2022水質(zhì)浮游植物的測定0.1 ml計數(shù)框-顯微鏡計數(shù)法

水質(zhì) 浮游植物測定 0.1ml計數(shù)框顯微鏡數(shù)法ii目 次前 言 ii用圍 1范引文件 1語定義 1法理 1劑材料 2器設(shè)備 22析驟 3果算表示 5密度 6質(zhì)保和量制 6意項 6物置 7附錄A（規(guī)性錄） 隨機野式法出的計算 8附錄B（資性錄） 顯微視面的量計算 9附錄C（資性錄） 浮游物數(shù)始錄表 12參考獻 1311水質(zhì) 浮游植物的測定 0.1ml計數(shù)框-顯微鏡計數(shù)法本標準規(guī)定了測定水中浮游植物的0.1ml計數(shù)框-顯微鏡計數(shù)法。本標準適用于地表水中浮游植物的密度測定。樣品濃縮50倍時，對角線方式計數(shù)方法檢出限為9.2×103cells/L；行格方式計數(shù)方法檢出限為3.0×103cells/L；全片方式計數(shù)方法檢出限為9.2×102cells/L；隨機視野方式計數(shù)的方法檢出限與觀察的視野數(shù)、顯微鏡視野面積有關(guān)，按附錄A計算。本標準引用了下列文件或其中的條款。凡是注明日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本標準。凡是未注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本標準。GB/T14581水質(zhì) 湖和庫樣術(shù)指導HJ/T91地表水和污水監(jiān)測技術(shù)規(guī)范HJ494水質(zhì) 采技指導下列術(shù)語和定義適用于本標準。3.1浮游物 phytoplankton在水中營浮游生活的微小藻類植物，通常浮游植物就是浮游藻類，包括原核的藍藻和其它各類真核藻類。3.2顯微計視野 microscopecountingfield顯微鏡視野中限定一定面積的區(qū)域，用于定量計數(shù)浮游植物。3.3檢出限 detectionlimit單次計數(shù)過程中，發(fā)現(xiàn)的概率不低于99%時最低的浮游植物密度。在顯微鏡下，利用0.1ml計數(shù)框?qū)悠分械母∮沃参镞M行人工分類和計數(shù)，計算單位體積樣品中各種類浮游植物的細胞數(shù)量。22碘2（5.3 w(HCHO)＝37%～40%。OHHHO稱取0g.200l40g碘（51000250.06430ml～100ml1L～2L410×、20×、401015×。1L～2L50ml40kHz100。0.1ml20mm×201010022mm×220.2。1mm/100DIV0.01。注：DIV指等分格，1mm/100DIV即1mm等分成100格。5mm/50DIV0.1。點位布設(shè)及采樣頻次按照GB/T14581、HJ/T91和HJ494的相關(guān)規(guī)定執(zhí)行。也可根據(jù)調(diào)查研究目的確定。m20cm/s～30cm/s1min～3（6.1）（5ml～10ml）33（6.2）25號浮游生物網(wǎng)（6.1）如有定性樣品采集的技術(shù)規(guī)范，按技術(shù)規(guī)范有關(guān)要求執(zhí)行。按照GB/T14581、HJ/T91和HJ494的相關(guān)規(guī)定進行定量樣品的采集。500ml注1：有些浮游植物（如藍藻）常浮于水面或成片、條帶分布，可在此水華密集區(qū)域采樣作為峰值參考。注2：定量樣品采集應(yīng)在定性樣品采集之前。應(yīng)保持固定時間段采樣，以便結(jié)果之間可相互比較。（.1.0～.531～524℃～1036h。1.0%～1.5%3512樣品在保存過程中，應(yīng)每周檢查魯哥氏碘液（5.5）5注：若樣品需長期保存，應(yīng)加入甲醛溶液（5.3），用量為水樣體積的4%。每次取樣前，采用上下顛倒至少30次的方式充分混勻所采樣品，混勻動作要輕。6.（71.注：種類鑒定除用定性樣品觀察外，還可吸取已完成計數(shù)的定量樣品進行觀察。44預(yù)檢（6.9）0.1ml0.1ml（6.10）（6.10）107cells/L～108cells/L1071080.1ml500個～10000樣品濃縮：將全部定量樣品搖勻倒入濃縮裝置（6.6）中，避免陽光直射的環(huán)境下，靜置48h。用20100ml3cm1L24h～48h25ml（5.510min在顯微鏡（6.5）下觀察，如仍存在大量未分散的細胞團，則應(yīng)延長超聲波處理時間，直至能夠準確計數(shù)。超聲波分散處理過程中應(yīng)注意水溫，防止過熱造成水分蒸發(fā)和浮游植物細胞結(jié)構(gòu)被破壞。裝片同8.3.1.1步驟進行裝片?？筛鶕?jù)需要，用滴管吸取少許丙三醇（5.4）均勻涂抹蓋玻片四周，以防止計數(shù)框水分蒸發(fā)形成氣泡。涂抹時應(yīng)避免滲入計數(shù)框。500～1500155表1 推選的數(shù)式計數(shù)框中0.1ml樣品含有的浮游植物細胞數(shù)（cells）推薦的計數(shù)方式500～1500全片計數(shù)1500～5000行格計數(shù)5000～10000對角線計數(shù)、隨機視野計數(shù)401004028304010在40B。15%15%樣品中浮游植物的細胞密度，按照公式（1）進行計算。N=A×n×V1×1000 （1）Ac式中：N——樣品中浮游植物的密度，cells/L；A——計數(shù)框面積，mm2；

