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乙肝病毒研究———生物技術(shù)2班

王淼1/41危害人類健康HBV2/41乙肝病毒探秘乙肝病毒是較小病毒之一，需在電子顯微鏡下放大幾十萬(wàn)倍才能見(jiàn)到。

乙肝病毒為直徑42納米（毫微米）雙層園形顆粒（醫(yī)學(xué)上稱戴恩氏顆粒），它結(jié)構(gòu)可比喻為一個(gè)雞蛋，乙肝病毒外衣如同雞蛋外殼，醫(yī)學(xué)上把它稱為乙肝表面抗原（HBsAg)；乙肝病毒關(guān)鍵部分相當(dāng)于雞蛋中卵黃，醫(yī)學(xué)上稱為乙肝關(guān)鍵抗原（HBcAg)

乙肝病毒侵入人體肝臟時(shí)，把外衣扔在肝細(xì)胞膜外，而關(guān)鍵部分則長(zhǎng)軀直入，在肝細(xì)胞核內(nèi)開起了“病毒加工廠”。

3/41顯微鏡下乙肝病毒4/41乙肝病毒在肝細(xì)胞核內(nèi)棲息繁衍（醫(yī)學(xué)稱為復(fù)制），分別復(fù)制出乙肝表面抗原與關(guān)鍵抗原，二者在肝細(xì)胞內(nèi)又組裝成新一代乙肝病毒顆粒，并從肝細(xì)胞轉(zhuǎn)移到血液中，隨血液循環(huán)漫游全身各臟器。因?yàn)椴《就鈿?fù)制多于病毒關(guān)鍵復(fù)制，多出外殼大量釋放到血液中，即可檢出乙肝表面抗原陽(yáng)性。

乙肝關(guān)鍵抗原因深藏在肝細(xì)胞里，或被表面抗原緊緊包裹，所以在血液中難以測(cè)到。但它經(jīng)常將一個(gè)片段釋放出來(lái)，醫(yī)學(xué)上把這個(gè)片段叫做e抗原(HBeAg)。所以，乙肝病毒在肝內(nèi)繁殖復(fù)制時(shí)，血液中可查出表面抗原、e抗原，以及機(jī)體針對(duì)關(guān)鍵抗原而產(chǎn)生關(guān)鍵抗體（抗-HBc）。這三種標(biāo)志物均陽(yáng)性簡(jiǎn)稱為“三陽(yáng)”。

5/41乙肝病毒對(duì)肝細(xì)胞并無(wú)直接損傷作用。肝細(xì)胞損傷是否，與人體免疫功效相關(guān)。人體有去除異己、保護(hù)本身抗病機(jī)構(gòu)“免疫系統(tǒng)”。因?yàn)橐腋尾《娟P(guān)鍵部分盤踞在肝細(xì)胞核內(nèi)，所以免疫系統(tǒng)要去除乙肝病毒，往往會(huì)同時(shí)破壞肝細(xì)胞。輕則表現(xiàn)為急性黃疸型或無(wú)黃疸型肝炎，重則表現(xiàn)為重癥肝炎，重復(fù)發(fā)作則表現(xiàn)為慢性肝炎，成為肝硬化、肝癌根源。

一部分人免疫系統(tǒng)與乙肝病毒“和平共處”，任其棲息繁衍，自生自滅，因而不產(chǎn)生免疫反應(yīng)，肝細(xì)胞完整無(wú)損，肝功效正常，這就成為乙肝病毒攜帶者。

6/41多數(shù)人感染乙肝病毒后，因?yàn)轶w內(nèi)免疫系統(tǒng)作用，逐步產(chǎn)生能與表面抗原結(jié)合抗體，即乙肝表面抗體（抗-HBs）。其作用是中和表面抗原，使病毒無(wú)法繼續(xù)裝配完整病毒而繁殖下去所以，表面抗體陽(yáng)性出現(xiàn)，說(shuō)明人體對(duì)乙肝病毒已產(chǎn)生了足夠抵抗力，并能預(yù)防乙肝病毒再次感染和發(fā)病。

