人類疾病動(dòng)物模型

人類疾病動(dòng)物模型

的制作1編輯ppt動(dòng)物模型的制作1.查找文獻(xiàn)并咨詢動(dòng)物實(shí)驗(yàn)所需動(dòng)物和條件是否可行，了解前人所積累的經(jīng)驗(yàn)，避免低水平的重復(fù)或缺乏科學(xué)依據(jù)的盲動(dòng)所造成人力物力的浪費(fèi)；2.從動(dòng)物品種品系、年齡、性別、體重、生物學(xué)特點(diǎn)、動(dòng)物微生物污染級(jí)別等方面選取最可比擬的動(dòng)物，不可認(rèn)為選越高級(jí)動(dòng)物可比性越高。2編輯ppt基本病理過程動(dòng)物模型復(fù)制方法水和電解質(zhì)紊亂：給家兔耳緣靜脈注射5%氯化鉀1ml/kg，劑量依次遞增。描記心電圖，測(cè)量血鉀濃度。酸堿平衡紊亂：復(fù)制急性呼吸性酸中毒模型（用止血鉗夾閉氣管插管的2/3，持續(xù)10分鐘，測(cè)動(dòng)脈血?dú)庵笜?biāo)。）復(fù)制急性代謝性酸中毒模型（耳緣靜脈注射5%的乳酸1ml/mim）復(fù)制代謝性堿中毒模型（耳緣靜脈注射5%的碳酸氫鈉10ml/kg）3編輯ppt發(fā)熱：大腸桿菌內(nèi)毒素法、大腸桿菌法、傷寒桿菌內(nèi)毒素法彌漫性血管內(nèi)凝血：用幼犬或家兔，靜脈注射10%高分子右旋糖酐(40萬-50萬U)15ml/kg在3分鐘內(nèi)注入、纖維蛋白原90mg/kg。給藥后的20分鐘、40分鐘、60分鐘分別采血查Hb、RBC、BPC、PT、TT、KPTT和纖維蛋白原。休克：失血性休克（家兔、放血法）感染性休克（大鼠、尾靜脈注射內(nèi)毒素）4編輯ppt腫瘤疾病模型的復(fù)制根據(jù)建立的方法不同

自發(fā)性腫瘤模型誘發(fā)性腫瘤模型移植性腫瘤模型5編輯ppt（1）自發(fā)性腫瘤模型是指利用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物本身某種自發(fā)腫瘤發(fā)病率高所建立的動(dòng)物模型，如利用AKR小鼠建立白血病模型、利用C3H小鼠建立乳腺癌模型。優(yōu)點(diǎn)：自發(fā)性腫瘤通常比用實(shí)驗(yàn)方法誘發(fā)的腫瘤與人類所患的腫瘤更為相似，有利于將試驗(yàn)結(jié)果推用到人；這一類腫瘤發(fā)生的條件比較自然，有可能通過細(xì)致觀察和統(tǒng)計(jì)分析而發(fā)現(xiàn)原來沒有發(fā)現(xiàn)的環(huán)境致癌因子。缺點(diǎn)：腫瘤的發(fā)生率參差不齊，不可能在短時(shí)間內(nèi)獲得大量的腫瘤學(xué)材料，觀察時(shí)間長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)消耗大。6編輯ppt

某個(gè)近交系動(dòng)物在一定年齡內(nèi)，可以發(fā)生一定比率的某種自發(fā)性腫瘤。目前已培育了許多種小鼠自發(fā)腫瘤，從腫瘤發(fā)生學(xué)上看，這些自發(fā)瘤與人體腫瘤相似。AKR小鼠－－→白血病，出生后1.5年90%的發(fā)病率C3H小鼠－－→乳癌，繁殖雌鼠100%發(fā)病率A系小鼠－－→肺癌，18個(gè)月內(nèi)90%發(fā)病率7編輯ppt（2）誘發(fā)性腫瘤模型是指對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給予致癌物質(zhì)、射線以及某些致病病毒而誘發(fā)各種腫瘤的動(dòng)物模型。如利用二乙基亞硝胺誘發(fā)小鼠肺癌；利用甲基膽葸誘發(fā)小鼠胃癌和宮頸癌；感染小鼠白血病病毒可誘發(fā)白血病等等。8編輯ppt（2）誘發(fā)性腫瘤模型：1.方法：原位誘發(fā)：指將致癌物直接與動(dòng)物靶組織或靶器官接觸而誘發(fā)該組織或器官發(fā)生腫瘤，接觸方法可通過涂抹、灌注、喂養(yǎng)或埋置等。異位誘發(fā)：將與致癌物接觸后的動(dòng)物組織或器官埋置于該動(dòng)物或另一正常動(dòng)物皮下而產(chǎn)生的該組織或器官的腫瘤。異位誘發(fā)腫瘤具有易于觀察和取材的優(yōu)點(diǎn)。2.誘癌物：放射線局部照射、化學(xué)致癌物（烷化劑、亞硝胺類、芳香胺類）、生物毒素（黃曲酶毒素）、細(xì)菌（幽門螺桿菌）、腫瘤病毒感染。9編輯ppt舉例：1.二乙基亞硝胺(DEN)誘發(fā)小鼠肺癌：采用小鼠皮下注射1％DEN水溶液，每周一次，(每次劑量為56mg/kg體重，總劑量為868mg)。觀察時(shí)間為100d左右。此模型誘發(fā)率約40%。若將DEN總劑量增到1176mg時(shí)，半年誘發(fā)率可達(dá)90％以上。

