白細(xì)胞血型HLA法醫(yī)學(xué)培訓(xùn)課件

HLA的命名、遺傳、應(yīng)用、抗原在體內(nèi)的分布、測(cè)定I類抗原的試驗(yàn)名稱、原理，NIH技術(shù)HLA抗原的結(jié)構(gòu)、HLA抗體的來源、特性及交叉反應(yīng)，DNA分型方法。掌握了解要求HLA的命名、遺傳、應(yīng)用、抗原在體內(nèi)的分布、測(cè)定I類抗原1一、MHC與HLA第一節(jié)概述紅細(xì)胞血型抗原白細(xì)胞特有抗原與其它組織共有抗原：HLA人類白細(xì)胞膜上的抗原一、MHC與HLA第一節(jié)概述紅細(xì)胞血型抗原白細(xì)胞特有抗21HLA又稱移植抗原、組織相容性抗原.2基因群MHC主要組織相容性復(fù)合體人類的MHC稱為HLA系統(tǒng)1HLA又稱移植抗原、組織相容性抗原.2基因群MHC主要組3Ⅱ類抗原：

D、DR、DP、DQⅠ類抗原：

A、B、C人類組織相容性抗原分七個(gè)座位人類組織相容性抗原Ⅱ類抗原：Ⅰ類抗原：人類組織相容性抗原人類組織相容性抗原4

小鼠腫瘤移植排斥，多次輸血病人體內(nèi)及經(jīng)產(chǎn)婦體內(nèi)有抗體，發(fā)現(xiàn)白細(xì)胞抗原存在多數(shù)組織中，微量淋巴細(xì)胞毒試驗(yàn)，國(guó)際專題討論會(huì)，分子生物學(xué)研究。二.研究簡(jiǎn)史

小鼠腫瘤移植排斥，多次輸血病人體內(nèi)及經(jīng)產(chǎn)婦體內(nèi)有抗體，發(fā)現(xiàn)5三、抗原結(jié)構(gòu)與細(xì)胞分布45kd，由MHC編碼，有5個(gè)結(jié)構(gòu)域：α1、α2有多態(tài)性，α3與β2m以非共價(jià)鍵連接，α4越膜部分，α5在胞漿內(nèi)?？扇苄钥乖次挥诎ね獠糠帧＜处?m(β2微球蛋白)，12kd，基因在第15號(hào)染色體，影響重鏈表現(xiàn)出抗原性。Ⅰ類抗原：A、B、C抗原β鏈（輕鏈）α鏈（重鏈）三、抗原結(jié)構(gòu)與細(xì)胞分布45kd，由MHC編碼，有5個(gè)結(jié)構(gòu)域：6Ⅱ類抗原：DR、DP、DQ三、抗原結(jié)構(gòu)與細(xì)胞分布α鏈、β鏈均為重鏈，非共價(jià)鍵連接，由MHC編碼，二條鏈各有4個(gè)結(jié)構(gòu)域，多態(tài)性主要由α1、β1結(jié)構(gòu)域決定。Ⅱ類抗原：三、抗原結(jié)構(gòu)與細(xì)胞分布α鏈、β鏈均為重鏈，非共價(jià)鍵7PCR-RFLP(限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性)HLA基因座的多態(tài)性基礎(chǔ)是堿基序列的差異，6個(gè)外顯子和5個(gè)內(nèi)含子8個(gè)外顯子和7個(gè)內(nèi)含子交叉反應(yīng)一般較弱，打分<6分。等位基因命名似血清學(xué)命名C、D、DR、DP、DQ多數(shù)為同一座位上的Ag、Ab間；抗體+相應(yīng)抗原+補(bǔ)體——>細(xì)胞膜受損，著色，HLA又稱移植抗原、組織相容性抗原.C、D、DR、DP、DQ基因型：A9,A11；DNA分型優(yōu)于血清學(xué)分型同一特異性分出來的幾個(gè)特異性間往往強(qiáng)交叉，如：A23－A24；C座位，Cw為與補(bǔ)體區(qū)分；三、抗原結(jié)構(gòu)與細(xì)胞分布等位基因命名似血清學(xué)命名B座位交叉反應(yīng)多于A座位。大寫英文字母：A、B、現(xiàn)以PCR技術(shù)衍生的方法。人體分布Ⅰ類Ag幾乎所有有核細(xì)胞膜上，淋巴細(xì)胞密度最高。以可溶性形式存在血漿、體液中。成熟紅細(xì)胞無(wú)，血小板有。Ⅱ類Ag免疫活性細(xì)胞上：樹突狀細(xì)胞、單核細(xì)胞、B細(xì)胞。精子Ⅰ、Ⅱ類Ag都有，且以單倍型形式表達(dá)。PCR-RFLP(限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性)人體分布Ⅰ類Ag幾乎81妊娠6周2（月經(jīng)期、排卵期）可能與激素有關(guān)。3與細(xì)胞膜代謝有關(guān)。發(fā)育和變異發(fā)育早4藥物、疾病，如腫瘤。主要表現(xiàn)為抗原與抗體反應(yīng)減弱，或可逆性喪失。