人體感染乙肝病毒后，經(jīng)4-24周潛伏期，即出現(xiàn)不一樣程度臨床癥狀及類型。大多數(shù)為無(wú)任何癥狀隱性感染及僅有輕微不適亞臨床感染者，而出現(xiàn)顯著肝炎癥狀患者及成為慢性肝病毒攜帶者僅為少數(shù)。乙肝患者主要臨床表現(xiàn)為肝區(qū)疼痛、肝臟腫大、黃疸、肝功效異常等。急性期普通連續(xù)1-2個(gè)月逐步痊愈。但也有10-20%病人可發(fā)展成慢性肝炎，其中少數(shù)發(fā)展成肝硬化或肝癌。

7/41乙肝病毒特征（１）ＨＢＶ含有頑強(qiáng)抵抗力

對(duì)熱、對(duì)低溫、對(duì)干燥、對(duì)紫外線及普通濃度化學(xué)消毒劑，都能耐受；在零下２０度時(shí)可存活２０年；在３７度時(shí)可存活７天，在５５度時(shí)依然能存活６小時(shí)，酒精、來(lái)蘇兒、碘酒等對(duì)它不起作用。不過(guò)，加熱到１００度１０分鐘可使其失去傳染活性，對(duì)０．５％過(guò)氧乙酸、３％漂白粉、０．２％新潔爾滅敏感。8/41（２）ＨＢＶ嗜肝性

ＨＢＶ一旦入侵人體，就要侵襲肝臟，并在那里定居繁衍后代，這就是它們嗜肝性。據(jù)研究，這是因?yàn)楦渭?xì)胞表面有一個(gè)“受體”緣故，專門接收ＨＢＶ。大量ＨＢＶ集中于肝細(xì)胞內(nèi)，并在其中復(fù)制，不停侵襲，誘發(fā)肝細(xì)胞發(fā)生免疫損傷。9/41（３）ＨＢＶ輕度泛嗜性

所謂泛嗜性就是非肝臟組織它也侵襲，比如膽管上皮細(xì)胞、胰腺上皮細(xì)胞、腎小管細(xì)胞、胃黏膜細(xì)胞及血液中單核細(xì)胞等，侵入這些地方也可致病，如ＨＢＶ相關(guān)性腎炎、ＨＢＶ性糖尿病等。但這些泛嗜性并不一定會(huì)發(fā)生，很多人沒(méi)有泛嗜性損害，所以說(shuō)是“輕度”泛嗜性。ＨＢＶ主要還是侵襲肝臟。10/41（４）嚴(yán)格種屬特征

到當(dāng)前為止，只有些人、黑猩猩、長(zhǎng)臂猿、狒狒對(duì)ＨＢＶ易于感染，即使在吸血昆蟲體內(nèi)檢驗(yàn)到ＨＢＶ蹤跡，但只是暫時(shí)“居住”而已，普通不會(huì)在它們體內(nèi)復(fù)制和增殖。11/41（５）ＨＢＶ感染慢性化

我國(guó)ＨＢＶ感染有顯著慢性化傾向，尤其是胎兒期及幼兒期感染，多為慢性化過(guò)程，長(zhǎng)久攜帶ＨＢＶ，體內(nèi)呈“免疫耐受”狀態(tài)，不能將病毒去除，這個(gè)過(guò)程可長(zhǎng)達(dá)１０－３０年或更久，是主要傳染源。12/41（６）ＨＢＶ基因變異性

ＨＢＶ是極度易變異病毒之一，它四個(gè)基因組（Ｓ、Ｃ、Ｐ、Ｘ）均可變異，變異是病毒特征，但往往給診療和治療帶來(lái)困難。（７）ＨＢＶ致癌性

現(xiàn)在已經(jīng)必定，ＨＢＶ是肝癌主要病因，約８０％－９０％肝癌有乙肝背景。有些人觀察發(fā)覺(jué)，２０年乙肝病毒感染史者，約有５％１０％發(fā)生癌變。癌變?cè)蚴牵龋拢郑鼗蛘系礁渭?xì)胞基因上，發(fā)生突變，造成肝癌。

