GB/T 43163-2023苜蓿黃萎病菌溯源檢測(cè)方法

ICS6502020

CCSB.16.

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T43163—2023

苜蓿黃萎病菌溯源檢測(cè)方法

TraceabilitydetectionofVerticilliumalbo-atrumReinkeetBerthold

2023-09-07發(fā)布2024-04-01實(shí)施

國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局發(fā)布

國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

GB/T43163—2023

前言

本文件按照標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第部分標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則的規(guī)定

GB/T1.1—2020《1:》

起草

。

請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任

。。

本文件由全國(guó)植物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出并歸口

(SAC/TC271)。

本文件起草單位中華人民共和國(guó)深圳海關(guān)深圳市檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院

:、。

本文件主要起草人高瑞芳章桂明王穎黃河清向才玉

:、、、、。

Ⅰ

GB/T43163—2023

苜蓿黃萎病菌溯源檢測(cè)方法

1范圍

本文件描述了應(yīng)用基因片段和生物信息學(xué)分析方法對(duì)苜蓿黃萎病菌進(jìn)行溯源檢測(cè)的方法

。

本文件適用于苜蓿黃萎病菌相關(guān)寄主植物材料中攜帶的苜蓿黃萎病菌的溯源檢測(cè)

。

2規(guī)范性引用文件

本文件沒(méi)有規(guī)范性引用文件

。

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件

。

31

.

鄰接法neighbor-joining

基于最小演化準(zhǔn)則的迭代聚類方法

。

4方法原理

苜蓿黃萎病菌拉丁名Verticilliumalboatrum基本信息見(jiàn)附錄溯源是利

,-ReinkeetBerthold,A。

用對(duì)物種有進(jìn)化和溯源價(jià)值的基因片段將核酸序列信息與來(lái)源地寄主等來(lái)源信息進(jìn)行相關(guān)性歸類

、。

檢測(cè)過(guò)程是應(yīng)用生物信息學(xué)的分析手段篩選有效區(qū)分種內(nèi)差異并且有效歸類的基因片段或分子標(biāo)

記獲得這些基因片段或分子標(biāo)記的核酸序列應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)手段完成核酸序列與來(lái)源地寄主信息的主

,,、

成分分析完成不同來(lái)源地寄主個(gè)體的群體分子系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系和群體結(jié)構(gòu)分析基于基因序列的相似

,、,

度和重復(fù)率等構(gòu)建網(wǎng)絡(luò)進(jìn)化圖

,。

5儀器和試劑

51儀器與試驗(yàn)用具

.

儀器恒溫恒濕培養(yǎng)箱超凈工作臺(tái)低溫冰箱擴(kuò)增儀冷凍離心機(jī)核酸蛋白分析儀

:、、-20℃、PCR、、、

電泳儀凝膠成像系統(tǒng)高壓滅菌鍋

、、。

試驗(yàn)用具解剖刀離心管鑷子移液器凍存管培養(yǎng)皿酒精燈接種針

:、、、、、、、。

52試劑

.

試劑酒精十六烷基三甲基溴化銨Taq酶Taq緩沖液標(biāo)

:70%、(CTAB)、PCR、PCR、dNTP、DNA

記無(wú)菌超純水

、。

馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基去皮土豆切成小方塊加入無(wú)菌水煮沸

(PDA):200g,1000mL,

四層紗布過(guò)濾得到濾液濾液中加入葡萄糖瓊脂粉加熱溶解后將溶液定容至

15min,,18g