亞硝胺類致癌物特點(diǎn)：①致癌性強(qiáng)，小劑量一次性可致癌；②對(duì)多種動(dòng)物的多個(gè)器官能致癌，甚至可通過胎盤致癌；③具有不同結(jié)構(gòu)的亞硝胺有明顯的器官親和性，如：二甲基亞硝胺等對(duì)稱的衍生物常引起肝癌；不對(duì)稱的亞硝胺誘發(fā)食管癌.10編輯ppt2.亞胺基偶氮甲苯(OAAT)誘發(fā)小鼠肝癌：用l％OAAT苯溶液涂于動(dòng)物兩肩胛間皮膚上，隔日1次，每次2—3滴、一般涂100次。7個(gè)月以上誘發(fā)肝腫瘤約55％。

芳香胺及偶氮染料類致癌特點(diǎn)：①需要長(zhǎng)期大量給藥才能致癌；②腫瘤發(fā)生于遠(yuǎn)離作用部位（肝、膀胱等）；③明顯的種屬差異；④其本身不是致癌物，致癌是由于某種代謝產(chǎn)物的作用；⑤其致癌作用受營(yíng)養(yǎng)及激素的影響，如：鄰位氨基偶氮甲苯引起雌性大鼠的肝癌。11編輯ppt3.黃曲霉素誘發(fā)大鼠肝癌：在大鼠飼料中加入黃曲霉素，含0.011-0.015ppm，喂養(yǎng)6個(gè)月，誘發(fā)率達(dá)80％。

黃曲霉素的毒性很強(qiáng)，很小劑（1mg/Kg）可致動(dòng)物死亡，致癌性很強(qiáng)，是化學(xué)致癌物中最強(qiáng)的；它能誘發(fā)多種動(dòng)物從魚到猴的肝癌。滴入氣管內(nèi)可引起肺磷狀細(xì)胞癌。12編輯ppt注意事項(xiàng)：1.必須適當(dāng)選擇：致瘤方法、動(dòng)物種系、致癌物種類與溶劑、給藥劑量與途徑及觀察時(shí)間等盡量簡(jiǎn)便可行，有較好的重復(fù)性，并有利于與人腫瘤比較。2.方法和種系應(yīng)對(duì)所用致瘤物敏感。3.致癌物的劑量應(yīng)能保證動(dòng)物存活率較高、誘發(fā)期較短而又可誘發(fā)較高頻率的腫瘤。

13編輯ppt（3）移植性腫瘤模型是將腫瘤細(xì)胞接種于相關(guān)種屬的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物所建立的動(dòng)物模型。常以裸鼠為移植受體。一般最常用的就是皮下移植和原位移植。14編輯ppt腫瘤組織塊移植法腹水瘤細(xì)胞移植法腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)液移植法腫瘤組織懸液移植法腫瘤組織移入動(dòng)物體內(nèi)的方法15編輯ppt腫瘤組織塊移植法：

腫瘤細(xì)胞皮下接種——7-10d處死荷瘤動(dòng)物——選擇生長(zhǎng)良好、無壞死液化的瘤組織——2-3mm3+生理鹽水或其它營(yíng)養(yǎng)液——無菌套管針抽吸——接種同種受體動(dòng)物右前腋窩皮下。整個(gè)過程盡量在腫瘤切除后1小時(shí)內(nèi)完成。16編輯ppt腫瘤組織懸液移植方法：選取生長(zhǎng)良好、有光澤、淡紅色的瘤組織塊，剪成1mm2的小塊，在加有PBS的玻璃培養(yǎng)皿中剪碎，再在玻璃勻漿器內(nèi)研磨制成懸液后，經(jīng)80-100目網(wǎng)篩過濾成單細(xì)胞懸液。移植：按每只0.2ml,細(xì)胞數(shù)為1×106個(gè)。本法適于成活率高的移植瘤的常規(guī)接種和大批量的動(dòng)物接種，優(yōu)點(diǎn)是一次可以移植大批動(dòng)物，所用瘤細(xì)胞數(shù)可定量，缺點(diǎn)是不易按需要定位。17編輯ppt腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)液移植方法：

一般采用先分離培養(yǎng)原代瘤組織，再做瘤細(xì)胞培養(yǎng)。包括儀器準(zhǔn)備、物品清洗準(zhǔn)備、無菌操作環(huán)境準(zhǔn)備、取材與消化分離、細(xì)胞懸液培養(yǎng)、腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)液的制備、腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)液移植。移植：對(duì)腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)液經(jīng)臺(tái)盼蘭染色和計(jì)數(shù)，當(dāng)活細(xì)胞比率大于90%，細(xì)胞濃度1×106個(gè)/ml時(shí)，即可按每只裸鼠0.2ml接種于皮下或其他所需部位。18編輯ppt腹水瘤細(xì)胞移植：