5使蛋白質(zhì)變性的因素都會(huì)使HLA抗原發(fā)生不可逆的變化生理周期獻(xiàn)血員病理理化性質(zhì)變異61妊娠6周2（月經(jīng)期、排卵期）可能與激素有關(guān)。3與細(xì)胞膜代謝9單倍型頻率等于組成基因頻率的乘積，但有些單倍型觀察頻率高于或低于期望頻率。阿拉伯?dāng)?shù)字：1、2、3……PCR-SSO(等位基因特異性寡核苷酸探針（ASO）雜交)主要編碼DR、DP、DQ的α、β鏈8個(gè)外顯子和7個(gè)內(nèi)含子微量淋巴細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)步驟微量淋巴細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)NIH技術(shù)原理HLA-A23(9)：9為寬特異性，23為窄特異性A11抗原分離B淋巴細(xì)胞作微量淋巴細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)。微量淋巴細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)步驟同一特異性分出來的幾個(gè)特異性間往往強(qiáng)交叉，如：A23－A24；PCR-RFLP(限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性)C座位，Cw為與補(bǔ)體區(qū)分；母HLA-DRB1*0302純合子HLA的命名、遺傳、應(yīng)用、抗原在體內(nèi)的分布、測(cè)定I類抗原的試驗(yàn)名稱、原理，NIH技術(shù)大寫英文字母：A、B、幾乎所有有核細(xì)胞膜上，淋巴細(xì)胞密度最高。大寫英文字母：A、B、C、D、DR、DP、DQ第二節(jié)命名阿拉伯?dāng)?shù)字：1、2、3……A、B座位數(shù)字不重疊；C座位，Cw為與補(bǔ)體區(qū)分；

D、DP座位，Dw、DPw為用細(xì)胞學(xué)方法測(cè)定。HLA-A*0201（A座位，A2抗原，1號(hào)亞型基因）~A*0210（10號(hào)亞型基因）HLA-A23(9)：9為寬特異性，23為窄特異性

