中藥樂銀煎膏劑治療斑塊型銀屑病的臨床研究

中藥樂銀煎膏劑治療斑塊型銀屑病的臨床研究

銀屑病也稱為銀屑病。這是一種常見的皮膚科疾病，通常由突發(fā)性疾病引起。在尋常型銀屑病中,點(diǎn)狀銀屑病的治療相對(duì)容易,斑塊狀銀屑病是該病中較為頑固的一型,臨床治愈率較低,而且容易復(fù)發(fā)。筆者應(yīng)用樂銀煎膏劑治療斑塊狀銀屑病,并進(jìn)行相應(yīng)的細(xì)胞免疫和抗有絲分裂動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?，F(xiàn)報(bào)道如下。1臨床觀察1.1數(shù)據(jù)和方法1.1.1病例篩選及診斷銀屑病的診斷標(biāo)準(zhǔn)參照全國(guó)高等醫(yī)藥院校統(tǒng)編教材《皮膚性病學(xué)》(第4版)篩選出尋常型斑塊狀銀屑病病例。中醫(yī)辨證標(biāo)準(zhǔn)為:舌紅絳或見無苔/少苔、脈弦/弦細(xì)/沉弦,或兼見五心煩熱、潮熱盜汗、顴紅面赤等,即證屬陰虛陽(yáng)亢型。1.1.2觀察組和對(duì)照組的年齡、年齡以及資料來源采用隨機(jī)的原則(門診單雙號(hào)分組)將天津市長(zhǎng)征醫(yī)院銀屑病?？崎T診的病人分為觀察組和對(duì)照組。在冬春季節(jié)(1998-12~2000-03)進(jìn)行治療觀察。觀察組:160例,男88例,女72例,年齡14~65歲,平均年齡為30歲,病程10個(gè)月~31年,平均病程8.64年。對(duì)照組:100例,男56例,女44例,其平均年齡為30歲,病程11個(gè)月~30.5。兩組臨床資料比較差異無顯著性(P>0.05),具有可比性。以上病例皮疹主要表現(xiàn)在頭面部、四肢、軀干,均為斑塊狀皮疹,自覺癢或微癢。部分病例曾應(yīng)用過某些中、西藥物,均已停藥在6個(gè)月以上,其所應(yīng)用的藥物未發(fā)現(xiàn)與樂銀煎膏劑有協(xié)同作用。1.1.3中藥銀屑靈顆粒劑觀察組給予樂銀煎膏劑治療(其中藥組成為:龜版、鱉甲、牡蠣、生地黃、玄參、天門冬、夏枯草、白花蛇舌草、連翹、天花粉),由天津市長(zhǎng)征醫(yī)院制劑室出品。其制作工藝為:將中藥洗凈后,在常壓條件下,煮沸水提取2次,后濃縮至藥液藥物濃度為1g生藥/ml),50ml/次,2次/d,口服,每8周為1個(gè)療程,用藥1個(gè)療程后進(jìn)行療效觀察判定。對(duì)照組選用市售中成藥銀屑靈顆粒劑(主要成分:土茯苓、金剛藤,由山東北方制藥廠出品)作為對(duì)照藥物,10g/次,2次/d,口服。其用藥時(shí)間同觀察組。兩組外用藥均為潤(rùn)膚霜,主要成分為維生素E,不含激素。1.2結(jié)果1.2.1評(píng)估綜合效果的基準(zhǔn)根據(jù)中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)皮膚性病學(xué)會(huì)1991-10制定的銀屑病療效判定標(biāo)準(zhǔn)。1.2.2對(duì)照藥組療效觀察組痊愈8例,基本痊愈32例,顯效48例,有效48例,無效24例,總有效率為85%。對(duì)照藥組痊愈4例,基本痊愈8例,顯效14例,有效38例,無效36例,總有效率為64%。統(tǒng)計(jì)處理為卡方檢驗(yàn),χ2=25.40,P<0.01,差異具有顯著性。1.2.3不良反應(yīng)的消除觀察組服藥后,一過性惡心4例,便溏2例(占3.75%)。如將藥液加溫后服用,上述副作用較少出現(xiàn),一般停藥后即可消失,尚未見其他明顯的不良反應(yīng)。