腫瘤細(xì)胞皮下接種——7-10d處死荷瘤動(dòng)物——取腹水——含葡萄糖平衡鹽水稀釋至適當(dāng)濃度——腹腔注射（腹水瘤）或皮下注射（實(shí)體瘤）。

使用雜交瘤細(xì)胞制備單克隆抗體的過程中，雜交瘤細(xì)胞在BALB/c小鼠體內(nèi)傳代是典型的腹水瘤細(xì)胞移植方式。19編輯ppt評(píng)價(jià):1.同時(shí)接種同樣量的瘤細(xì)胞，生長(zhǎng)速度較一致，個(gè)體差異較小。2.接種成活率近100%。3.對(duì)宿主影響相類似。4.可連續(xù)傳代，試驗(yàn)周期短，條件易于控制。5.主要問題是宿主對(duì)移植物產(chǎn)生免疫排斥反應(yīng)。20編輯ppt移植途徑皮下移植原位移植腎包膜下移植肌肉移植腹腔移植21編輯ppt皮下移植：

就是將腫瘤細(xì)胞種植到皮下。皮下移植模型移植的優(yōu)點(diǎn)就是成功率高，操作非常方便，對(duì)動(dòng)物本身影響也小，皮下瘤生長(zhǎng)相對(duì)較慢，所以干預(yù)時(shí)間長(zhǎng)些。一般常用在抗腫瘤藥物的篩選上。皮下移植使用腫瘤組織塊、組織懸液或細(xì)胞培養(yǎng)液均可。一般選擇右側(cè)腋下、背部、腹股溝等部位皮下移植。22編輯ppt人膀胱EJ細(xì)胞皮下移植23編輯ppt原位移植：

即將腫瘤細(xì)胞移植于腫瘤原發(fā)部位相同的動(dòng)物臟器內(nèi)，如將人肝癌細(xì)胞移植于裸鼠的肝臟，人胃癌細(xì)胞移植于裸鼠的胃。原位移植模型的優(yōu)點(diǎn)就是更接近腫瘤發(fā)生發(fā)展的實(shí)際情況，實(shí)驗(yàn)說服力強(qiáng)，缺點(diǎn)就是操作復(fù)雜。24編輯ppt高分辨率小動(dòng)物超聲影像系統(tǒng)

Vevo770High-ResolutionImagingSystemHUAWANG,MAKOTOSATOH,HISASHIABE，etal.UROLOGY68(3),2006動(dòng)物活體成像系統(tǒng)VivoBioluminescenceImagingSystemYANLI.TUMOR2009,29(1).25編輯ppt腎包膜下移植：腎包膜下移植一般選用腫瘤組織塊移植，因?yàn)槟[瘤組織塊可固定于一定位置，而用組織懸液或細(xì)胞培養(yǎng)液移植，瘤細(xì)胞易于溢出包膜外，并呈廣泛彌散。

還有肌肉、腹腔移植等。26編輯ppt移植瘤模型成功的影響因素腫瘤組織惡性程度：惡性和轉(zhuǎn)移的復(fù)發(fā)瘤成功率較高；種類：細(xì)胞系的成活率大于活檢標(biāo)本；來源：淋巴瘤、骨腫瘤成功率低；部位：腫瘤塊的外周部接種易成活。27編輯ppt裸鼠

遺傳背景：胰腺癌接種BALB/c成功，NIH失敗；性別：雌激素依賴性腫瘤接種雄鼠生長(zhǎng)慢；鼠齡：4-6周；動(dòng)物健康狀態(tài)。28編輯ppt接種部位

原位移植成功率高，移植腫瘤與人類原發(fā)瘤相似。有些腫瘤需要接種在特定的部位，如對(duì)雌激素依賴的乳腺癌MCF-7細(xì)胞系，需接種乳腺脂肪墊才能成活。29編輯ppt其他環(huán)境：細(xì)菌病毒可以影響NK細(xì)胞活性；接種時(shí)間：越早越好;無菌操作。30編輯ppt胃癌移植瘤模型注意：選用皮下移植還是選用原位移植，關(guān)鍵取決于你的實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，具體的實(shí)驗(yàn)方法和手段都是為你的研究目的而服務(wù)的。如果你只是觀察某種藥物對(duì)某種胃癌細(xì)胞的體內(nèi)作用，做皮下瘤就行，當(dāng)然做原位移植更好；如果你要研究胃癌細(xì)胞的侵襲或轉(zhuǎn)移，就要做原位移植了。方法：1）術(shù)前準(zhǔn)備：眼科剪2把，眼科鑷2把，培養(yǎng)皿2個(gè)，1ml注射器1套，小鼠固定板，眼科小圓針2根，8/0絲線、3/0絲線若干消毒備用。無菌手術(shù)衣、手套、口罩、帽子；麻醉劑、甲醛固定液、生理鹽水、RPMI-1640培養(yǎng)液、超凈工作臺(tái)或?qū)恿鞴?。術(shù)前1小時(shí)紫外照射30分鐘。31編輯ppt2）移植方法：取6-8周健康裸鼠，術(shù)前禁食12小時(shí)，以0.5%的戊巴比妥鈉麻醉，消毒，選擇左側(cè)正中旁切口，打開腹腔后將胃拉出，用眼科剪細(xì)心剪破腺胃胃壁漿膜，將瘤組織塊埋入漿膜下，再以8/0絲線穿透全層將瘤組織縫掛在胃壁上，最后以4/0絲線分別縫合腹膜（含肌層）及皮膚。若以腫瘤細(xì)胞懸液或細(xì)胞培養(yǎng)液移植時(shí)，可用注射器刺入胃壁漿膜注射。注射后，應(yīng)觀察到明顯隆起的小包。否則，可能是穿透胃壁，注入胃內(nèi)。應(yīng)重新再試。

