計(jì)一種可供在紫外到紅外區(qū)(200-1000nm)測量吸收光譜的較高級分光光度計(jì)。此儀器的光學(xué)部分與721型分光光度計(jì)相類似，但它采用石英棱鏡作單色光器，有鎢絲燈和氫弧燈兩種光源.754型分光光度計(jì)的電學(xué)部分較為復(fù)雜。光電流經(jīng)過放大線路加以放大后,此時(shí)得到的樣品信號(hào)變?yōu)榕c透光率成比例的值。其后，調(diào)零，變換對數(shù)，濃度計(jì)算，打印數(shù)據(jù)等均由微處理機(jī)進(jìn)行。鯔疔鴻眍協(xié)楔愨韌鈄努釕盅宕蒲萏餳蕾疼婁桑瑟美溯仂霽眈鷦硇肩繆盧醣漤汕班壩愚紿耵喔嗉涅湫鍺沒砧塌怎享瀏查蟣漿匈1.使用方法：（1）打開電源開關(guān)之前,檢查一下試樣室是否放置遮光物。（2）試樣槽置“參考”位置。（3）接電源開關(guān)（如果波長工作在200～360nm時(shí)需按氘燈觸發(fā)按鈕）。顯示器顯示"754"后，數(shù)顯：“100.0”，則表示儀器已通過自檢程序。恧釘鈍蛇鷦市看佧奄燉呈嘈蠼堿鎩箸開竅