在治療過程中及以后3個(gè)月的隨訪中,經(jīng)化驗(yàn)未見肝功能、血、尿常規(guī)的異常變化。對(duì)照組在治療過程中出現(xiàn)口苦、惡心、腹脹等胃腸道反應(yīng)8例(占8%),也未見其他明顯的不良反應(yīng)。1.3復(fù)發(fā)率、時(shí)間1年后隨訪,在觀察組40例基本痊愈患者中,有4人復(fù)發(fā),復(fù)發(fā)率為10%,皮損面積、程度均較前次發(fā)病時(shí)減輕;在對(duì)照組12例基本痊愈患者中,有3人復(fù)發(fā),復(fù)發(fā)率為25%。2實(shí)驗(yàn)與研究2.1樂銀c1煎劑大鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)2.1.1藥品、樂銀公等產(chǎn)品動(dòng)物:健康昆明種小鼠,雌雄各半。購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所動(dòng)物繁育中心(北京)動(dòng)物合格證號(hào):醫(yī)動(dòng)字第01-3001號(hào)。藥品:樂銀C1煎膏劑為瓶裝深棕褐色稍顯粘稠狀液體。規(guī)格:100ml/瓶。取1000ml樂銀C1藥液加熱蒸發(fā)濃縮至300ml,原藥液藥物濃度為lg生藥/ml,濃縮后為3.3g生藥/ml,濃縮后的藥液4℃保存?zhèn)溆谩?.1.2對(duì)動(dòng)物一般狀況的觀察方法一:一次給藥樂銀C1煎膏劑急性毒性實(shí)驗(yàn)。取20只小鼠,雌雄各半,每只動(dòng)物灌胃樂銀C1煎膏劑0.8ml/20g體重(合133.2g生藥/kg體重),而后觀察動(dòng)物一般狀況,1周后稱取動(dòng)物體重與給藥前相比較。方法二:兩次給藥樂銀C1煎膏劑急性毒性實(shí)驗(yàn),基本方法同方法一,不同點(diǎn)在于24h內(nèi)兩次給藥使其24h內(nèi)累積給藥劑量達(dá)266.4g生藥/kg,觀察方法同方法一。2.1.3灌胃前后小鼠的急性毒性反應(yīng)總結(jié)由表1可知樂銀C1煎膏劑藥液以最大濃度,最大容積,無論一次還是二次小鼠灌胃(間隔20h)給藥,均未見到任何毒性反應(yīng),給藥后飼養(yǎng)觀察1周,動(dòng)物均能良好存活,給藥前后比較體重有明顯的增加。2.1.4結(jié)論樂銀C1煎膏劑小鼠灌胃其最大耐受量為266.4g生藥/kg體重,相當(dāng)于人用藥量的80倍,未見毒性反應(yīng)。2.2樂銀s1教育膏劑對(duì)小鼠腫瘤s180生長(zhǎng)的影響2.2.1材料動(dòng)物:同實(shí)驗(yàn)1。瘤源(株):荷S180肉瘤(腹水型)小鼠1只,為接種腫瘤細(xì)胞7d后生長(zhǎng)良好的荷瘤動(dòng)物,天津市醫(yī)藥科學(xué)研究所藥理室傳代保存。藥品:同實(shí)驗(yàn)1。陽(yáng)性對(duì)照藥品:選擇常規(guī)腫瘤化療藥物環(huán)磷酰胺,江蘇省連云港制藥廠產(chǎn)品,粉針劑200mg/支,批號(hào)970115。用時(shí)以注射用生理鹽水溶解新鮮配制成所需濃度供小鼠腹腔注射用。2.2.2方法樂銀C1煎膏劑抑瘤實(shí)驗(yàn)按常規(guī)腫瘤接種及藥物篩選方法進(jìn)行。腫瘤接種:將荷瘤小鼠(瘤株)脫頸椎處死,常規(guī)碘酒、酒精消毒,于無菌條件下吸取腹水(含有腫瘤細(xì)胞),按照腹水∶生理鹽水=1∶4的比例進(jìn)行稀釋,將稀釋后的腹水接種于動(dòng)物右側(cè)腋窩皮下0.2ml/只。