抗原座位每一座位特異性等位基因命名似血清學(xué)命名大寫英文字母：A、B、C、D、DR、DP、DQ抗原座位大寫英文字母：A、B、C、D、DR、DP、DQ抗原座位大寫英文字母：A、B、C、D、DR、DP、DQ抗原座位大寫英文字母：A、B、C、D、DR、DP、DQ抗原座位單倍型頻率等于組成基因頻率的乘積，但有些單倍型觀察頻率高于或10第三節(jié)遺傳一、基因定位及結(jié)構(gòu)Ⅰ類Ⅱ類Ⅲ類基因區(qū)基因區(qū)基因區(qū)第三節(jié)遺傳一、基因定位及結(jié)構(gòu)ⅠⅡⅢ基因區(qū)基因區(qū)基因區(qū)11主要編碼A、B、C抗原的α鏈18個(gè)外顯子和7個(gè)內(nèi)含子2多態(tài)性主要由外顯子2和3決定3Ⅰ類基因區(qū)主要編碼A、B、C抗原的α鏈18個(gè)外顯子和7個(gè)內(nèi)含子2多態(tài)12主要編碼DR、DP、DQ的α、β鏈DRA有3個(gè)等位基因，DRB有9個(gè)基因位點(diǎn)6個(gè)外顯子和5個(gè)內(nèi)含子多態(tài)性主要由外顯子2決定Ⅱ類基因區(qū)主要編碼DR、DP、DQ的α、β鏈DRA有3個(gè)等位基因，DR13二、遺傳特征共顯性遺傳特異性單倍型遺傳重組連鎖不平衡基因單位點(diǎn)遺傳二、遺傳特征共顯性遺傳特異性單倍型遺傳重連鎖不平衡基因單位點(diǎn)14

一個(gè)座位最多檢出二個(gè)抗原。A2，A-：表示為A2純合子或A2和一個(gè)空白抗原或A2和一個(gè)至今尚未發(fā)現(xiàn)的抗原。遺傳特征1.共顯性遺傳遺傳特征1.共顯性遺傳15遺傳特征⒉各座位特異性連鎖成單倍型遺傳。表型：A9,A11；B5,B13基因型：A9,A11；B5,B13單倍型：A11,B5,/A9,B13；A11,B13,/A9,B5同胞間關(guān)系:1/4全相同,1/4全不同,1/2半相同遺傳特征⒉各座位特異性連鎖成單倍型遺傳。表型：A9,A116⒊重組遺傳特征A、B座位間重組率0.87%。⒊重組遺傳特征A、B座位間重組率0.87%。17單倍型頻率等于組成基因頻率的乘積，但有些單倍型觀察頻率高于或低于期望頻率。A2頻率0.3，B46頻率0.05，A2,B46預(yù)期頻率0.015，但實(shí)際觀察值0.04。因此計(jì)算親權(quán)指數(shù)時(shí)要用單倍型頻率。遺傳特征⒋連鎖不平衡單倍型頻率等于組成基因頻率的乘積，但有些單倍型觀察頻率高于或18遺傳特征⒌基因單位點(diǎn)遺傳父HLA-DRB1*0401純合子母HLA-DRB1*0302純合子子為此兩基因雜合子遺傳特征⒌基因單位點(diǎn)遺傳父HLA-DRB1*0401純合子19HLA群體分布不同人群HLA抗原分布差異大，提供某些人類遷移和混雜信息。