LHAPhoenixin對慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激模型大鼠攝食和胃動力的影響及潛在機制

LHAPhoenixin對慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激模型大鼠攝食和胃動力的影響及潛在機制

2青島市第三人民醫(yī)院山東青島2660003青島市市立醫(yī)院西院區(qū)山東青島2660004青島市中心醫(yī)院山東青島266000摘

要目的:構(gòu)建慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激（CUMS）大鼠模型，研究下丘腦外側(cè)區(qū)（LHA）Phoenixin信號通路對大鼠攝食、胃功能的影響及潛在機制。方法:隨機選擇應(yīng)激因素（禁食或禁水、潮濕墊料、低溫或高溫下強迫游泳、晝夜顛倒環(huán)境、鼠籠傾斜），構(gòu)建CUMS大鼠。將LHA埋置有注射套管的正?；駽UMS模型大鼠隨機分為4組（n=7）。①生理鹽水（NS）組；②Phoenixin組；③Orexin-A受體拮抗劑SB334867組；④Phoenixin+SB334867組。分別觀察應(yīng)激大鼠杏仁核注射藥物后對攝食量、胃運動及胃排空的影響。結(jié)果：與正常大鼠相比，CUMS模型大鼠攝食量明顯減少（P<0.05），胃運動（P<0.05）及胃排空率（P<0.05）也明顯降低；與相應(yīng)NS組相比，LHA微量注射Phoenixin，正常或CUMS模型大鼠攝食量（P<0.05）、胃運動（P<0.05）及胃排空率（P<0.05）均明顯增加，但Phoenixin對正常大鼠促攝食效應(yīng)更為顯著（P<0.05）；LHA微量注射SB334867，可顯著減弱正?；駽UMS模型大鼠Phoenixin促攝食（P<0.05）或胃動力效應(yīng)（P<0.05）。結(jié)論:LHAPhoenixin可改善應(yīng)激導(dǎo)致的大鼠攝食、胃運動及胃排空下降，該效應(yīng)可能與Orexin-A受體信號通路激活有關(guān)。Keys：Phoenixin；下丘腦外側(cè)區(qū)；攝食；胃運動；胃排空EffectsofLHAPhoenixinonfoodintakeandgastricmotilityinratswithchronicunpredictablestressanditspotentialmechanismAbstractObjective:Byconstructingaratmodelofchronicunpredictablemildstress(CUMS),theeffectofPhoenixinsignalpathwayinlateralhypothalamicarea(LHA)onfoodintakeandgastricfunctioninratsanditspotentialmechanismwereexplored.Methods:TheCUMSratmodelwasestablishedbyrandomlyselectingstressfactors(Fastingorwaterprohibition,wetbedding,forcedswimmingunderloworhightemperature,dayandnightreversaloftheenvironment,tiltofthecage).Normalormodelratswererandomlypidedinto4groups.①NSgroup;②Phoenixingroup;③Orexin-AreceptorantagonistSB334867group;④Phoenixin+SB334867group.TheeffectsofLHAinjectiononfoodintake,gastricmotilityandgastricemptyingwereobservedinstressrats.Results:Comparedwiththenormalrats,thefoodintake,gastricmotilityandgastricemptyingrateofCUMSmodelratsdecreasedsignificantly,butincreasedaftermicroinjectionofLHAcomparedwiththecorrespondingNSgroup,andtheeffectofPhoenixinonpromotingfoodintakeinCUMSratswasmoresignificant.MicroinjectionofSB334867intoLHAcouldsignificantlyattenuatetheeffectsofPhoenixinonfoodintakeandgastricmotilitybothinnormalandCUMSrats.Conclusions:LHAPhoenixincanimprovethedecreaseoffoodintake,gastricmotilityinducedbystressinrats,whichmayberelatedtotheactivationofOrexin-Asignalpathway.Keywords:Phoenixin;LHA;Feeding;GastricMotility;GastricEmptying引

