實(shí)驗(yàn)1-蛋白質(zhì)性質(zhì)一

實(shí)驗(yàn)一蛋白質(zhì)的性質(zhì)實(shí)驗(yàn)

蛋白質(zhì)及氨基酸的呈色反應(yīng)蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)1.學(xué)習(xí)幾種常用的鑒定蛋白質(zhì)和氨基酸的方法及其原理。2.加深對蛋白質(zhì)膠體分子穩(wěn)定因素的認(rèn)識，了解蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)、變性作用的原理及其相互關(guān)系?！灸康暮鸵蟆浚ㄒ唬┑鞍踪|(zhì)及氨基酸的呈色反應(yīng)

雙縮脲在堿性條件下可與Cu2+結(jié)合生成復(fù)雜的紫紅色化合物。此反應(yīng)稱為雙縮脲反應(yīng)。

蛋白質(zhì)或二肽以上的多肽分子中，含有多個與雙縮脲結(jié)構(gòu)相似的肽鍵，因此也有雙縮脲反應(yīng)，可用此法鑒定蛋白質(zhì)的定性和定量。1.雙縮脲反應(yīng)【實(shí)驗(yàn)原理】水合茚三酮還原茚三酮紫色物質(zhì)注意：脯氨酸、羥脯氨酸與茚三酮反應(yīng)生成黃色物質(zhì)。此反應(yīng)用于定性、定量鑒定氨基酸。2.茚三酮反應(yīng)

(二)蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)

蛋白質(zhì)分子由于形成水化層和雙電層而成為穩(wěn)定的膠體顆粒。

在一定的物理化學(xué)因素影響下，蛋白質(zhì)顆粒失去電荷、脫水，甚至變性而喪失穩(wěn)定因素，即以固態(tài)形式從溶液中析出，這種作用稱為蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)。蛋白質(zhì)H2OH2OH2OH2O++++(pH>pI)1.可逆沉淀反應(yīng)

在發(fā)生沉淀反應(yīng)時，蛋白質(zhì)雖已沉淀析出，但其分子內(nèi)部結(jié)構(gòu)并未發(fā)生顯著變化，基本上保持原有的性質(zhì)。沉淀因素除去后，蛋白質(zhì)沉淀可再溶于原來的溶劑中。這種沉淀反應(yīng)稱為可逆沉淀反應(yīng)。鹽析作用脫去水化層電荷被中和低溫下乙醇或丙酮對蛋白質(zhì)的短時間作用等電點(diǎn)沉淀用大量中性鹽使蛋白質(zhì)從溶液中析出的過程。

在發(fā)生沉淀反應(yīng)時，蛋白質(zhì)的分子內(nèi)部結(jié)構(gòu)，空間構(gòu)象遭到破壞，失去其天然蛋白質(zhì)的性質(zhì)，這時蛋白質(zhì)已發(fā)生變性。變性后的蛋白質(zhì)沉淀不能再溶解于原來的溶液中，這種沉淀反應(yīng)稱為不可逆沉淀反應(yīng)。2.不可逆的沉淀反應(yīng)重金屬鹽有機(jī)溶劑生物堿試劑過酸、過堿加熱、震蕩、超生波【實(shí)驗(yàn)方法】雙縮脲反應(yīng):

取少量尿素結(jié)晶，加入干燥試管中。用微火加熱使尿素熔化。熔化的尿素開始硬化時，停止加熱，尿素放出氨，形成雙縮脲。冷后加入10滴雙縮脲試劑，混勻,觀察顏色變化。另取1支試管，加入卵清蛋白溶液1ml再加入5滴雙縮脲試劑，混勻，觀察顏色變化。2.茚三酮反應(yīng)

取2支試管，分別加入卵清蛋白溶液和0.5%甘氨酸溶液4滴，再加入2滴0.1%茚三酮乙醇溶液，混勻，在沸水浴中加熱1-2分鐘，放置冷卻，觀察顏色變化，并比較蛋白質(zhì)和氨基酸呈色深淺。3.蛋白質(zhì)的鹽析作用

取1支試管，加入3ml蛋白質(zhì)-NaCl

溶液和3ml飽和硫酸銨溶液，混勻，靜置10分鐘，球蛋白則沉淀析出。過濾后向?yàn)V液中加入硫酸銨粉末，邊加邊用玻璃棒攪拌，至粉末不再溶解，析出的沉淀為清蛋白。靜置，棄上部清液，取部分清蛋白沉淀加水稀釋，觀察它是否溶解。4.重金屬沉淀蛋白質(zhì)取1支試管，加入約1ml卵清蛋白質(zhì)液，加入2%硝酸銀溶液1滴，觀察沉淀的生成。5.有機(jī)酸沉淀蛋白質(zhì)

取1支試管，加入卵清蛋白質(zhì)液約0.5ml，然后滴加10%三氯乙酸溶液數(shù)滴，觀察沉淀的生成。

1.酒精燈加熱試管時，試管口勿對人。2.濃硝酸滴加時小心，勿傷人及桌面。3.試劑用完及時蓋上蓋，防止揮發(fā)。4.觀察現(xiàn)象時，隨加隨搖，及時記錄。5.藥品放回原處，清點(diǎn)自己物品?！咀⒁馐马棥?.如果蛋白質(zhì)水解作用一直進(jìn)行到雙縮脲反應(yīng)呈陰性結(jié)果，此作何結(jié)論?2.茚三酮反應(yīng)的陽性結(jié)果是否經(jīng)常是同一色調(diào)?