HLA群體分布不同人群HLA抗原分布差異大，提供某些人類遷移20第四節(jié)分型一、血清學(xué)分型二、細(xì)胞學(xué)分型(D、DP抗原分型)三、DNA分型第四節(jié)分型一、血清學(xué)分型二、細(xì)胞學(xué)分型(D、DP抗原分型)218個(gè)外顯子和7個(gè)內(nèi)含子B座位交叉反應(yīng)多于A座位。大寫英文字母：A、B、A11,B13,/A9,B5微量淋巴細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)NIH技術(shù)原理同一特異性分出來的幾個(gè)特異性間往往強(qiáng)交叉，如：A23－A24；A11抗體｜—交叉。1、A、B、C抗原分型現(xiàn)以PCR技術(shù)衍生的方法。大寫英文字母：A、B、A2，A-：表示為A2純合子或A2和一個(gè)空白抗原或A2和一個(gè)至今尚未發(fā)現(xiàn)的抗原。多為IgG,少為IgM，有細(xì)胞毒作用，部分有凝集作用。HLA又稱移植抗原、組織相容性抗原.主要編碼A、B、C抗原的α鏈可溶性抗原即位于胞膜外部分。PCR-SSO(等位基因特異性寡核苷酸探針（ASO）雜交)Ⅰ、Ⅱ類Ag都有，且以單倍型形式表達(dá)。2、DR、DQ抗原分型父HLA-DRB1*0401純合子多態(tài)性主要由外顯子2和3決定A3抗原一、血清學(xué)分型1、A、B、C抗原分型2、DR、DQ抗原分型8個(gè)外顯子和7個(gè)內(nèi)含子一、血清學(xué)分型1、A、B、C抗原分型222微量淋巴細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)NIH技術(shù)原理微量淋巴細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)步驟1、A、B、C抗原分型微量淋巴細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)NIH技術(shù)原理1、A、B、C抗原分型23抗體+相應(yīng)抗原+補(bǔ)體——>細(xì)胞膜受損，著色，估計(jì)死細(xì)胞占全部細(xì)胞的%，判定抗原。微量淋巴細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)NIH技術(shù)原理抗體+相應(yīng)抗原+補(bǔ)體——>細(xì)胞膜受損，著色，微量淋巴細(xì)胞毒性24制備淋巴細(xì)胞懸液，多用外周血，通過密度梯度離心法取得淋巴細(xì)胞，調(diào)細(xì)胞數(shù)2000個(gè)/ul1ul抗原+1ul抗體→(30min、20～25℃)+5ul補(bǔ)體（兔血清）→(60min、20～25℃)+3ul伊紅→(5～8min)+8ul甲醛→(過夜)低倍鏡觀察、判讀結(jié)果。微量淋巴細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)步驟制備淋巴細(xì)胞懸液，多用外周血，通過密度梯度離心法取得淋巴細(xì)胞25圖示圖示26