13/41乙肝病毒復(fù)制之謎在醫(yī)學(xué)上，病毒繁殖被稱之為“復(fù)制”，這是因?yàn)樗幌窦?xì)胞和寄生蟲那樣經(jīng)過(guò)細(xì)胞核分裂等方式繁殖，而是像我們鑄造機(jī)器零件一樣，按照一定模具復(fù)制出來(lái)。在復(fù)制過(guò)程中，有兩個(gè)很主要原因：一個(gè)是催化劑，另一個(gè)是模板。沒(méi)有這兩個(gè)原因，乙肝病毒就不能復(fù)制。

14/41大量復(fù)制乙肝病毒15/41HBV長(zhǎng)久攜帶者，假如HBV-DNA與肝細(xì)胞DNA發(fā)生整合，人體免疫衛(wèi)士不能對(duì)其識(shí)別，不產(chǎn)生攻擊和追捕。這類HBV患者，在治療方案上：在主動(dòng)提升本身免疫力同時(shí)，還需打破免疫耐受。

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乙肝病毒復(fù)制“催化劑”叫做乙肝病毒DNA聚合酶(HBVDNA-P)。這種酶存在于乙肝病毒內(nèi)核，與乙肝病毒關(guān)鍵抗原(HBcAg)、e抗原(HBeAg)和病毒基因(DNA)共同組成乙肝病毒關(guān)鍵。它作用就是"催化"乙肝病毒基因按照一定模板復(fù)制出DNA鏈。沒(méi)有這種聚合酶作用，乙肝病毒復(fù)制就會(huì)停頓。所以，抑制乙肝病毒DNA聚合酶藥品，即可直接抑制乙肝病毒復(fù)制。

17/41乙肝病毒復(fù)制“原始模板”是cccDNA。這種原始模板是怎樣形成呢？乙肝病毒基因組(DNA)是由兩條螺旋DNA鏈圍成一個(gè)環(huán)形結(jié)構(gòu)。其中一條較長(zhǎng)負(fù)鏈已經(jīng)形成完整環(huán)狀；另一條長(zhǎng)度較短正鏈，呈半環(huán)狀。在感染肝細(xì)胞之后，這條半環(huán)狀DNA鏈要以負(fù)鏈為模板，在催化劑──乙肝病毒DNA聚合酶作用下延長(zhǎng)，最終形成完整環(huán)狀。這時(shí)乙肝病毒基因組就形成了一個(gè)完全環(huán)狀雙股DNA。我們把這種DNA稱做共價(jià)閉合環(huán)狀DNA(即cccDNA)，似乎能夠把它看作是病毒復(fù)制原始模板。模板形成后，按照模板形狀復(fù)制新病毒基因就很輕易了。病毒基因會(huì)以其中一條cccDNA為模板，利用肝細(xì)胞基因中酶和DNA聚合酶"催化"，一段基因又一段基因地復(fù)制，形成負(fù)鏈、正鏈。最終再裝配到一起形成新乙肝病毒DNA顆粒。

18/41有些人把cccDNA比做乙肝病毒復(fù)制“種子”，我卻認(rèn)為把它比做“野草根”更為適合。俗話說(shuō)：“拔草輕易，除根難”，這種cccDNA是乙肝病毒復(fù)制中主要中間產(chǎn)物，一旦它在肝細(xì)胞核內(nèi)形成，就含有了高度穩(wěn)定性，可長(zhǎng)久存在于肝細(xì)胞內(nèi)，不但起著剛才所說(shuō)“模板”作用，而且還像深深扎根在泥土里野草一樣極難完全去除。不論用什么抗病毒藥品，不論胞漿內(nèi)DNA受到多大抑制，也不論用藥時(shí)間有多久，均極難去除這種cccDNA。只要肝細(xì)胞內(nèi)有極少許cccDNA，當(dāng)停藥后，核內(nèi)cccDNA又可再次成為病毒復(fù)制"模型"，繼續(xù)復(fù)制乙肝病毒DNA。這么就造成了一些抗病毒藥品停藥后“反跳現(xiàn)象”。19/41乙肝病毒復(fù)制也有“冬眠”時(shí)候。當(dāng)感染機(jī)體乙肝病毒處于e抗原陰性、e抗體陽(yáng)性“小三陽(yáng)”狀態(tài)時(shí)，就是乙肝病毒復(fù)制冬眠期。這時(shí)，乙肝病毒幾乎無(wú)復(fù)制，它野草根cccDNA深深地隱藏在肝細(xì)胞核內(nèi)處于休眠狀態(tài)。但這種狀態(tài)病毒還可能“復(fù)活”，可能因?yàn)槟撤N原因誘發(fā)其重新轉(zhuǎn)變?yōu)閑抗原陽(yáng)性病毒復(fù)制狀態(tài)。在乙肝病毒冬眠期，病人病情相對(duì)平穩(wěn)，傳染性也很小，但當(dāng)前全部抗病毒藥品也對(duì)藏在細(xì)胞深處休眠病毒基因也奈何不得。所以，在這一時(shí)期使用何種抗病毒藥品都是徒勞。

