熒光免疫技術(shù)

第十八章熒光免疫技術(shù)

Chapter18FluorescenceImmunoassay

第一部分教學(xué)內(nèi)容和要求一、目的要求.掌握：熒光免疫技術(shù)原理、類(lèi)型及臨床應(yīng)用，常用的熒光物質(zhì)；熟悉：熒光免疫技術(shù)的技術(shù)要點(diǎn)。了解：熒光素標(biāo)物的制備與保存，鑭系稀土元素標(biāo)記物的制備，熒光免疫技術(shù)主要類(lèi)型的技術(shù)要點(diǎn)。二、教學(xué)內(nèi)容1.熒光標(biāo)記物的制備：熒光和熒光物質(zhì)，熒光標(biāo)記物的制備。熒光免疫顯微技術(shù)：基本原理，技術(shù)類(lèi)型，技術(shù)要點(diǎn)，方法評(píng)價(jià)，臨床應(yīng)用。熒光免疫測(cè)定技術(shù)：時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定（基本原理，技術(shù)類(lèi)型，技術(shù)要點(diǎn)，方法評(píng)價(jià)和臨床應(yīng)用）熒光偏振免疫測(cè)定（基本原理，技術(shù)類(lèi)型，技術(shù)要點(diǎn)，方法評(píng)價(jià)和臨床應(yīng)用）。第二部分測(cè)試題一、選擇題（一）單項(xiàng)選擇題（A型題）如下有關(guān)熒光免疫技術(shù)完整正確的提法A.直觀性檢測(cè)抗原和抗體B.直觀性檢測(cè)抗原 C.直觀性檢測(cè)抗體D.間接檢測(cè)抗原或抗體 E.間接檢測(cè)抗原和抗體熒光素易受溫度影響，操作時(shí)通常選擇較佳的溫度A.10°C?15°CB.15°C?20°C C.20°C?25°C D.25°C?30°C E.30°C?35°C熒光抗體保存3?4年，應(yīng)選擇A.小量分裝、4C B?瓶分裝、4C C?瓶分裝、-10CD?瓶分裝、-20C E.小量分裝、-20C下列組成熒光顯微鏡的結(jié)構(gòu)中，與普通光學(xué)顯微鏡相同的是A.光源 B.下列組成熒光顯微鏡的結(jié)構(gòu)中，與普通光學(xué)顯微鏡相同的是A.光源 B.聚光器C.目鏡D.物鏡下列哪項(xiàng)方法不屬于熒光免疫顯微技術(shù)類(lèi)型A.直接法B.夾心法熒光抗體染色標(biāo)本的觀察時(shí)間:A。當(dāng)天 B。第二天熒光抗體間接法應(yīng)標(biāo)記A.抗原 B.抗體C.間接法D.補(bǔ)體法C。第三天D.1周內(nèi)補(bǔ)體 D.抗抗體E.濾光片E.雙標(biāo)記法E.5天E.抗體及補(bǔ)體熒光顯微技術(shù)常用于檢驗(yàn)血清中各種自身抗體和多種病原體抗體的方法是A直接法B間接法C雙抗體夾心法D.補(bǔ)體法 E.雙標(biāo)記法熒光抗體間接法可檢測(cè)A.抗原B.抗體C.補(bǔ)體D.蛋白質(zhì) E.抗原和抗體在熒光顯微鏡檢查中直接影響檢測(cè)結(jié)果的是A.抗原熒光染色 B.抗體熒光染色 C.補(bǔ)體熒光染色特異性熒光染色 E.非特異性熒光染色11.主要用于測(cè)定各種激素、蛋白質(zhì)、11.主要用于測(cè)定各種激素、蛋白質(zhì)、酶、藥物及病毒抗原的技術(shù)A. 熒光偏振免疫測(cè)定A. 熒光偏振免疫測(cè)定底物標(biāo)記熒光免疫測(cè)定臨床藥物濃度檢測(cè)的首選方法A.時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定D.流式熒光免疫技術(shù)B.熒光免疫顯微技術(shù)E.流式熒光免疫技術(shù)B.熒光偏振免疫測(cè)定E.底物標(biāo)記熒光免疫測(cè)定C.時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定C.熒光免疫顯微技術(shù)最適合于時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定的熒光物質(zhì)A.