B淋巴細(xì)胞從全淋巴細(xì)胞中通過尼龍棉柱法分離B淋巴細(xì)胞作微量淋巴細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)。2、DR、DQ抗原分型:B淋巴細(xì)胞從全淋巴細(xì)胞中通過尼龍棉柱法2、DR、27抗血清同種異體免疫：妊娠、輸血、器官移植，以產(chǎn)婦血清獲得為主；單克隆抗體；免疫動(dòng)物等。來源抗血清同種異體免疫：妊娠、輸血、器官移植，以產(chǎn)婦血清獲得為主28微量淋巴細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)NIH技術(shù)原理DRA有3個(gè)等位基因，DRB有9個(gè)基因位點(diǎn)HLA又稱移植抗原、組織相容性抗原.大寫英文字母：A、B、Ⅰ、Ⅱ類Ag都有，且以單倍型形式表達(dá)。C、D、DR、DP、DQPCR-SSO(等位基因特異性寡核苷酸探針（ASO）雜交)大寫英文字母：A、B、PCR-SSO(等位基因特異性寡核苷酸探針（ASO）雜交)A11抗原⒉各座位特異性連鎖成單倍型遺傳?，F(xiàn)以PCR技術(shù)衍生的方法。主要編碼A、B、C抗原的α鏈DRA有3個(gè)等位基因，DRB有9個(gè)基因位點(diǎn)B座位交叉反應(yīng)多于A座位。DNA分型優(yōu)于血清學(xué)分型PCR-RFLP(限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性)主要編碼A、B、C抗原的α鏈阿拉伯?dāng)?shù)字：1、2、3……同種異體免疫：妊娠、輸血、器官移植，以產(chǎn)婦血清獲得為主；抗血清特性多為IgG,少為IgM，有細(xì)胞毒作用，部分有凝集作用。效價(jià)低，多數(shù)為多價(jià).微量淋巴細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)NIH技術(shù)原理抗血清特性多為IgG,29DNA分型優(yōu)于血清學(xué)分型微量淋巴細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)步驟幾乎所有有核細(xì)胞膜上，淋巴細(xì)胞密度最高。多態(tài)性主要由外顯子2決定主要表現(xiàn)為抗原與抗體反應(yīng)減弱，或可逆性喪失。三、抗原結(jié)構(gòu)與細(xì)胞分布同一特異性分出來的幾個(gè)特異性間往往強(qiáng)交叉，如：A23－A24；與其它組織共有抗原：HLAPCR-RFLP(限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性)即β2m(β2微球蛋白)，12kd，基因在第15號(hào)染色體，影響重鏈表現(xiàn)出抗原性。A11抗體｜—交叉。微量淋巴細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)NIH技術(shù)原理1、A、B、C抗原分型主要編碼A、B、C抗原的α鏈單倍型頻率等于組成基因頻率的乘積，但有些單倍型觀察頻率高于或低于期望頻率。微量淋巴細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)NIH技術(shù)原理α鏈、β鏈均為重鏈，非共價(jià)鍵連接，由MHC編碼，二條鏈各有4個(gè)結(jié)構(gòu)域，多態(tài)性主要由α1、β1結(jié)構(gòu)域決定?，F(xiàn)以PCR技術(shù)衍生的方法。PCR-SSO(等位基因特異性寡核苷酸探針（ASO）雜交)HLA的命名、遺傳、應(yīng)用、抗原在體內(nèi)的分布、測(cè)定I類抗原的試驗(yàn)名稱、原理，NIH技術(shù)抗血清交叉反應(yīng):多數(shù)為同一座位上的Ag、Ab間；同一特異性分出來的幾個(gè)特異性間往往強(qiáng)交叉，如：A23－A24；B座位交叉反應(yīng)多于A座位。交叉反應(yīng)一般較弱，打分<6分。B7抗原刺激產(chǎn)生的抗體與B7、B27、B22抗原均可反應(yīng)，說明B7、B27、B22間有交叉。