人類從發(fā)覺(jué)乙肝病毒顆粒，到解開病毒復(fù)制之迷，又到現(xiàn)在抑制病毒DNA聚合酶藥品發(fā)覺(jué)，一步一步地前進(jìn)。相信很快，斬草除根藥品、反抗“冬眠期”病毒藥品將會(huì)出現(xiàn)，人類終究會(huì)戰(zhàn)勝乙肝病毒一頑敵。

20/41HBV在體內(nèi)持久攜帶，易造成免疫功效紊亂，警覺(jué)肝臟相關(guān)疾病發(fā)生。所以不論有沒(méi)有癥狀都需要定時(shí)檢驗(yàn)。

21/41乙肝病毒感染病毒模型研究新進(jìn)展體外模型體內(nèi)模型22/41一、體外模型

乙型肝炎病毒（hepatitisBvirus，HBV）感染有高度種屬和組織特異性，它只感染人和類人猿。其原因是病毒黏附以及病毒DNA轉(zhuǎn)錄及復(fù)制對(duì)細(xì)胞有嚴(yán)格要求[1]。體外培養(yǎng)人和類人猿原代肝細(xì)胞能夠支持HBV復(fù)制，但細(xì)胞維持時(shí)間不長(zhǎng)。能在體外長(zhǎng)久培養(yǎng)肝源性腫瘤細(xì)胞株2.2.15是應(yīng)用最廣泛乙型肝炎細(xì)胞模型。將含有HBV基因組（２個(gè)HBV頭對(duì)尾二聚體，以尾對(duì)尾方向串聯(lián)）重組載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞，經(jīng)G418篩選，得到克隆能穩(wěn)定分泌HBsAg、HBeAg及Dane顆粒，可檢測(cè)到細(xì)胞內(nèi)DNA和RNA，但無(wú)cccDNA。2.2.15細(xì)胞模型存在問(wèn)題是：HBV是整合在宿主細(xì)胞染色體上，復(fù)制方式與自然感染不一樣，且不能被去除；病毒復(fù)制水平不能人為改變；病毒復(fù)制水平低。23/41為克服HBV細(xì)胞膜屏障，人們借用其它病毒感染能力，把HBV導(dǎo)入到靶細(xì)胞。Delaney等[2]報(bào)道了一個(gè)抗HBV藥品體外篩選系統(tǒng)，即HBV-桿狀病毒-HepG2系統(tǒng)。利用桿狀病毒AutographaCalifornia將含有復(fù)制能力HBV基因組導(dǎo)入到HepG2細(xì)胞，檢測(cè)到高水平HBV表示，包含細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外HBVDNA和RNA，以及cccDNA和各種HBV抗原。病毒表示水平和病毒感染量（MOI）有量效關(guān)系。該系統(tǒng)能夠控制感染時(shí)間，在病毒復(fù)制期間或之前對(duì)細(xì)胞進(jìn)行處理。用該系統(tǒng)對(duì)拉米夫定藥效進(jìn)行評(píng)價(jià)，發(fā)覺(jué)拉米夫定能夠降低細(xì)胞內(nèi)復(fù)制中間體和細(xì)胞外HBVDNA,而且能夠抑制cccDNA表示，這在以前系統(tǒng)中是不能觀察到。拉米夫定作用有劑量和時(shí)間依賴性[3]。他們還用此模型檢測(cè)了藥品對(duì)HBV變異株作用[4]。24/41不過(guò)，桿狀病毒系統(tǒng)也有缺點(diǎn)：(1)桿狀病毒進(jìn)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞是經(jīng)過(guò)非特異內(nèi)涵體攝取而不是受體介導(dǎo)方式；(2)桿狀病毒感染每個(gè)細(xì)胞內(nèi)有多個(gè)HBV拷貝；(3)桿狀病毒介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)移限制在一定種屬，更主要是不能作為動(dòng)物體內(nèi)試驗(yàn)方法。