言應(yīng)激受機體多種反饋及相關(guān)神經(jīng)內(nèi)分泌肽類物質(zhì)的調(diào)控，應(yīng)激狀態(tài)與機體成癮、代謝相關(guān)疾病、內(nèi)分泌異常、及神經(jīng)性進食障礙有關(guān)[1]。Phoenixin（PNX）又稱為SMIM20，最初是2013年在下丘腦發(fā)現(xiàn)的參與生殖調(diào)控的內(nèi)分泌肽。在中樞，PNX神經(jīng)元可發(fā)出纖維廣泛投射至整個大腦（包括下丘腦諸核團、中腦腹側(cè)被蓋區(qū)、杏仁核等），參與攝食、情緒、學(xué)習(xí)記憶等生理活動調(diào)控[2]。本研究擬通過構(gòu)建慢性不可預(yù)知性應(yīng)激模型（CUMS）大鼠，觀察下丘腦外側(cè)區(qū)（LHA）微量注射PNX對大鼠攝食、胃運動及胃排空的影響及潛在機制，目的是補充和完善PNX對能量平衡調(diào)控理論，為臨床治療能量代謝相關(guān)疾病提供新的研究思路。材料與方法1實驗動物8周齡雄性SD大鼠，體質(zhì)量220-250g，購于青島市藥物檢驗所，飼養(yǎng)于室溫（25±1℃）、12h晝夜循環(huán)光照，自由飲水進食。2構(gòu)建CUMS大鼠隨機選擇應(yīng)激因素：大鼠24h禁食，或禁水24h，或24h應(yīng)用潮濕墊料，或4℃或45℃下強迫大鼠游泳5min，或大鼠處于晝夜顛倒環(huán)境（8:00-20:00黑暗，20:00-8:00光照），或鼠籠傾斜45°度角24h。每天上午8:00~9:00大鼠隨機給予上述之一刺激，每種刺激每周僅給予1次。分別于1、3、5、7周應(yīng)激刺激結(jié)束后測量大鼠體重。49天后，若CUMS模型組大鼠的體重較正常大鼠降低超過30%則視為建模成功。3實驗方法3.1LHA核團置管大鼠腹腔注射10%水合氯醛（0.3ml/100g）麻醉，后俯臥位固定于腦立體定位儀，于頭部正中做一切口，充分暴露顱骨。以前囟為原點，在顱骨表面定位LHA，以牙科鉆鉆透顱骨，將不銹鋼套管（直徑1.5mm）推入LHA，502膠及牙托粉固定套管于顱骨?？p合大鼠頭皮，術(shù)后連續(xù)3天腹腔注射8萬單位青霉素預(yù)防感染，一周后進行后續(xù)實驗。3.2LHA注射PNX對CUMS大鼠攝食量的影響正常及CUMS模型大鼠LHA置管后隨機分為4組（n=7）。①NS組：LHA微量注射0.5μlNS；②PNX組：LHA微量注射0.5μl25nmol/LPNX；③SB334867組：LHA微量注射0.5μl10μg/LSB334867；④PNX+SB334867組：LHA微量注射0.5μl（25nmol/LPNX+10μg/LSB334867）混合液。各組注射藥物后，立即給大鼠定量標準飼料，連續(xù)監(jiān)測2小時攝食量。攝食量=已知食物量—（剩余食物量+溢出殘渣量）。3.3LHA注射PNX對CUMS大鼠胃運動的影響將正常或CUMS模型大鼠隨機分為4組（n=7，分組同上3.2）。LHA注射PNX等藥物，觀察大鼠在體胃運動變化，以胃運動指數(shù)（MI%）對大鼠胃運動進行量化。MI（%）=（給藥后曲線下面積）/（給藥前曲線下面積）×100%。3.4LHA注射PNX對CUMS大鼠胃排空的影響隨機選取正常和CUMS模型大鼠各28只，禁食18h，按照上述分組（見3.2）。LHA給藥后，大鼠經(jīng)口灌胃1.5mL酚紅，20min后經(jīng)頸椎脫臼法處死大鼠，迅速剖開腹壁，結(jié)扎胃幽門及賁門，將胃完整取出。采用分光光度法測量胃排空率（%）。胃排空率（%）=（1–樣本A560/標準品A560）x100%3統(tǒng)計學(xué)分析應(yīng)用SPSS18.0和PPMS1.5軟件分析數(shù)據(jù)，所有數(shù)據(jù)均以（±SD）表示，兩組間采用t檢驗或Mann-WhitneyU檢驗，兩組以上實驗數(shù)據(jù)采用Kruskal-Wallis檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)