異硫氤酸熒光素 B.四乙基羅丹明 C.四甲基異硫氤酸羅丹明D.藻紅蛋白 E.鑭系稀土元素（Eu3+（二）多項(xiàng)選擇題（X型題）對(duì)熒光素影響的因素有A.pH、溫度 B.漠化物、碘化物等雜質(zhì) C.熒光素的濃度D.細(xì)胞固定劑 E.化合物常用的熒光素是指A.異硫氤酸熒光素B.四乙基羅丹明C.四甲基異硫氤酸羅丹明D.藻紅蛋白 E。鑭系稀土元素(Eu3+有關(guān)熒光顯微技術(shù)中制作組織標(biāo)本過(guò)程要求A.盡量保持抗原完整性 B.切片盡量薄C.用丙酮或乙醇固定 D.制好的標(biāo)本盡快染色E.制好的標(biāo)本無(wú)法及時(shí)染色、應(yīng)置-20°C下低溫干燥保存。熒光免疫顯微技術(shù)在臨床可用于檢測(cè)A.血清中自身抗體的檢測(cè) B.各種微生物的快速檢查和鑒定C.寄生蟲(chóng)感染的診斷 D.白細(xì)胞分化抗原的檢測(cè)E.HLA分型檢測(cè)5。 熒光顯微技術(shù)在組織學(xué)檢查中具有如下優(yōu)點(diǎn)A.抗原或抗體的定位 B.抗原或抗體的定性檢查C.抗原抗體反應(yīng)的高度特異性 D.熒光標(biāo)本能持久保存能在熒光顯微鏡下清晰地顯示其形態(tài)、直觀性強(qiáng)6。 間接熒光免疫法的優(yōu)點(diǎn)是A.敏感性高于直接法B?制備一種熒光抗體即可檢測(cè)多種抗原或抗體C.操作時(shí)間較短 D.不易出現(xiàn)非特異熒光反應(yīng)參與的因素多二、填空題熒光免疫技術(shù)的主要類(lèi)型包括和熒光物質(zhì)有和熒光抗體染色技術(shù)可分為和鑭系稀土元素標(biāo)記物制備的螯合劑有 、和。熒光免疫測(cè)定根據(jù)抗原抗體反應(yīng)后是否需要分離結(jié)合的與游的熒光標(biāo)記物而分為和兩種類(lèi)型。非均相熒光免疫測(cè)定法包括和均相熒光免疫測(cè)定法包括和熒光素標(biāo)記抗體的方法有和三、 名詞解釋.熒光免疫技術(shù)(fluorescenceimmunoassay).熒光效率(fluorescentefficiency)3.熒光壽命(fluorescencelifetime).熒光的淬滅(fluorescentdyked).熒光素(fluorescein)熒光抗體(fluorescentantibody)熒光免疫顯微技術(shù)(immunofluorescencemicroscopy)非均相熒光免疫測(cè)定法(anevenphasfluoroimmunoassay)9.均相熒光免疫測(cè)定法(evenphasfluoroimmunoassay)時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定(timeresolvedfluorescenceimmunoassay,TR-FIA)熒光偏振免疫測(cè)定(fluorescencepolarizationimmunoassay)四、 問(wèn)答題試述用于標(biāo)記的熒光素應(yīng)具備什么條件？試述熒光免疫顯微技術(shù)基本原理。試述熒光免疫顯微技術(shù)的臨床應(yīng)用。試述熒光偏振免疫測(cè)定基本原理。試述熒光免疫顯微技術(shù)基本原理。時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定法具有哪些優(yōu)點(diǎn)？第三部分參考答案與題解一、選擇題單項(xiàng)選擇題(A型題)7.D8.BA2.B3.E4.D 5.B 6.A7.D8.BE10.E11.C12.B13.E多項(xiàng)選擇題(X型題)ABCDE2.ABCD3.ABCDE4.ABCDE5.ABCE6.AB二、 填空題熒光抗體染色技術(shù)、熒光免疫測(cè)定技術(shù)。熒光素、其他熒光素物質(zhì)（鑭系稀土元素）。熒光免疫顯微技術(shù)、流式熒光免疫技術(shù)。多羧基酸類(lèi)螯合劑、8-二酮體類(lèi)螯合劑、BCPDA和10菲洛林。