He等[5]采取Ad-HBV1.3-HepG2系統(tǒng)以腺病毒為載體，將1.3倍HBV轉(zhuǎn)入包裝細(xì)胞，再將包裝好病毒感染HepG2細(xì)胞，能夠產(chǎn)生高水平HBV表示。該系統(tǒng)利用細(xì)菌內(nèi)同源重組法[5]，將含有同源性兩個(gè)質(zhì)粒pAdEasy和pAdTrack-CMV共轉(zhuǎn)化E.coliBJ5183細(xì)胞，使腺病毒載體和目標(biāo)基因HBV1.3連為一體。HBV1.3除含完整HBV基因組外，在5′端還多出一段HBV序列，即ENHI和ENHII,XORF.PolyA[1]25/41轉(zhuǎn)基因小鼠試驗(yàn)證實(shí)HBV1.3比HBV1.1和HBV1.2更高地表示HBV[6]。質(zhì)粒pAdEasy含有不完整腺病毒Ad5基因，缺失E1區(qū)(1-3533)和E3區(qū)(28130-30820)，E1區(qū)對(duì)于病毒復(fù)制是必需，293細(xì)胞能夠補(bǔ)充E1區(qū)。質(zhì)粒pAdTrack-CMV含有目標(biāo)基因HBV1.3,CMV開啟子，綠色熒光蛋白基因（GFP），卡那霉素Kan,Pacl位點(diǎn)，pmel位點(diǎn)，在pmel兩側(cè)分別為兩臂，左臂含Ad5第34931-35935核苷酸，右臂含Ad5第3534-5790核苷酸，兩臂介導(dǎo)和pAdEasy同源重組。將pAdTrack-CMV用pmel酶線性化后，和環(huán)狀pAdEasy共轉(zhuǎn)化E.coliBJ5183細(xì)胞，利用卡那霉素抗性篩選重組體，再用限制酶pacI.speI.BamH1消化證實(shí)；重組成功質(zhì)粒用pac1線性化，然后用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染包裝細(xì)胞293(人胚腎細(xì)胞)。觀察綠色熒光蛋白表示，能夠計(jì)算轉(zhuǎn)染效率。26/41該載體含有以下優(yōu)點(diǎn)：(１)含有大部分腺病毒基因組序列腺病毒骨架質(zhì)粒，于超螺旋形式應(yīng)用而不需要進(jìn)行酶切處理；(２)重組是在含有高效同源重組機(jī)制細(xì)菌內(nèi)進(jìn)行而不是哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)，省掉了連接步驟；(３)能夠插入達(dá)10kb目標(biāo)基因，而且能夠在同一病毒內(nèi)插入多個(gè)基因；(４)腺病毒骨架質(zhì)粒上整合了綠色熒光蛋白基因，能夠直接觀察轉(zhuǎn)染和感染效率，使得腺病毒監(jiān)測(cè)問(wèn)題變得更輕易[5]。Sprinzl等[7]利用AdHBV1.3，將293細(xì)胞包裝好病毒感染數(shù)種原代肝細(xì)胞和HepG2細(xì)胞，取得成功。分別用Ad-HBV1.3感染人原代肝細(xì)胞，小鼠肝細(xì)胞，大鼠肝細(xì)胞，樹鼠句肝細(xì)胞，以及鴨肝細(xì)胞和HepG2細(xì)胞，應(yīng)用Southern雜交檢測(cè)出細(xì)胞內(nèi)HBVDNA，cccDNA,用northern雜交檢測(cè)到3.5kb、2.4kb和2.1kbHBVRNA。用westernblot檢測(cè)到HBV各種抗原。應(yīng)用斑點(diǎn)雜交方法檢測(cè)到培養(yǎng)基或血清中HBV顆粒。該系統(tǒng)使HBV能夠感染跨種各種細(xì)胞，包含小鼠，大鼠，樹鼠句肝細(xì)胞，甚至包含禽類鴨肝細(xì)胞。以DHBV代替HBV也能得到相同結(jié)果。和2.2.15系統(tǒng)相比，它含有高效轉(zhuǎn)移、表示HBV，可對(duì)HBV突變和表示進(jìn)行人為控制等優(yōu)點(diǎn)；和桿狀病毒系統(tǒng)相比，它不存在種屬障礙，能夠用做體內(nèi)試驗(yàn)，而且表示水平更高。