32編輯ppt3）術(shù)后觀察：術(shù)后1周左右動(dòng)物傷口愈合，皮膚縫線脫落。術(shù)后第3-4周左上腹可觸及0.2cm-0.3cm的小結(jié)節(jié)，5-6周左上腹結(jié)節(jié)逐漸增大且質(zhì)地變硬。8-10周左右可觸及1.0cm-1.5cm的包塊，左上腹包塊透壁可見，表面呈結(jié)節(jié)狀，動(dòng)物逐漸消瘦。12周以后動(dòng)物極度消瘦，活動(dòng)受限，部分動(dòng)物瘤體突出至皮下。16周以后動(dòng)物拒食，逐漸衰竭而死亡。生存期約為16-24周。33編輯ppt

高血壓的研究

最常用的是犬和大鼠。犬與人類的高血壓有很多相似之處：1.高血壓早期波動(dòng)較大，以后逐漸升高，并維持在高水平；2.環(huán)境和緊張刺激引起血壓明顯升高；3.高血壓發(fā)展過程中出現(xiàn)高級(jí)神經(jīng)活動(dòng)障礙；4.部分動(dòng)物血中兒茶酚胺含量增加。

34編輯ppt若研究高血壓病理、生理和藥理，SHR（自發(fā)性高血壓大鼠）是良好的模型，1.遺傳因素占主要地位；2.高血壓早期無明顯器質(zhì)性改變；3.病程相似，血壓升高隨年齡增加而加??；4.緊張刺激和大量食鹽等環(huán)境刺激加重高血壓的發(fā)展，5.血壓上升早期或高血壓前期有高血流動(dòng)力學(xué)的特征；6.發(fā)生繼發(fā)性心血管損害，出現(xiàn)心腦腎合并癥。

35編輯ppt實(shí)驗(yàn)性高血壓動(dòng)物模型復(fù)制實(shí)驗(yàn)性高血壓模型常選用犬、貓、家兔和猴等，復(fù)制方法很多，如通過神經(jīng)反射、外源性兒茶酚胺類或其他體液加壓物質(zhì)的注射直接刺激中樞神經(jīng)系統(tǒng)等。36編輯ppt1．聽源性高血壓

采用大白鼠與家鼠雜交生的大灰鼠（比純種大白鼠較易誘發(fā)成功），4月齡，放入隔音室內(nèi)籠養(yǎng)，噪音刺激可由電鈴或揚(yáng)聲器發(fā)出，發(fā)音器是一個(gè)音頻振蕩器，連接一個(gè)20W高音揚(yáng)聲器。噪音刺激應(yīng)經(jīng)常在700～1000周/秒中變換，噪音刺激每30秒一次，亦可每隔1分鐘刺激30秒?？呻S時(shí)變換毋須恒定，但噪音干擾須日夜不止，連續(xù)數(shù)月。噪音刺激連續(xù)3個(gè)月后血壓普遍升高，大灰鼠正常平均收縮壓為113±8mmHg，此時(shí)可升高到130～140mmHg，有40%動(dòng)物收縮壓可高達(dá)160mmHg。此種高血壓動(dòng)物模型與人的高血壓病相類似，適用于降藥物的篩選。

37編輯ppt2.縮窄腎動(dòng)脈法?？s窄腎動(dòng)物致高血壓是十分經(jīng)典的動(dòng)物模型。腎動(dòng)脈縮窄可造成腎臟缺血，導(dǎo)致腎臟內(nèi)腎素形成，血管緊張素含量增加，使血壓升高，晚期高血壓維持因素也包括神經(jīng)血管機(jī)制。下面以犬和家兔為例，介紹動(dòng)脈縮窄性高血壓動(dòng)物模型的復(fù)制方法。38編輯ppt

將犬和家兔麻醉后，腹向下固定，腹下墊一長(zhǎng)枕使腰部頂起，從脊柱旁1.5-2㎝處開始，右側(cè)順肋骨緣，左側(cè)在離肋骨緣約兩指寬的地方作4㎝長(zhǎng)的皮膚切口。切開皮下組織和腰背筋膜，并在內(nèi)外斜肌筋膜連接處旁邊，切開內(nèi)斜肌筋膜，推開背長(zhǎng)肌，暴露蓋在腎周圍空隙上的腹橫機(jī)肌腱。順肌纖維切開肌肉，并將肌肉分離開。用手指通過手術(shù)區(qū)摸到腎臟，并在腎切跡與主動(dòng)脈之間找到強(qiáng)力搏動(dòng)著的腎動(dòng)脈。按所需長(zhǎng)度，小心地鈍性分離出一段腎動(dòng)脈。選用一定直徑的銀夾或銀環(huán)套在腎動(dòng)脈上，或者用縫線將相應(yīng)直徑的鐵圈綁扎在血管上面，將縫線結(jié)扎緊后取下鐵圈。如果是單側(cè)腎動(dòng)脈縮窄，則應(yīng)將另一側(cè)腎切除。后一手術(shù)在間隔10-12天進(jìn)行。一般腎切除手術(shù)后幾天，血壓開始升高，1-3月后達(dá)到高峰。并可長(zhǎng)期維持下去。39編輯ppt3．腎外包扎性高血壓