V V066Ac——計數(shù)面積，當計數(shù)方式為對角線、行格和全片時計數(shù)面積分別為A/10、3A/10和A，當計數(shù)方式為隨機視野時計數(shù)面積為總視野面積，mm2；n——顯微鏡觀察計數(shù)的浮游植物細胞數(shù)，cells；V——計數(shù)框容積，ml；V1——稀釋或濃縮后的試樣體積，ml；V0——稀釋或濃縮前的樣品體積，ml；1000——體積換算系數(shù)，ml/L。測定結(jié)果以科學計數(shù)法表示，保留2位有效數(shù)字。6家實驗室分別用全片計數(shù)、行格計數(shù)、對角線計數(shù)和隨機視野計數(shù)對浮游植物密度水平分別為1×107cells/L、3×107cells/L、5×107cells/L、1×108cells/L72.4%～11%，2.9%～10%，2.7%～11%，4.8%～8.2%；實驗室間相對標準偏22%、5.6%、7.1%、21%95%95%2。表2 實室間95信間計數(shù)方式均值95%置信區(qū)間全片方式（cells/L）1.1×1078.6×106～1.3×107行格方式（cells/L）3.3×1073.1×107～3.5×107對角線方式（cells/L）5.6×1075.2×107～6.0×107隨機視野（cells/L）1.2×1089.6×107～1.4×10850077實驗中產(chǎn)生的廢液應(yīng)分類收集，集中保管，依法委托有資質(zhì)的單位進行處理。88附 錄 A（規(guī)范性附錄）隨機視野方式檢出限的計算附錄A給出了隨機視野方式檢出限的計算公式。隨機視野方式的檢出限與觀察的視野數(shù)、視野面積和計數(shù)框面積有關(guān)。當濃縮f倍時，按照公式（A.1）計算方法檢出限。AMDL=???e×V×s×f

×ln0.01×108 （A.1）式中：MDL——方法檢出限，cells/L；A——計數(shù)框面積，cm2；ne——觀察的隨機視野數(shù)，個；V——計數(shù)框容積，L；s——顯微鏡1個視野的面積，μm2/個；f——濃縮倍數(shù)；0.01——顯著性水平；108——面積換算系數(shù)，μm2/cm2。99附 錄 B（資料性附錄）顯微鏡視野面積的測量和計算用載物臺測微計標定目鏡分劃板，再用目鏡分劃板測量視野直徑，計算視野的面積。載物臺測微計（6.12）是一塊特制的載玻片，其中央有一小圓圈。圓圈內(nèi)刻有分度，將長1mm的直線等分為100個小格，每個小格長度等于10μm。圖B.1 物測計意圖目鏡分劃板（6.13）是一塊有刻度的圓形玻璃片，通?？潭仁菍?mm分劃為50格。使用前應(yīng)用載物臺測微計進行標定。圖B.2 鏡劃示圖1010裝入目鏡分劃板（6.13）裝入載物臺測微計（6.12）B.3。=100μm=10μm=100μm=10μm目鏡分劃板標尺左邊重合線 右邊重合線圖B.3 物測計定目分板意圖NwNsB.11L。??e

=×10 （B.1）??w式中：Le——1μm；Ns——。ds。式中：s——顯微鏡1個視野的面積，μm2；π——圓周率；d——顯微鏡視野直徑，μm；4——2

d2s=π×4 （B.2）1111通過顯微鏡的目鏡所觀察到的圓形區(qū)域稱為視野。按照公式（B.3）計算視野直徑，再利用圓面積公式計算視野面積，單位為mm2。式中：d——顯微鏡視野直徑，mm；FN——目鏡視場數(shù)，mm；0??′——標準物鏡放大率。0

FNMd= ' （B.3）M0182022、25、26.54×、1020×、401002040×。1212附 錄 C（資料性附錄）浮游植物計數(shù)原始記錄表浮游植物的原始記錄表參見表C.1。表C.1 游物數(shù)記錄表采樣日期：樣品編號：方法依據(jù)：設(shè)備名稱及編號：濃縮倍數(shù)：稀釋倍數(shù)：取樣量（l方式：□全片計□行格□對角線□隨機視野浮游植物名稱第一片計數(shù)量（cells）12345678910合計……總計浮游植物名稱第二片計數(shù)量（cells）12345678910合計……總計兩片計數(shù)相對偏差樣品濃度llL：注1：本表格為計數(shù)中使用的原始記錄表格；2110分析期： 析： 核：1313參考文獻,.[M].:,2006..1