果1LHA注射PNX對CUMS大鼠攝食量的影響與正常大鼠相比，CUMS大鼠攝食量顯著減少（8.97±2.23vs.3.94±1.81，P<0.05）；與相應(yīng)NS組相比，LHA微量注射PNX，正常（8.97±2.23vs.14.27±3.07，P<0.05）或CUMS模型大鼠（3.94±1.81vs.5.31±1.64，P<0.05）攝食量明顯增加，且PNX對正常大鼠促攝食效應(yīng)更為顯著（14.27±3.07vs.5.31±1.64，P<0.05）；LHA微量注射Orexin-A受體拮抗劑SB334867，可顯著減弱正?；駽UMS模型大鼠PNX促攝食效應(yīng)，但單獨LHA注射SB334867，大鼠攝食量沒有顯著改變（P>0.05）。2LHA注射PNX對CUMS大鼠胃運動及胃排空的影響與正常大鼠相比，CUMS大鼠胃運動（90.23±18.73vs.58.19±13.21，P<0.05）及胃排空率（83.23±10.64vs.52.13±8.63，P<0.05）均顯著降低；與NS組相比，LHA微量注射PNX，可顯著促進CUMS大鼠胃運動（58.19±13.21vs.80.43±14.93，P<0.05）或胃排空率（52.13±8.63vs.69.26±13.38，P<0.05）；預(yù)先LHA微量注射SB334867，可顯著減弱PNX促大鼠胃運動（P<0.05）或胃排空（P<0.05）效應(yīng)。討

論本研究發(fā)現(xiàn)，CUMS大鼠攝食量、胃運動及胃排空顯著低于正常大鼠；LHA微量注射PNX可顯著促進正?；駽UMS大鼠的攝食、胃運動及胃排空，且PNX促CUMS模型大鼠攝食效應(yīng)明顯強于正常大鼠；PNX這些促效應(yīng)可被Orexin-A受體阻斷劑SB334867減弱。提示，PNX促攝食或促胃動力效應(yīng)可能與Orexin-A受體信號通路激活有關(guān)。PNX最初作為下丘腦生殖調(diào)控的內(nèi)分泌肽被專家們熟知并研究。在中樞，PNX神經(jīng)元分布廣泛，主要分布于下丘腦、杏仁核、丘腦未定帶、孤束核及極后區(qū)等，并且PNX神經(jīng)元可發(fā)出纖維廣泛投射至整個大腦。近年研究顯示，PNX還參與攝食、情緒、學(xué)習(xí)記憶等生理活動調(diào)控。側(cè)腦室注射PNX，可顯著促進大鼠攝食；禁食動物下丘腦PNX水平顯著升高，且在恢復(fù)攝食后PNX水平下降；PNX可促進白色脂肪生成，從而調(diào)控體重。PNX受體（Gpr173）屬G蛋白偶聯(lián)受體，但目前尚未發(fā)現(xiàn)其特異性受體拮抗劑或激動劑[3]。本研究發(fā)現(xiàn)，LHA微量注射PNX可顯著促進正常和應(yīng)激模型大鼠攝食、胃運動及胃排空，并且SB334867可抑制PNX對攝食及胃排空的促進作用。提示，Orexin-A受體信號通路可能參與PNX對正?；蚵詰?yīng)激模型大鼠攝食及胃動力調(diào)控。綜上所述，應(yīng)激可減弱大鼠攝食、胃運動及胃排空，LHA注射PNX可緩解該效應(yīng)，其機制可能與Orexin-A受體信號通路激活相關(guān)。參考文獻[1]TFriedrich,AStengel.Currentstateofphoenixin-theimplicationsofthepleiotropicpeptideinstressanditspotentialasatherapeutictarget[J].FrontPharmacol.2023，14:1076800.[2]LiangH,ZhaoQ,LvS,etal.Regulationandphysiologicalfunctionsofphoenixin[J].FrontMolBiosci.2022,9:956500.[3]Ba