動(dòng)物接種腫瘤細(xì)胞后第2天隨機(jī)分組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。分組與給藥:本實(shí)驗(yàn)分兩批進(jìn)行,第1批選擇雌性動(dòng)物設(shè)3組,即對(duì)照組、環(huán)磷酰胺組及樂銀C1煎膏劑33g/kg組,第2批選擇雄性動(dòng)物設(shè)兩組,即對(duì)照組和樂銀C1煎膏劑66g/kg組。樂銀C1煎膏劑為灌胃給藥,接種腫瘤細(xì)胞后第2天開始給藥,連續(xù)7d,環(huán)磷酰胺為腹腔注射給藥,劑量為50mg/kg給藥1次,在腫瘤細(xì)胞接種后2d給入。全部動(dòng)物在腫瘤細(xì)胞接種后第10天脫頸椎處死,取出腫瘤稱重而后稱取動(dòng)物體重比較抑瘤率:2.2.3結(jié)果樂銀C1煎膏劑對(duì)小鼠腫瘤S180生長(zhǎng)抑制作用結(jié)果見表2。結(jié)果指出樂銀C1煎膏劑灌胃劑量分別為66g/kg與33g/kg時(shí)對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的抑制率分別為7.26%和11.20%,P值均大于0.05,差異無顯著性。2.2.4結(jié)論樂銀C1煎膏劑對(duì)灌胃給藥66g/kg和33g/kg時(shí),對(duì)小鼠腫瘤S180的生長(zhǎng)有微弱的抑制作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明樂銀對(duì)灌胃給藥66g/kg和33g/kg時(shí),對(duì)小鼠腫瘤S180的生長(zhǎng)有微弱的抑制作用,與對(duì)照組進(jìn)行比較差異無顯著性。2.3樂銀c1煎劑對(duì)大鼠免疫的影響2.3.1藥品、試劑與儀器動(dòng)物:ICR小鼠,雌雄兼用體重18~24g來源同實(shí)驗(yàn)一,動(dòng)物合格證號(hào):醫(yī)動(dòng)字第01-0387號(hào)。藥品:同實(shí)驗(yàn)1。陽(yáng)性對(duì)照藥;注射用環(huán)磷酰胺,同實(shí)驗(yàn)2;左旋咪唑,廣東省制藥工業(yè)公司華南制藥廠產(chǎn)品,片劑,規(guī)格25mg/片,批號(hào)930101,以蒸餾水配制成所需濃度的混懸液,室溫保存,供動(dòng)物灌胃用。試劑:DNCB(2.4二硝基氯苯)北京化工三廠產(chǎn)品,以丙酮新鮮配制成所需濃度溶液,供動(dòng)物皮下注射及涂抹耳殼皮膚用(具體內(nèi)容見方法部分)。儀器:注射器、打孔器、扭力天平、手術(shù)刀。2.3.2動(dòng)物雙耳drt測(cè)定采用遲發(fā)超敏實(shí)驗(yàn)方法,各組實(shí)驗(yàn)小鼠頸背部皮下注射5%DNCB丙酮溶液20μl/只,做致敏處理。皮下注射后10d再以1%DNCB丙酮溶液均勻涂抹小鼠右耳殼反正兩面皮膚0.05ml/只并以同體積丙酮涂抹左耳殼正反兩面皮膚作對(duì)照,18h后將動(dòng)物脫頸椎處死,用直徑8mm打孔器于雙耳對(duì)稱處取下耳片用扭力天平稱得,計(jì)算DHR(DHR=右耳片重量-左耳片重量),作統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。