球菌和腸道桿菌病原學(xué)檢測(cè)

球菌的檢驗(yàn)(jiǎnyàn)程序標(biāo)本(biāoběn)直接檢查（涂片(túpiàn)、染色、鏡檢）分離培養(yǎng)可疑菌落菌落特點(diǎn)鑒定試驗(yàn)第一次第二次生化結(jié)果觀察莢膜染色結(jié)果討論與分析第三次形態(tài)、色素、溶血血漿凝固酶、觸酶、菊糖發(fā)酵、甘露醇發(fā)酵、膽汁溶菌、小白鼠毒力試驗(yàn)第二頁(yè)，共二十一頁(yè)。常見(jiàn)致病性球菌染色(rǎnsè)特點(diǎn)葡萄球菌(pútáoqiújūn)鏈球菌雙球菌

革蘭陽(yáng)性(yángxìng)

革蘭陽(yáng)性

革蘭陽(yáng)性不規(guī)則成堆排列鏈狀排列矛頭狀成雙排列第三頁(yè)，共二十一頁(yè)。腦膜炎奈瑟球菌(qiújūn)

淋病(lìnbìng)奈瑟菌

革蘭陰性(yīnxìng)球菌奈瑟菌染色特點(diǎn)：腎形或豆形，成雙排列、凹面相對(duì)的革蘭陰性球菌第四頁(yè)，共二十一頁(yè)。菌落可出現(xiàn)金黃色、白色或檸檬色等色素血平板上，金黃色葡萄球菌(pútáoqiújūn)可形成

-溶血環(huán)表皮葡萄球菌(pútáoqiújūn)呈白色菌落葡萄球菌在血平板(píngbǎn)上菌落第五頁(yè)，共二十一頁(yè)。鏈球菌屬（Streptococcus）

鏈球菌在血平板有三種溶血(rónɡxuè)現(xiàn)象（1）甲型溶血（2）乙型溶血（3）丙型溶血132第六頁(yè)，共二十一頁(yè)。鏈球菌菌落(jūnluò)形態(tài)血平板：灰白色圓形凸起的細(xì)小菌落(jūnluò)，不同菌株溶血不一?；撔枣溓蚓菥G色鏈球菌第七頁(yè)，共二十一頁(yè)。肺炎(fèiyán)鏈球菌菌落第八頁(yè)，共二十一頁(yè)。1.血漿凝固酶試驗(yàn)【原理】致病性葡萄球菌能產(chǎn)生血漿凝固酶，使血漿中纖維蛋白原變?yōu)椴蝗苄岳w維蛋白，附于細(xì)胞表面生成凝塊?！静僮鳌咳∩睇}水各1滴分別(fēnbié)滴于載玻片上，用接種環(huán)挑取細(xì)菌，混合后觀察有無(wú)自凝現(xiàn)象。取1滴兔血漿混勻分別滴于載玻片上,觀察有凝固現(xiàn)象（3-5s）?！窘Y(jié)果】金黃色葡萄球菌為陽(yáng)性，表皮葡萄球菌為陰性【意義】血漿(xuèjiāng)凝固酶試驗(yàn)可區(qū)分致病性和非致病性葡萄球菌生化反應(yīng)(fǎnyìng)鑒定示教 第九頁(yè)，共二十一頁(yè)。2.觸酶試驗(yàn)【原理】H2O2