腎外異物包扎，可致腎周圍炎，在腎外形成一層纖維素性鞘膜，壓迫腎實(shí)質(zhì)，造成腎組織缺血，使腎素形成增加，血壓上升。40編輯ppt

選用120～150g大白鼠，麻醉后，皮膚消毒，從第10胸椎到第3腰椎處沿脊椎中線切開皮膚，在左側(cè)季助下1.5～2cm和距脊椎1cm處用小血管鉗分開肌肉，用兩脂從腹下部將腎臟自創(chuàng)口中擠出，小心地將腎臟與周圍組織剝離，將自制的雙層乳膠薄膜剪成“X”形，繞腎門將腎臟交叉包扎，然后在相對(duì)側(cè)切開，取出右腎，分離后切除，分別縫合肌肉和皮膚創(chuàng)口。皮下注射1～2萬單位青霉素G。術(shù)后可加飲1%氯化鈉溶液作為促進(jìn)因素，約經(jīng)20天，有70%以上的大白鼠出現(xiàn)高血壓。收縮壓一般可升高50%以上。41編輯ppt模型概述

糖尿病動(dòng)物模型復(fù)制方法主要包括6種：自發(fā)性模型:KK糖尿病小鼠；BBwistar

大鼠；NIH肥胖大鼠品系（SHR/N-cp）；中國(guó)地鼠（黑線倉(cāng)鼠）。2.注射致高血糖因子，如生長(zhǎng)激素、胰高糖素、糖皮質(zhì)激素以及兒茶酚胺類激素等，復(fù)制出某些繼發(fā)性糖尿病模型。糖尿病動(dòng)物模型42編輯ppt3.注射化學(xué)物質(zhì)引起胰島β細(xì)胞的損傷，如鏈脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)、四氧嘧啶、二苯硫代卡肥腙可造成胰島β細(xì)胞不可逆損傷；環(huán)丙庚哌、天門冬素酶、6—氨基尼克酰胺(Nicotinamide)、2—脫氧葡萄糖、甘露庚酮糖可引起β細(xì)胞可逆性損傷。43編輯ppt4.

注射生物及生物制品引起β細(xì)胞破壞，如鼠腦炎、心肌炎病毒M型變異可誘發(fā)若干品系的成年小鼠糖尿病，IL—1在一定劑量和范圍內(nèi)對(duì)β細(xì)胞有選擇性細(xì)胞毒作用，導(dǎo)致IDDM。5.

手術(shù)切除胰腺的大部分或全部，并給予高糖飲食刺激，引起繼發(fā)性永久性糖尿病。6.

篩選、引種、繁殖遺傳性及自發(fā)性糖尿病，這類動(dòng)物模型更接近人類糖尿病的自然起病及發(fā)展，尤其適于研究糖尿病的病因?qū)W。44編輯ppt一、病毒誘發(fā)法

DBA/2雌性小鼠，皮下接種腦炎、心肌炎病毒M型變異株4—7天后出現(xiàn)明顯的高血糖，伴有血中及胰腺中胰島素含量降低。

評(píng)價(jià)：

其高血糖為特發(fā)性，伴明顯低胰島素血癥，在某些小鼠中可自然緩解，但糖耐量異常及高血糖在恢復(fù)期中仍將存在.造模方法45編輯ppt二、四氧嘧啶法

SD大鼠200g左右，40mg/kg四氧嘧啶靜脈注射1次，觀察血糖>300mg/dL，持續(xù)2周可以認(rèn)為造模成功。三、鏈脲佐菌致糖尿病Wistar大鼠

鏈脲佐菌素可造成動(dòng)物胰島β細(xì)胞大量壞死，通過不同給藥方法，可復(fù)制出速發(fā)型類似NIDDM和遲發(fā)型類似IDDM的動(dòng)物模型。46編輯ppt1)速發(fā)型：

STZ用0.1mmol/L無菌枸櫞酸—枸櫞酸鈉緩沖液新鮮配制成2％溶液，調(diào)節(jié)pH至4.5，濾菌器過濾除菌。大鼠禁食10h按50～65mg/kg腹腔內(nèi)或尾靜脈一次性注射，24h內(nèi)隨機(jī)血糖≥16.7mmol/L，穩(wěn)定5d即可作為成功模型。2)遲發(fā)型：