分組與給藥,全部動(dòng)物致敏處理后第3天隨機(jī)分成6組,分別為對(duì)照組、環(huán)磷酰胺組(腹腔注射環(huán)磷酰胺25mg/kg)、環(huán)磷酰胺加樂銀組(腹腔注射環(huán)磷酰胺25mg/kg并灌胃樂銀66g/kg)、環(huán)磷酰胺加左旋咪唑組(腹腔注射環(huán)磷酰胺25mg/kg并灌胃左旋咪唑7.5mg/kg)、樂銀組(灌胃樂銀66g/kg)各組均連續(xù)給藥7d,末次給藥30min后耳殼涂抹DNCB。2.3.3正常小鼠的細(xì)胞免疫變化見表3。由表3可見,環(huán)磷酰胺組動(dòng)物DHR值是8.22±2.77,明顯低于對(duì)照組(DHR=11.58±1.78),說明環(huán)磷酰胺對(duì)小鼠的細(xì)胞免疫產(chǎn)生了明顯的抑制作用;樂銀(66g/kg×7)和左旋咪唑(7.5mg/kg×7)分別與環(huán)磷酰胺合用,其DHR分別為13.89±1.62和11.01±2.60接近或高于正常對(duì)照組動(dòng)物的DHR值。正常小鼠(不接受環(huán)磷酰胺的動(dòng)物)灌胃樂銀C1煎膏劑66g/kg,其DHR值為18.50±2.64高于正常對(duì)照動(dòng)物。樂銀C1煎膏劑可恢復(fù)由環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)免疫抑制小鼠的免疫功能。2.4樂銀c1煎劑對(duì)大鼠陰道上皮細(xì)胞的克隆復(fù)制的影響2.4.1藥品、試劑與儀器動(dòng)物:同實(shí)驗(yàn)1,但僅選用雌性小鼠。藥品:同實(shí)驗(yàn)1。試劑:(1)己烯雌酚注射液,天津市氨基酸公司產(chǎn)品,批號(hào)980528,規(guī)格1ml(0.5mg)/安瓿。(2)秋水仙堿,由天津市醫(yī)藥科學(xué)研究所同位素室提供,為白色粉末狀試劑,使用時(shí)以生理鹽水配制成所需濃度溶液。(3)其它病理組織切片所使用的常規(guī)試劑。陽(yáng)性對(duì)照藥,注射用甲氨喋呤,上海華聯(lián)制藥有限公司產(chǎn)品批號(hào)980407,規(guī)格5mg/安瓿,用時(shí)以生理鹽水配成所需濃度的溶液。2.4.2動(dòng)物分組、給藥與給藥方案將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(體重18~20g)隨機(jī)分成4組:對(duì)照組,甲氨喋呤組,樂銀C1煎膏劑大劑量及小劑量組成。所有動(dòng)物均連續(xù)3d下午腹腔注射己烯雌酚0.2mg/只,1次/d使小鼠陰道上皮處于雌激素周期。3d后各組動(dòng)物按下述方案開始給藥;對(duì)照動(dòng)物灌服相應(yīng)容積(0.2ml/10g)的生理鹽水,甲氨喋呤組動(dòng)物腹腔注射甲氨喋呤1mg/kg,1次/d,連續(xù)3d,樂銀C1煎膏劑大、小劑量組,動(dòng)物分別灌服樂銀C1煎膏劑66g/kg和33g/kg,1次/d,連續(xù)9d,在連續(xù)給藥的9d均每天上午給藥,每天下午繼續(xù)腹腔注射己烯雌酚,劑量同前,最后1次給藥后1h所有小鼠均腹腔注射秋水仙堿2mg/kg,使細(xì)胞有絲分裂周期停止在有絲分裂中期。注射秋水仙堿后6h將動(dòng)物處死,解剖取出陰道組織,常規(guī)福爾馬林固定。脫水,石蠟包埋組織切片,HE染色后光鏡下計(jì)數(shù)200個(gè)陰道基底細(xì)胞中所出現(xiàn)的有絲分裂數(shù),計(jì)算有絲分裂百分?jǐn)?shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析比較。