均相、非均相。時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定、熒光酶免疫測(cè)定。熒光偏振免疫測(cè)定、底物標(biāo)記熒光免疫測(cè)定。攪拌標(biāo)記法、透析標(biāo)記法。三、 名詞解釋熒光免疫技術(shù)：是將抗原抗體反應(yīng)的特異性與熒光物質(zhì)檢測(cè)的敏感性和直觀性結(jié)合起來(lái)的一種免疫分析技術(shù)。熒光效率：是指熒光物質(zhì)將吸收的光能轉(zhuǎn)變成為熒光的百分率。熒光壽命：指熒光物質(zhì)被一瞬時(shí)光脈沖激發(fā)后產(chǎn)生的熒光隨時(shí)間而衰減到一定程度時(shí)所用的時(shí)間。熒光的淬滅：指熒光分子在某些理化因素作用下、熒光分子的輻射能力受到激發(fā)光較長(zhǎng)時(shí)間的照射后會(huì)減弱的現(xiàn)象。熒光素：是能產(chǎn)生熒光并能作為染料使用的有機(jī)化合物。熒光抗體：熒光素與特異性抗體以化學(xué)共價(jià)鍵的方式結(jié)合而成，是免疫熒光技術(shù)的關(guān)鍵試劑。熒光免疫顯微技術(shù)：是以熒光顯微鏡為檢測(cè)工具，用熒光素標(biāo)記特異性抗體或抗抗體，檢測(cè)固定組織細(xì)胞上的抗原或血清中的抗體，常用于定性和定位檢查的一門(mén)技術(shù)。非均相熒光免疫測(cè)定法：在抗原抗體反應(yīng)后，先把Ab*Ag與Ab*分離，然后測(cè)定Ab*Ag或Ab*中的標(biāo)記物的量，從而推算出標(biāo)本中的Ag量，該方法稱(chēng)非均相熒光免疫測(cè)定法。均相熒光免疫測(cè)定法：在抗原抗體反應(yīng)后Ab*Ag中的標(biāo)記物失去熒光特性，則不需進(jìn)行Ab*Ag與Ab*的分離，可以直接測(cè)定游離的Ab*量，從而推算出標(biāo)本中的Ag量，該方法稱(chēng)為均相熒光免疫測(cè)定法。時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定：時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定是用鑭系稀土元素螯合物（如Eu3+螯合物）標(biāo)記抗體或抗原，檢測(cè)標(biāo)本中的相應(yīng)抗原或抗體的熒光免疫測(cè)定技術(shù)。熒光偏振免疫測(cè)定：是利用熒光素經(jīng)偏振光照射而躍入激發(fā)態(tài)，在回復(fù)至基態(tài)后可釋出光子，經(jīng)偏振儀形成偏振熒光，熒光偏振強(qiáng)度與熒光分子的大小成正比的關(guān)系而建立的免疫分析技術(shù)。四、 問(wèn)答題用于標(biāo)記的熒光素應(yīng)符合以下要求：①應(yīng)具有能與蛋白質(zhì)分子形成共價(jià)鍵的化學(xué)基團(tuán)，結(jié)合后不易解離，而未結(jié)合者易清除；②熒光效率高，與蛋白質(zhì)結(jié)合后，仍能保持較高的熒光效率；③熒光色澤與背景組織的色澤對(duì)比鮮明；④與蛋白質(zhì)結(jié)合后不影響蛋白質(zhì)原有的生化與免疫學(xué)性質(zhì)；⑤標(biāo)記方法簡(jiǎn)單、安全無(wú)毒；⑥與蛋白質(zhì)的結(jié)合物穩(wěn)定，易于保存。熒光免疫顯微技術(shù)是以熒光顯微鏡為檢測(cè)工具，用熒光素標(biāo)記特異性抗體或抗抗體，檢測(cè)固定組織細(xì)胞上的抗原或血清中的抗體，常用于定性和定位檢查的一門(mén)技術(shù)。臨床常應(yīng)用于：①血清中自身抗體的檢測(cè)；②各種微生物的快速檢查和鑒定；③寄生蟲(chóng)感染的診斷；④白細(xì)胞分化抗原的檢測(cè)。熒光偏振免疫測(cè)定基本原理：熒光偏振免疫測(cè)定是利用熒光素經(jīng)偏振光照射而躍入激發(fā)態(tài)，在回復(fù)至基態(tài)后可釋出光子，經(jīng)偏振儀形成偏振熒光，熒光偏振強(qiáng)度與熒光