27/41二、體內(nèi)模型

類人猿和黑猩猩作為HBV感染模型已得到公認(rèn)，但價(jià)格昂貴，難以推廣。土撥鼠肝炎病毒（WHV）慢性感染土撥鼠能夠發(fā)展為嚴(yán)重肝炎和肝腫瘤，和人感染HBV后發(fā)病過(guò)程非常相同。給新生土撥鼠接種WHV,可取得慢性WHV感染土撥鼠模型。慢性WHV攜帶土撥鼠平均壽命為29個(gè)月，最終幾乎全部都發(fā)展為肝腫瘤。土撥鼠還可作為抗病毒藥品臨床前評(píng)價(jià)工具，研究藥品藥效、藥品動(dòng)力學(xué)以及毒理，也可用作評(píng)價(jià)免疫治療療效[8]。用土撥鼠局限是：它們感染肝炎病毒為WHV，和HBV有一定差異，使對(duì)乙型肝炎發(fā)病機(jī)理和機(jī)體應(yīng)答研究受到限制。28/41研究發(fā)覺(jué)樹鼠句能夠感染HBV，嚴(yán)瑞琪等[9]發(fā)覺(jué)HBV感染樹鼠句HBsAg血癥者47%，平均連續(xù)7周，HBVDNA陽(yáng)性率51%，連續(xù)41周以上；肝細(xì)胞HBVDNA陽(yáng)性率67%，并存在復(fù)制型HBVDNA。用感染HBV樹鼠句血清可連續(xù)傳代感染。但國(guó)外報(bào)道有所不一樣，將新生樹鼠句和成年樹鼠句腹腔接種HBV陽(yáng)性患者血清，都在血清中檢測(cè)到HBsAg,2～4周后血清中檢測(cè)到抗HBs,抗HBc，抗HBe，而HBsAg消失，類似急性肝炎病程。說(shuō)明在樹鼠句感染HBV是一過(guò)性，HBV復(fù)制和表示水平不高。

29/41Sprinzl等[7]利用Ad-DHBV1.3系統(tǒng)，將293細(xì)胞包裝好病毒顆粒以尾靜脈接種小鼠，5d后處死小鼠，8只小鼠中有7只肝臟中用Southernblot檢測(cè)出復(fù)制型DHBV,用PCR檢測(cè)出全部小鼠血清中有DHBV,都沒(méi)有腺病毒DNA。用這些鼠血清能夠感染原代鴨肝細(xì)胞，而且和DHBV陽(yáng)性鴨血清感染效率相當(dāng)。說(shuō)明DHBV也能夠經(jīng)過(guò)腺病毒轉(zhuǎn)移到小鼠肝臟并支持DHBV體內(nèi)復(fù)制。近年來(lái)HBV轉(zhuǎn)基因小鼠受到重視。將HBV目標(biāo)基因顯微注射到小鼠受精卵，產(chǎn)生穩(wěn)定整合HBV小鼠。在目標(biāo)基因選取上，能夠是HBV全長(zhǎng)或超出其基因組1.3倍HBV，也能夠是HBV片段，如前s、s、c和x基因，用于研究各基因及其表示產(chǎn)物在HBV生活史中作用。HBV轉(zhuǎn)基因小鼠不但能夠研究HBV感染過(guò)程和感染后免疫病理改變[10]，還有利于發(fā)展新抗病毒治療方法。30/41HBV轉(zhuǎn)基因小鼠試驗(yàn)發(fā)覺(jué)在慢性HBV攜帶者因?yàn)橐粋€(gè)抗原提呈細(xì)胞（樹突狀細(xì)胞）功效缺點(diǎn)和缺乏一些必要細(xì)胞因子，不能有效提呈HBsAg,不能去除病毒，造成連續(xù)感染[11]。不過(guò)在全部HBV轉(zhuǎn)基因小鼠都不能檢測(cè)到細(xì)胞內(nèi)cccDNA,而cccDNA是前基因組及各種長(zhǎng)度RNA轉(zhuǎn)錄模板，在HBV復(fù)制過(guò)程中起著非常主要作用，而當(dāng)前抗病毒治療主要是在反轉(zhuǎn)錄和復(fù)制水平抑制病毒DNA，而且HBV是整合在宿主染色體上，沒(méi)有經(jīng)過(guò)和靶細(xì)胞受體結(jié)合穿透過(guò)程，與自然感染不一樣，應(yīng)用也受到限制。