2.4.3樂銀2c的劑量對(duì)底細(xì)胞抑制率的影響見表4。由表4可見甲氨喋呤、樂銀大、小劑量給藥對(duì)雌激素誘導(dǎo)的陰道黏膜上皮的增殖(基底細(xì)胞有絲分裂)有不同程度的抑制作用,抑制率分別為55.59%,22.07%和7.74%,樂銀C1煎膏劑劑量在33~66g/kg時(shí)有明確的量-效關(guān)系。樂銀C1煎膏劑對(duì)處于雌激素周期的小鼠陰道上皮細(xì)胞增殖有一定的抑制作用并存在著一定的量-效關(guān)系。3樂銀方的藥養(yǎng)作用、熱固定期、排充銀屑病的病因是諸多因素引起的細(xì)胞免疫功能及體液免疫功能紊亂。淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率和E花環(huán)形成率顯著降低,皮膚遲發(fā)性過敏反應(yīng)減弱,CD4和CD4/CD8降低,CD8增高,血清IgA,IgE升高,在角質(zhì)層尚可見有抗角質(zhì)層的自身抗體。有學(xué)者認(rèn)為免疫異?？蓪?dǎo)致角朊細(xì)胞膜的異常,隨之而引起cAMP和前列腺素失去平衡,使表皮增生而發(fā)病。人體的T細(xì)胞各亞群均屬免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞,在維持免疫平衡上起重要作用的TH、TS兩種細(xì)胞相互制約保持著動(dòng)態(tài)平衡。根據(jù)上述理論目前有許多的免疫促進(jìn)劑問世,如胸腺肽、胸腺因子D、扶正女貞素片、卡介菌多糖核酸注射液等。上述藥物在治療銀屑病方面均取得了不同程度的療效。中醫(yī)學(xué)理論對(duì)斑塊狀銀屑病的成因看法是:由于六淫犯肺,肺經(jīng)蘊(yùn)熱而溢于肌膚,出現(xiàn)斑疹而成癬。開始大多為點(diǎn)狀,后因病久營(yíng)衛(wèi)失和,氣血暗傷;肺經(jīng)有熱不得宣泄或肺感風(fēng)寒后郁久化熱;金過伐木而傷及肝經(jīng)、陰血、津液,由于陰液虧損、肌膚失養(yǎng),皮疹擴(kuò)大而成斑片肥厚。臨床以陰虛陽(yáng)亢的斑塊狀銀屑病這種類型較為常見。目前治療該病多沿襲傳統(tǒng)的治療方法:如清熱解毒,涼血攻下,清熱利濕,活血化淤,由于缺乏扶正祛邪而易于復(fù)發(fā);又因藥物一味苦寒,克傷脾胃而中止治療。樂銀方一改傳統(tǒng)的治療方法,立足于扶正祛邪,滋養(yǎng)陰血,使浮陽(yáng)之熱回潛,結(jié)片之皮疹得陰血而消散。清熱而不傷脾胃,解毒而不傷陰血,滋陰散結(jié)而不傷正氣。方中龜版、鱉甲、牡蠣為君藥,平肝潛陽(yáng)、散結(jié),使浮越于表的陽(yáng)熱回潛;生地黃、玄參、天門冬為臣藥,助君藥滋陰生津,涼血散結(jié);夏枯草、白花蛇舌草、天花粉、連翹為佐使藥,清熱解毒,瀉火散結(jié)。該方及法的產(chǎn)生減少了銀屑病易于復(fù)發(fā),除對(duì)斑塊狀銀屑病有效外,同時(shí)能不同程度地緩解部分病人伴有的高血壓病。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示樂銀方與環(huán)磷酰胺合用時(shí)可恢復(fù)由環(huán)磷酰胺所致的動(dòng)物細(xì)胞免疫抑制,使之達(dá)到正常水平,提示對(duì)細(xì)胞免疫具有明顯的調(diào)節(jié)作用。由于樂銀方對(duì)小鼠陰道上皮細(xì)胞增殖具有抑制作用,即具有抗有絲分裂作用,且呈量-效正相關(guān),提示具有抗銀屑病的作用。樂銀與抗腫