無(wú)名字微波輔助提取

試劑摘要本實(shí)驗(yàn)先采用微波輔助萃取法快速萃取檸檬中的Vc，以1mol/L乙酸為萃取劑，再采用高效液相色譜進(jìn)行定性定量分析，以3%的乙腈LKHPO水溶液作為流動(dòng)相。通過(guò)對(duì)比停留時(shí)間進(jìn)行定性分析，通過(guò)計(jì)24算峰面積以及制作校準(zhǔn)曲線(xiàn)進(jìn)行定量分析。校準(zhǔn)曲線(xiàn)在Vc濃度在5-100mg/L范圍內(nèi)與色譜峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為。結(jié)果測(cè)得檸檬中Vc的含量為100g。本實(shí)驗(yàn)方法具有用樣少、分析快、操作簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確度高等特點(diǎn)。關(guān)鍵詞微波提取高效液相色譜維生素C檸檬維生素C(VitaminC,Vc)又叫抗壞血酸，是一種水溶性維生素。Vc在體內(nèi)參與多種反應(yīng)，如氧化還原過(guò)程，在生物氧化和還原作用以及細(xì)胞呼吸中起重要作用。人體內(nèi)缺乏Vc時(shí)容易導(dǎo)致壞血病。同時(shí)，由于Vc是一種水溶性的強(qiáng)有力抗氧化劑并參與膠原蛋白的合成，它同時(shí)還具有防癌、預(yù)防動(dòng)脈硬微波輔助提取利用與極性物質(zhì)的熱效應(yīng)及非熱效應(yīng)來(lái)提高提取效率，且以水或醇為溶劑，對(duì)環(huán)境無(wú)污染。[1]測(cè)定Vc常用的方法有靛酚滴定法，分光光度法及高效液相色譜法等。靛酚滴定法測(cè)定的是還原型抗壞血酸，反應(yīng)終點(diǎn)為粉紅色，但如果果蔬的汁液為紅色則會(huì)產(chǎn)生干擾，滴定終點(diǎn)不易判斷。[2]而分光光度微波輔助萃取具有快速高效、操作簡(jiǎn)便、節(jié)省溶劑等優(yōu)點(diǎn)，在天然產(chǎn)物、環(huán)境、食品等領(lǐng)域中得到廣泛應(yīng)用。本實(shí)驗(yàn)采用微波輔助萃取法快速萃取蔬果中的Vc，采用高效液相色譜進(jìn)行分析，以Vc標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的色譜峰面積對(duì)其濃度做校準(zhǔn)曲線(xiàn)，根據(jù)樣品中Vc的峰面積，由校準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算其濃度。本實(shí)驗(yàn)方法具有用樣少、分析快、操作簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確度高等特點(diǎn)。儀器試劑儀器高效液相色譜儀：LC-20AT；微波萃取儀(上海新儀微波化學(xué)科技有限公司)；色譜柱：依利特或PhenomenexC柱(250mm×，。18乙腈(色譜純)，冰乙酸，維生素C，磷酸二氫鉀等均為分析純；小西紅柿、桔子或西紅柿樣品。實(shí)驗(yàn)用水為超純水。Vc標(biāo)準(zhǔn)溶液：快速準(zhǔn)確稱(chēng)取Vc，用1mol/L乙酸溶液溶解，定量轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用1mol/L乙酸溶液定容，得到100mg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液備用，現(xiàn)用現(xiàn)配。色譜條件流動(dòng)相：3%的乙腈LKHPO水溶液(v/v)；流速1mL/min；柱溫為室溫，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)265nm；進(jìn)樣24實(shí)驗(yàn)步驟按操作說(shuō)明開(kāi)啟液相色譜儀，設(shè)定方法參數(shù)。校準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制：分別配制5，20，50，80，100mg/L的Vc樣品溶液，待液相色譜穩(wěn)定后進(jìn)樣分析。以Vc色譜峰面積對(duì)濃度作圖，繪制校準(zhǔn)曲線(xiàn)。樣品準(zhǔn)備：準(zhǔn)確稱(chēng)取檸檬果肉，以1mol/L乙酸50mL為萃取溶劑，微波功率設(shè)為600W，萃取時(shí)間為5min，萃取溫度設(shè)定為50℃，平行萃取兩次。萃取液過(guò)濾后用1mol/L乙酸溶液定容至100mL，制成供定性分析：分別取10μL50mg/L的Vc標(biāo)準(zhǔn)溶液和供試品溶液，進(jìn)HPLC分析。根據(jù)保留時(shí)間定性分析蔬果中的Vc。譜峰面積，根據(jù)校準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算蔬果樣品中Vc的含量，結(jié)果以mg/100g表示。3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論實(shí)驗(yàn)結(jié)果校準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制表1標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度及對(duì)應(yīng)的峰面積5931548268155133924711593209195根據(jù)峰面積對(duì)濃度描點(diǎn)，曲線(xiàn)擬合后得到以下校準(zhǔn)曲線(xiàn)。峰峰面積AcmgL3652，相關(guān)系數(shù)R2=。