鏈脲佐菌配制同前，福氏佐劑(CFA)按4:1稱取液體石蠟和羊毛脂，研碎混勻，經(jīng)高壓消毒后低溫保存，使用前按1.5mg/0.5ml加入無菌滅活卡介苗。第1天腹腔注射0.5mlCFA，次日按25mg/kg腹腔內(nèi)注射STZ溶液。每周1次，連續(xù)3周，第2周部分大鼠就可成模型，第3周成模率87.5％。47編輯ppt評(píng)價(jià)：1.速發(fā)型

一次足量給予鏈脲佐菌素，造成β細(xì)胞大量損傷，胰島素合成和分泌減少，引起糖代謝紊亂，導(dǎo)致糖尿病。速發(fā)型模型較適于NIDDM的相關(guān)研究。通常單劑量達(dá)50mg/kg體重不出現(xiàn)自然緩解現(xiàn)象，第6～27天，胰島有一定程度再生，功能部分恢復(fù)，但仍處于高血糖狀態(tài)。2.遲發(fā)型

福氏完全佐劑可激發(fā)機(jī)體免疫功能，將小劑量STZ和CFA聯(lián)合使用，可激活大鼠體內(nèi)淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)胰島β細(xì)胞發(fā)生輕度改變，被激活的HLC可將輕度變性的細(xì)胞作靶細(xì)胞攻擊，導(dǎo)致自身免疫，胰島β細(xì)胞損害加重，引起糖尿病。遲發(fā)型模型有免疫學(xué)的改變，更接近人類IDDM的發(fā)生發(fā)展變化，有報(bào)道可測(cè)得大鼠體內(nèi)抗胰島細(xì)胞抗體。48編輯ppt3.化學(xué)誘導(dǎo)是一種簡(jiǎn)便，價(jià)廉的方法。其中STZ優(yōu)于四氧嘧啶，其造模穩(wěn)定，快速，無自然緩解，種屬選擇性不強(qiáng)(豚鼠只能用鏈脲菌素造模)，復(fù)制前不需禁食。糖尿病形成后無需特意安排動(dòng)物飼養(yǎng)條件。STZ可作用于對(duì)四氧嘧啶致糖尿作用有抵抗的豚鼠。但價(jià)格較四氧嘧啶貴。4.四氧嘧啶和鏈脲菌素均為一種可以選擇性作用于胰島β細(xì)胞的化學(xué)物質(zhì)，其作用機(jī)制目前有不同認(rèn)識(shí)，有人認(rèn)為是破壞了細(xì)胞本身，有人則認(rèn)為僅是細(xì)胞脫顆?；蚴前ど掀咸烟鞘荏w的變化。49編輯ppt四、高糖飼喂誘發(fā)法

選用SHR/NLH—CP大鼠5周齡，喂飼含54％庶糖飲食。1個(gè)月時(shí)，觀察到OGTT異常，6.5個(gè)月時(shí)胰島素反應(yīng)異常，9個(gè)月時(shí)可見體重減輕，衰弱。

評(píng)價(jià)：

一些動(dòng)物品系有自發(fā)或在施加誘導(dǎo)的條件下發(fā)生糖尿病的傾向。SHR/NLH-CP大鼠模型某些代謝和組織病理特征與人類非胰島素依賴性糖尿病相似，該模型還可觀察糖尿病肝腎損害。50編輯ppt

1982年，Hegreberg與Leathers發(fā)表了一部?jī)删淼膭?dòng)物模型目錄，第1卷“自發(fā)性動(dòng)物疾病模型”包括了1298篇文獻(xiàn)，第2卷“誘發(fā)性動(dòng)物疾病模型”包括了2707篇文獻(xiàn)。國(guó)內(nèi)施新猷主編“醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法”（人民衛(wèi)生出版社，1980年）、郭鷂編“人類疾病的動(dòng)物模型”第1輯，（人民衛(wèi)生出版社，1982年），可供參考。另外也可在一些藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)專著中找到，特別是那些容易復(fù)制、已經(jīng)成為定型的（或所謂經(jīng)典的）模型、可供篩選藥物之用的動(dòng)物模型，這類書中均有介紹。疾病動(dòng)物模型的復(fù)制方法還可在美國(guó)《醫(yī)學(xué)索引》（IndexMedicus）中的“動(dòng)物疾病模型”（DiseaseModel,Animal）主題之下找到。51編輯ppt國(guó)內(nèi)研究趨勢(shì)

2001年11月16日，科技部正式發(fā)文（國(guó)科發(fā)計(jì)字[2001]474號(hào)）通告，由南京大學(xué)與揚(yáng)州大學(xué)聯(lián)合申報(bào)的"國(guó)家遺傳工程小鼠資源庫(kù)"（以下簡(jiǎn)稱"小鼠資源庫(kù)"）項(xiàng)目已完成可行性論證及課題的招投標(biāo)工作，列入"十五"國(guó)家科技攻關(guān)計(jì)劃并作為重點(diǎn)項(xiàng)目組織實(shí)施。