31/41為克服轉(zhuǎn)基因鼠缺點(diǎn)，人們尋求一個(gè)模擬HBV自然感染動(dòng)物模型。Dandri等[12]將UPA轉(zhuǎn)基因小鼠和RAG-2基因剔除小鼠雜交，得到后代被移植入人肝細(xì)胞。因?yàn)閁PA是一個(gè)纖維蛋白酶原激活劑，它選擇性地在肝細(xì)胞表示，使肝細(xì)胞中蛋白質(zhì)水解，造成UPA小鼠體內(nèi)肝細(xì)胞連續(xù)損傷，產(chǎn)生肝再生刺激信號(hào)，有利于外源肝細(xì)胞存活。而RAG-2基因剔除小鼠因?yàn)槿笔е亟M活化基因RAG-2,T細(xì)胞和B細(xì)胞不能成熟32/41不具備完整體液和細(xì)胞免疫功效，對(duì)外源肝細(xì)胞不排斥。二者雜交后代兼有以上兩種特征，能夠支持HBV感染和表示。試驗(yàn)中采取脾內(nèi)注射人肝細(xì)胞懸液，在小鼠血清和肝臟中均檢測(cè)到HBV各種抗原和復(fù)制中間體。該模型能夠用于HBV感染過(guò)程和治療研究，以及肝癌發(fā)生機(jī)理，但因采取是免疫缺點(diǎn)鼠，不能作為機(jī)體和病毒相互作用尤其是免疫去除機(jī)理研究。另外，人肝細(xì)胞移植效率很低，只占小鼠肝臟15%，而采取一樣方法移植土撥鼠肝細(xì)胞，則可占小鼠肝臟90%以上，可能和移植肝細(xì)胞活力高低相關(guān)。

33/41從已經(jīng)有HBV體內(nèi)外模型看來(lái)，Ad-HBV1.3-HepG2系統(tǒng)是較為理想，能夠用做體內(nèi)體外試驗(yàn)，研究HBV生物學(xué)，判斷抗乙型肝炎藥品及其它治療伎倆療效，不過(guò)不能用作研究病毒黏附，致癌機(jī)制等。HBV體內(nèi)體外模型還需要深入探索。34/41乙肝病毒四種傳輸路徑母嬰傳輸血液傳輸性接觸傳輸日常生活接觸傳輸35/4136/41

母嬰傳輸在我國(guó)，母嬰傳輸是造成人群乙肝病毒高攜帶率主要原因。孕婦若是乙肝病人或乙肝病毒攜帶者，就可經(jīng)過(guò)胎盤、分娩過(guò)程中母血、羊水或產(chǎn)后乳汁、唾液等將乙肝病毒傳染給自己孩子，這就是通常所說(shuō)母嬰傳輸。乙肝母嬰傳輸能夠發(fā)生在分娩過(guò)程中，因?yàn)樵袐D血液和子宮頸、陰道分泌液中都含