樣品色譜圖數(shù)據(jù)處理根據(jù)峰面積A=32420c/mg·L-1-73652，代入樣品中Vc色譜峰的峰面積，求出檢測(cè)液濃度；轉(zhuǎn)換成各表2各種樣品的色譜數(shù)據(jù)——*2——峰面積5866376175742308448742樣品Meat1Meat2Skin1Skin21保留時(shí)間t/min*1含量=c×100L×100g1000m討論與總結(jié)本實(shí)驗(yàn)采用微波提取-高效液相色譜法測(cè)定檸檬中果肉的Vc含量，測(cè)得果肉1Vc含量為100g，果肉73652，相關(guān)系數(shù)R2=，結(jié)果較為準(zhǔn)確。VcmolL，Vc在酸性環(huán)境~溶液中比在堿性溶液中較為穩(wěn)定[4]，但仍有部分被氧化的可能，這會(huì)造成標(biāo)準(zhǔn)溶液實(shí)際所含的Vc量低于標(biāo)識(shí)值，從而導(dǎo)致測(cè)定值偏高。另一方面，在樣品預(yù)處理過(guò)程中，部分Vc會(huì)被空氣中的氧氣氧化破壞，從而導(dǎo)致測(cè)定值偏微波輔助提取-高效液相色譜法測(cè)定蔬果中的Vc含量，具有用量少、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、分析速度快、準(zhǔn)確度高等特點(diǎn)，是一種合理有效的檢測(cè)方法。[5]思考題(1)校準(zhǔn)曲線(xiàn)法有何優(yōu)缺點(diǎn)液相色譜法中常用的定性定量方法有哪些答：校準(zhǔn)曲線(xiàn)法法優(yōu)點(diǎn)是操作、計(jì)算簡(jiǎn)單，通?？梢越⒎€(wěn)定、良好的線(xiàn)性關(guān)系，測(cè)定比較準(zhǔn)確，適用于大量樣品的分析，但缺點(diǎn)是每次分析的色譜條件很難完全相同，標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn)的繪制一般使用欲測(cè)組分的標(biāo)準(zhǔn)樣品，而實(shí)際樣品組成與其差別很大，因此容易出現(xiàn)較大誤差。液相色譜法中常用的定性準(zhǔn)加入法，其中最常用的是標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法。(2)如何快速建立未知物的液相色譜方法一般應(yīng)考慮哪些主要因素答：建立未知物的液相色譜法，應(yīng)分別考慮色譜柱、洗脫劑和洗脫方式的選擇，以及添加劑的選擇。首先根據(jù)待測(cè)物質(zhì)的性質(zhì)確定檢測(cè)模式，如，待測(cè)物為弱堿性，則應(yīng)采用正離子作為檢測(cè)模式，所以為了保證化合物既在色譜柱上保留，又能夠充分地進(jìn)行離子化，故可加入少量弱酸和有機(jī)物作為添加劑。然后根據(jù)分析對(duì)象的極性性質(zhì)選擇合適的色譜柱，如正相色譜柱、反相色譜柱、離子交換色譜柱等，再確定洗脫劑和流速，根據(jù)需要的出峰時(shí)間，選擇合適的洗脫方式，如等度和梯度洗脫。根據(jù)待分 (3)微波輔助萃取法為何能達(dá)到快速高效的萃取效果答：微波輔助萃取法通過(guò)微波增加物質(zhì)分子的能量，提高被提取的溫度，從而加快分子的運(yùn)動(dòng)速率以增加溶解的速率；提高溶劑的溫度，可增加被提取物在溶劑中的溶解度，達(dá)到高效的萃取效果。(4)試比較液相色譜法和氣相色譜法優(yōu)缺點(diǎn)。答：高效液相色譜法優(yōu)點(diǎn)有：(1)高效：分離效能高。可選擇固定相和流動(dòng)相以達(dá)到最佳分離效果，比工業(yè)精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。(2)高靈敏度：紫外檢測(cè)器可達(dá)，進(jìn)樣量在μL數(shù)量級(jí)。(3)應(yīng)用范圍廣：百分之七十以上的有機(jī)化合物可用高效液相色譜分析，特別是高沸點(diǎn)、大分子、強(qiáng)極性、熱穩(wěn)定性差的化合物的分離分析。(4)分析速度快，載液流速快。可反復(fù)使用，易回收。高效液相色譜的缺點(diǎn)是“柱外效應(yīng)”。在進(jìn)樣到檢測(cè)器之間，除了柱子以外的任何死空間(進(jìn)樣器、柱接頭、連接管和檢測(cè)池等)中，如果流動(dòng)相的流型有變化，被分離物質(zhì)的任何擴(kuò)散和滯留都會(huì)顯著導(dǎo)致色譜峰的加寬、柱效率降低，高效液相色譜檢測(cè)器的靈敏度不及氣相色譜。氣相色譜法的優(yōu)點(diǎn)是：(1)分離效率高，分析速度快。(2)樣品用量少和檢測(cè)靈敏度高，如氣體樣品用量為1mL，液體樣品用量為μL，固體則為幾微克。用適當(dāng)?shù)臋z測(cè)器能檢測(cè)出含量在百萬(wàn)分之十幾至十億分之幾的雜質(zhì)。(3)選擇性好，分離、可分析恒沸混合物，沸點(diǎn)相近的物質(zhì)，某些同位素，順式與反式異構(gòu)體，鄰、間、對(duì)位異構(gòu)體，旋光異構(gòu)體等。(4)應(yīng)用范圍廣，雖然主要用于分析各種氣體和易揮發(fā)的有機(jī)物質(zhì)，但在一定的條件下，也可以分析高沸點(diǎn)物質(zhì)和固體樣品。缺點(diǎn)是：流動(dòng)相和樣品都必須處理成氣體。它主要分析在操作溫度下能汽化而不分解的物質(zhì)，對(duì)高沸點(diǎn)化合物、非揮發(fā)性物質(zhì)、熱不穩(wěn)定物、離子型化合物及高聚物的分離不能分析，定性困難，致使其應(yīng)用受到一定限制。參考文獻(xiàn)[1]劉小琴，范華均等.微波輔助提?。咝б合嗌V法測(cè)定苦參中5種苦參生物堿的含量.理化檢驗(yàn)[2]趙曉梅，江英等.果蔬中Vc含量測(cè)定方法的研究.食品科學(xué).卷3期