52編輯ppt

資源庫(kù)目前已基本完成保種、繁育、基因型鑒定、質(zhì)量監(jiān)控等資源庫(kù)基本功能運(yùn)行所必需的技術(shù)平臺(tái)和基因組改造必須的轉(zhuǎn)基因、基因剔除和化學(xué)誘變技術(shù)平臺(tái)的建設(shè)。胚胎冷凍和精子冷凍保種技術(shù)均達(dá)到項(xiàng)目要求，具備了所有基因型的鑒定方法，并已成功繁育64種不同品系的遺傳工程小鼠和4種近交系品系，并進(jìn)行了一系列質(zhì)量監(jiān)控檢查。53編輯ppt

通過轉(zhuǎn)基因和克隆技術(shù)、系統(tǒng)化表型分析技術(shù)，以及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物新品種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和關(guān)鍵項(xiàng)目檢測(cè)技術(shù)的研究，自主創(chuàng)新地建立人類重大疾病動(dòng)物模型和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物新品種（長(zhǎng)爪沙鼠、樹鼩、稀有鮈鯽等）。豐富和完善疾病動(dòng)物模型比較數(shù)據(jù)庫(kù)和生物學(xué)特性數(shù)據(jù)庫(kù)。54編輯ppt

利用遺傳工程小鼠進(jìn)行生物學(xué)和生物醫(yī)學(xué)的研究是當(dāng)前生命科學(xué)發(fā)展的主要內(nèi)容之一，國(guó)際上所有一流的生物和醫(yī)學(xué)研究機(jī)構(gòu)、醫(yī)學(xué)院、大學(xué)都建立了利用各種模式生物，特別是小鼠進(jìn)行研究的實(shí)驗(yàn)室，80％以上的這類研究單位是以研究模式生物為主，并取得了重大的研究成果。例如，對(duì)果蠅和小鼠進(jìn)行的研究則使人們第一次能誘導(dǎo)出額外眼的生長(zhǎng)。目前，小鼠、果蠅和線蟲基因組測(cè)序已經(jīng)完成，斑馬魚基因組序列也將明了，這些基因組序列的公布，必將進(jìn)一步促進(jìn)利用模式生物進(jìn)行的發(fā)育生物學(xué)和生物醫(yī)學(xué)研究。國(guó)外研究現(xiàn)狀和趨勢(shì)55編輯ppt

美國(guó)杰克遜實(shí)驗(yàn)室和橡樹林國(guó)家實(shí)驗(yàn)室等在政府的大力支持下，投資5千多萬美金進(jìn)行小鼠的ENU化學(xué)誘變和疾病模型研究，英國(guó)國(guó)立醫(yī)學(xué)研究院和德國(guó)GSF醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)研究所等也投入巨資進(jìn)行相類似的研究。美國(guó)Lexicon公司和Regeneron公司等正在構(gòu)建各種基因失活的小鼠品系，用以篩選具有重要功能的基因。56編輯ppt1.從表型出發(fā)的高通量篩選和從單一基因出發(fā)的轉(zhuǎn)基因／基因剔除兩種研究方法的綜合運(yùn)用

高通量篩選已經(jīng)成為現(xiàn)代生物學(xué)的一個(gè)重要原則和發(fā)展趨勢(shì)。在小鼠遺傳學(xué)領(lǐng)域，運(yùn)用表型鑒定的方法，篩選化學(xué)誘變或射線誘變的小鼠來建立人類疾病模型近年來已經(jīng)在發(fā)達(dá)國(guó)家流行。例如，美、英、德、日、澳和加拿大等國(guó)先后建立了基于ENU（乙基亞硝基脲）誘變的大規(guī)模篩選中心，數(shù)以千計(jì)新的小鼠品系，模擬人類代謝性疾病、自身免疫疾病、老年性疾病和神經(jīng)系統(tǒng)疾病的模型正在不斷被建立起來，相關(guān)基因開始被克隆。57編輯ppt

傳統(tǒng)的單一基因的轉(zhuǎn)基因／基因剔除技術(shù)也同時(shí)在各實(shí)驗(yàn)室越來越普及，新的方法和手段也不斷建立，特別是可誘變轉(zhuǎn)基因小鼠和組織特異性基因剔除小鼠的建立，使分析特定基因在特定發(fā)育時(shí)空的功能成為可能，所以在生物學(xué)研究中運(yùn)用越來越廣泛。

58編輯ppt

線蟲、果蠅、斑馬魚和小鼠等模式動(dòng)物各有其優(yōu)勢(shì)。例如，線蟲的細(xì)胞分化譜系明確，為研究細(xì)胞－細(xì)胞間相互作用和特定細(xì)胞功能提供了很好的模型，Brenner、Horvitz和Sulston利用線蟲發(fā)現(xiàn)細(xì)胞凋亡調(diào)控的關(guān)鍵基因。果蠅的遺傳背景清楚，基因定位與表型效應(yīng)的關(guān)系明確，各種遺傳分析方法也較成熟，利用這些優(yōu)勢(shì)，Morgan闡明了染色體遺傳連鎖規(guī)律，而Lewis、Nusslein-Volhard和Wieschaus在突變表型分析的基礎(chǔ)上建立了現(xiàn)代發(fā)育生物學(xué)的基本框架。斑馬魚通體透明，是研究器官發(fā)生的最佳材料之一。

