微生物和免疫學試驗(六)七年制

微生物和免疫學試驗(六)七年制要求講解：腸道桿菌、霍亂弧菌、3種厭氧菌示教片：腸道桿菌、霍亂弧菌、3種厭氧菌示教平板：SS平板（腸道致病均和非致病均各一個）、雙糖鐵培養(yǎng)基（大腸、痢疾、傷寒、變形）、炭疽卷發(fā)樣菌落；其它示教：小生化反應（大腸、痢疾、傷寒、變形）操作：肥達反應（注意標簽貼試管上，不要貼到架子上）錄像：腸道桿菌操作：肥達反應（試管凝集反應）器材：試管6支/人，試管架1個/2人，吸管1支/人，標簽1個/人已知：傷寒H抗原、O抗原（4人/組）甲型副傷寒H抗原乙型副傷寒H抗原待檢：病人血清（1：10稀釋）倍比稀釋法123456生理鹽水0.50.50.50.50.50.5血清0.5（吹打）0.50.50.50.50.5（棄）菌液0.5ml/管，從第61管加，振勻水浴43度，2h最終血清1：401：801：1601：3201：640對照稀釋度凝集強弱效價*吸管桶，試管鍋,標簽貼在試管上。結(jié)果判斷以出現(xiàn)凝集的血清最高稀釋倍數(shù)為該血清抗體效價O達到1：80，H達到1：160

H甲（PA）或H乙（PB）達到1：80或以上有診斷意義結(jié)合當?shù)亓餍胁W史、病程和抗體消長的意義進行判斷。 第6管均勻混濁＋少量凝集＋＋細菌部分沉于管底，液體半澄清，凝集呈顆粒狀

＋＋＋大部分凝集，液體輕度混濁，凝集塊較大＋＋＋＋全部凝集，液體澄清，大片凝集塊O、H>正常值感染可能性大O、H

低感染可能性小

O

不高

H

高預防接種或非特異性回憶反應

O

高

H

不高感染早期或交叉反應類別凝集效價意義腸道桿菌的鑒定大腸桿菌傷寒桿菌變形桿菌痢疾桿菌SS培養(yǎng)基膽鹽枸櫞酸鹽煌綠乳糖蛋白胨中性紅抑制雜菌生長被非致病菌分解產(chǎn)酸被致病菌分解產(chǎn)堿酸：紅堿：黃Shigella-Salmonellamedium菌落紅色——乳糖發(fā)酵陽性，非致病菌菌落無色——乳糖發(fā)酵陰性，致病菌雙糖鐵培養(yǎng)基下層上層葡萄糖半固體酚紅乳糖硫酸亞鐵生化反應表葡乳麥甘蔗H2S尿素靛大腸---痢疾------傷寒--/+--變形-----霍亂弧菌炭疽桿菌致病菌中最大的G＋粗大桿菌,兩端平切、排列呈竹節(jié)狀；有莢膜，芽胞在有氧條件下形成，呈橢圓形，位于菌體中央●培養(yǎng):

30~35℃，在普通瓊脂培養(yǎng)基上形成灰白色粗糙型菌落，邊緣不整齊，在低倍鏡下觀察邊緣呈卷發(fā)狀

炭疽桿菌培養(yǎng)基厭氧菌1、破傷風：G＋；芽胞位于菌體頂端，大于菌體，使細菌呈鼓槌狀；菌體細長，有周身鞭毛厭氧血平板上的羽毛狀菌落庖肉培養(yǎng)基

成分

牛肉浸液1000mL

蛋白胨30g

酵母膏5g

磷酸二氫鈉5g

葡萄糖3g

可溶性淀粉2g

碎肉渣適量

pH7.8

制法

1稱取新鮮除脂肪和筋膜的碎牛肉500g，加蒸餾水1000mL和1mol/L氫氧化鈉溶液25mL，攪拌煮沸15min，充分冷卻，除去表層脂肪，澄清，過濾，加水補足至1000mL。加入除碎肉渣外的各種成分，校正pH。

2碎肉渣經(jīng)水洗后晾至半干，分裝15mm×150mm試管約2～3cm高，每管加入還原鐵粉0.1～0.2g或鐵屑少許。將上述液體培養(yǎng)基分裝至每管內(nèi)超過肉渣表面約1cm。上面覆蓋溶化的凡士林或液體石蠟0.3～0.4cm。121℃高壓滅菌15min。

庖肉培養(yǎng)基破傷風梭菌培養(yǎng)基破傷風痙攣2、產(chǎn)氣莢膜梭菌：兩端幾乎平切的G＋粗大桿菌；芽胞位于次極端，呈橢圓形，不大于菌體；在體內(nèi)有明顯的莢膜；無鞭毛生化反應：血瓊脂平板上，雙層溶血環(huán)（θ、α毒素），“靶樣溶血”血平板（雙層溶血環(huán)）代謝活躍

高層瓊脂斷裂試驗

庖肉培養(yǎng)基：分解肉渣中的糖類，產(chǎn)酸產(chǎn)氣，肉渣淡紅色

牛乳培養(yǎng)基：可出現(xiàn)“洶涌發(fā)酵”（storm