A11抗原A11抗體｜—交叉。

A3抗原DNA分型優(yōu)于血清學(xué)分型抗血清交叉反應(yīng):30二、細(xì)胞學(xué)分型(D、DP抗原分型)混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)。二、細(xì)胞學(xué)分型(D、DP抗原分型)混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)。31PCR-RFLP(限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性)PCR-SSP(序列特異性引物)

PCR-SSO(等位基因特異性寡核苷酸探針（ASO）雜交)三、DNA分型HLA基因座的多態(tài)性基礎(chǔ)是堿基序列的差異，現(xiàn)以PCR技術(shù)衍生的方法。

PCR-測(cè)序PCR-RFLP(限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性)PCR-SSP(序列32血清學(xué)分型和DNA分型比較DNA分型優(yōu)于血清學(xué)分型便于標(biāo)準(zhǔn)化和比較提高分辨率減少漏檢使用范圍廣

減少分型誤差血清學(xué)分型和DNA分型比較DNA分型優(yōu)于血清學(xué)分型便于標(biāo)準(zhǔn)化33Ⅱ類抗原：

D、DR、DP、DQⅠ類抗原：

A、B、C人類組織相容性抗原分七個(gè)座位人類組織相容性抗原Ⅱ類抗原：Ⅰ類抗原：人類組織相容性抗原人類組織相容性抗原34HLA又稱移植抗原、組織相容性抗原.現(xiàn)以PCR技術(shù)衍生的方法。D、DP座位，Dw、DPw為用細(xì)胞學(xué)方法測(cè)定。成熟紅細(xì)胞無(wú)，血小板有。與其它組織共有抗原：HLAC、D、DR、DP、DQ幾乎所有有核細(xì)胞膜上，淋巴細(xì)胞密度最高。主要編碼DR、DP、DQ的α、β鏈成熟紅細(xì)胞無(wú)，血小板有。C、D、DR、DP、DQPCR-SSO(等位基因特異性寡核苷酸探針（ASO）雜交)HLA-A*0201（A座位，A2抗原，1號(hào)亞型基因）~A*0210（10號(hào)亞型基因）微量淋巴細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)NIH技術(shù)原理小鼠腫瘤移植排斥，多次輸血病人體內(nèi)及經(jīng)產(chǎn)婦體內(nèi)有抗體，發(fā)現(xiàn)白細(xì)胞抗原存在多數(shù)組織中，微量淋巴細(xì)胞毒試驗(yàn)，國(guó)際專題討論會(huì)，分子生物學(xué)研究。8個(gè)外顯子和7個(gè)內(nèi)含子多態(tài)性主要由外顯子2決定A11抗體｜—交叉。阿拉伯?dāng)?shù)字：1、2、3……B座位交叉反應(yīng)多于A座位。主要編碼A、B、C抗原的α鏈人體分布Ⅰ類Ag幾乎所有有核細(xì)胞膜上，淋巴細(xì)胞密度最高。以可溶性形式存在血漿、體液中。成熟紅細(xì)胞無(wú)，血小板有。Ⅱ類Ag免疫活性細(xì)胞上：樹突狀細(xì)胞、單核細(xì)胞、B細(xì)胞。精子Ⅰ、Ⅱ類Ag都有，且以單倍型形式表達(dá)。HLA又稱移植抗原、組織相容性抗原.人體分布Ⅰ類Ag幾乎所有35主要編碼DR、DP、DQ的α、β鏈DRA有3個(gè)等位基因，DRB有9個(gè)基因位點(diǎn)6個(gè)外顯子和5個(gè)內(nèi)含子多態(tài)性主要由外顯子2決定Ⅱ類基因區(qū)主要編碼DR、DP、DQ的α、β鏈DRA有3個(gè)等位基因，DR36一、血清學(xué)分型1、A、B、C抗原分型2、DR、DQ抗原分型一、血清學(xué)分型1、A、B、C抗原分型2、DR、DQ抗原分型抗血清同種異體免疫：妊娠、輸血、器官移植，以產(chǎn)婦血清獲得為主；單克隆抗體；免疫動(dòng)物等。來源抗血清同種異體免疫：妊娠、輸血、器官移植，以產(chǎn)婦血清獲得為主38PCR-RFLP(限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性)Ⅰ、Ⅱ類Ag都有，且以單倍型形式表達(dá)。C座位，Cw為與補(bǔ)體區(qū)分；微量淋巴細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)NIH技術(shù)原理主要編碼A、B、C抗原的α鏈2、DR、DQ抗原分型微量淋巴細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)NIH技術(shù)原理微量淋巴細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)NIH技術(shù)原理與其它組織共有抗原：HLADNA分型優(yōu)于血清學(xué)分型PCR-SSO(等位基因特異性寡核苷酸探針（ASO）雜交)8個(gè)外顯子和7個(gè)內(nèi)含子大寫英文字母：A、B、分離B淋巴細(xì)胞作微量淋巴細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)。分離B淋巴細(xì)胞作微量淋巴細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)。A11抗體｜—交叉。HLA的命名、遺傳、應(yīng)用、抗原在體內(nèi)的分布、測(cè)定I類抗原的試驗(yàn)名稱、原理，NIH技術(shù)微量淋巴細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)步驟多態(tài)性主要由外顯子2決定PCR-測(cè)序成熟紅細(xì)胞無(wú)，血小板有。小鼠腫瘤移植排斥，多次輸血病人體內(nèi)及經(jīng)產(chǎn)婦體內(nèi)有抗體，發(fā)現(xiàn)白細(xì)胞抗原存在多數(shù)組織中，微量淋巴細(xì)胞毒試驗(yàn)，國(guó)際專題討論會(huì)，分子生物學(xué)研究。PCR-RFLP(限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性)PCR-SSO(等位基因特異性寡核苷酸探針（ASO）雜交)分離B淋巴細(xì)胞作微量淋巴細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)。HLA又稱移植抗原、組織相容性抗原.主要編碼DR、DP、DQ的α、β鏈C、D、DR、