2．不同種類模式動(dòng)物的綜合利用59編輯ppt

由于小鼠和人類的高度同源，更多的研究以小鼠為對(duì)象，從Snell通過小鼠的皮膚移植提出組織相容性抗原概念到現(xiàn)代遺傳學(xué)家通過小鼠基因組改造建立人類疾病模型和研究基因功能，小鼠研究已經(jīng)一次次證明了其對(duì)生命科學(xué)發(fā)展的重要性及產(chǎn)生的重大影響。我國(guó)在除小鼠外，對(duì)其他幾種模式動(dòng)物的研究均較為薄弱。目前開展果蠅研究的有復(fù)旦大學(xué)、湖南師范大學(xué)、東南大學(xué)和南京大學(xué)等，開展斑馬魚研究的有清華大學(xué)、南京大學(xué)、北京大學(xué)和中科院上海生命研究院等，整合和加強(qiáng)這些研究力量將對(duì)推動(dòng)模式動(dòng)物研究的全面發(fā)展至關(guān)重要。60編輯ppt2011年9月，來自美國(guó)美國(guó)梅奧臨床醫(yī)學(xué)院（MayoClinicCollegeofMedicine）和日本山口大學(xué)的研究人員通過基因改造成功地培育出一種熒光貓，這種貓帶有能抵抗貓科動(dòng)物艾滋病病毒(FIV)感染的細(xì)胞。這一研究成果于9月11日在線發(fā)表在國(guó)際頂級(jí)學(xué)術(shù)期刊《Naturemethods》上。由于FIV與人類艾滋病毒HIV是近親，科學(xué)家們希望能利用這種熒光貓研究出治療人類艾滋病的方法。目的是想了解這種能讓猴子抵抗艾滋病的TRIMCyp蛋白是否幫助貓抵抗艾滋病毒感染。

61編輯ppt2011年，來自中科院昆明動(dòng)物研究所，中科院生物物理研究所，腦與認(rèn)知科學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室等處的研究人員分析了出生后就與母猴分離的獼猴的創(chuàng)傷行為，發(fā)現(xiàn)這些獼猴可能遭受持續(xù)的焦慮癥狀，這一研究說明獼猴可能是研究?jī)和趧?chuàng)傷經(jīng)歷的一個(gè)適宜實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?。這一研究成果公布在《美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊》（PNAS）雜志上。62編輯ppt動(dòng)物實(shí)驗(yàn)論文的撰寫及注意事項(xiàng)

涉及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的論文撰寫，除了要按照其他實(shí)驗(yàn)性研究論文撰寫的要求外，還有一定的特定要求。主要表現(xiàn)在對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方面的描述，描述是否規(guī)范一定程度上影響論文的質(zhì)量。63編輯ppt實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)描述的主要內(nèi)容包括：

動(dòng)物種系名稱、背景資料、動(dòng)物規(guī)格，以及飼養(yǎng)條件和某些處理方式。

背景資料中應(yīng)包括動(dòng)物來源、遺傳學(xué)分類及微生物學(xué)分類、質(zhì)量合格證號(hào)和飼養(yǎng)環(huán)境合格證號(hào)。64編輯ppt1.

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物名稱：論文中應(yīng)準(zhǔn)確、規(guī)范描述實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的品種或品系名稱，避免使用通俗稱謂，如SD大鼠不能寫成SD大白鼠，更不能簡(jiǎn)寫成大白鼠，KM小鼠不能寫俗稱小白鼠。65編輯ppt

2.動(dòng)物背景資料：動(dòng)物從何獲得，屬于遺傳學(xué)分類（近交系、突變系、封閉群、雜交群）中的哪一類，屬于微生物分級(jí)（普通級(jí)、清潔級(jí)、SPF級(jí)、無菌級(jí)）中的哪一級(jí)，必須在論文中描述清楚。有時(shí)，報(bào)告中還要敘述所用動(dòng)物的合格證號(hào)及頒發(fā)合格證的單位。66編輯ppt3.動(dòng)物規(guī)格：論文中應(yīng)準(zhǔn)確描述實(shí)驗(yàn)所用動(dòng)物的數(shù)量、性別、體重、年齡等。67編輯ppt4.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)條件：論文中應(yīng)對(duì)動(dòng)物飼養(yǎng)方式（如飼料種類、營(yíng)養(yǎng)成分、飼喂方式、飲水方式、飼養(yǎng)密度、籠具及墊料種類）實(shí)驗(yàn)觀察環(huán)境（如溫度、濕度、照度、噪音、環(huán)境潔凈度、通風(fēng)換氣方式等）動(dòng)物飼養(yǎng)環(huán)境的級(jí)別，以及相應(yīng)級(jí)別的實(shí)驗(yàn)條件使用合格證號(hào)及頒布單位，作出盡可能的描述。68編輯ppt5、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的某些處理方式：使用麻醉劑的種類、劑量與方法，動(dòng)物的處死方法等均應(yīng)注明。69編輯ppt例：材料和方法

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：BALB/c（nu-nu）裸鼠20只，18-22g，雌雄各半，由蘭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。動(dòng)物質(zhì)量許可證：

甘實(shí)動(dòng)管第01號(hào)。實(shí)驗(yàn)鼠在SPF條件下飼養(yǎng)，飼喂