H2O+O2【操作】取潔凈玻片一張，取生理鹽水各1滴分別滴于載玻片上，以接種環(huán)分別取待檢細(xì)菌培養(yǎng)物少許，滴加3％H202一滴（立刻），在H202中磨勻，立即觀察結(jié)果。【結(jié)果】陽(yáng)性為半分種內(nèi)產(chǎn)生大量氣泡。葡萄球菌為陽(yáng)性，鏈球菌為陰性?！疽饬x(yìyì)】觸酶試驗(yàn)可區(qū)分葡萄球菌和鏈球菌。生化反應(yīng)(fǎnyìng)鑒定過(guò)氧化氫(ɡuòyǎnɡhuàqīnɡ)酶示教 第十頁(yè)，共二十一頁(yè)。3.甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)【原理】致病性葡萄球菌多含有分解甘露醇的酶類，能發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸，培養(yǎng)基由紫色變?yōu)辄S色?！静僮鳌考?xì)菌分別(fēnbié)接種甘露醇單糖發(fā)酵管，經(jīng)37℃孵育18-24h觀察結(jié)果。【結(jié)果】金黃色葡萄球菌為陽(yáng)性，表皮葡萄球菌為陰性血漿凝固酶試驗(yàn)和甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)可區(qū)分(qūfēn)致病性和非致病性葡萄球菌生化(shēnɡhuà)反應(yīng)鑒定第十一頁(yè)，共二十一頁(yè)。4.菊糖發(fā)酵試驗(yàn)【原理】大多數(shù)肺炎鏈球菌可以分解菊糖，菊糖發(fā)酵產(chǎn)酸，指示劑呈酸性反應(yīng)，發(fā)酵管由黃色變?yōu)樽霞t色?！静僮鳌考?xì)菌分別接種(jiēzhòng)菊糖發(fā)酵管，經(jīng)37℃孵育18-24h觀察結(jié)果?！窘Y(jié)果】用以區(qū)分肺炎鏈球菌和甲型鏈球菌，肺炎鏈球菌為陽(yáng)性，甲型鏈球菌為陰性。生化反應(yīng)(fǎnyìng)鑒定第十二頁(yè)，共二十一頁(yè)。5.膽汁溶菌試驗(yàn)(shìyàn)【原理】肺炎鏈球菌可產(chǎn)生一種自溶酶，膽鹽能活化自溶酶，加速自溶過(guò)程，引起細(xì)胞自溶。【操作】膽汁溶菌試驗(yàn)可用以區(qū)分(qūfēn)甲型鏈球菌和肺炎鏈球菌生化反應(yīng)(fǎnyìng)鑒定37℃，24h+膽鹽（0.1ml）37℃，0.5h【結(jié)果】液體由混濁變透明為陽(yáng)性，肺炎鏈球菌為陽(yáng)性，甲型鏈球菌為陰性?！疽饬x】接種細(xì)菌第十三頁(yè)，共二十一頁(yè)。生化(shēnɡhuà)反應(yīng)鑒定6.抗鏈球菌溶血素“O”（ASO）試驗(yàn)（快速膠乳法）【原理】本試劑膠乳液是由溶血素O和羥化聚苯乙烯膠乳共價(jià)交聯(lián)而成的抗原膠乳。ASO膠乳的靈敏度調(diào)整到200IU/ml，超過(guò)上述滴度即出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)凝集顆粒，產(chǎn)生清晰凝集，為陽(yáng)性；無(wú)凝集，為陰性。【操作】試劑預(yù)溫至室溫，并輕輕搖勻。在反應(yīng)板各格子上分別滴加1滴(約50μl)陰性、陽(yáng)性和待測(cè)血清，再各滴加ASO膠乳試劑1滴，輕輕搖勻，2min后觀察結(jié)果?！窘Y(jié)果】有清晰凝聚者為陽(yáng)性（ASO≥200IU/ml）不出現(xiàn)凝聚者為陰性（ASO＜200IU/ml）【意義】1.抗體滴度＞200IU/ml以上，新近有可能反復(fù)感染過(guò)乙型溶血型鏈球菌

2.作為風(fēng)濕活動(dòng)期、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)心病、急性(jíxìng)腎小球腎炎、的輔助診斷。示教 第十四頁(yè)，共二十一頁(yè)。【注意事項(xiàng)】無(wú)菌操作挑取細(xì)菌培養(yǎng)平板上的單個(gè)菌落進(jìn)行(jìnxíng)生化鑒定。生化反應(yīng)(fǎnyìng)鑒定第十五頁(yè)，共二十一頁(yè)。致病性球菌的主要(zhǔyào)生物學(xué)性狀鑒別(jiànbié)要點(diǎn)革蘭染色(rǎnsè)觸酶金黃色葡萄球菌表面葡萄球菌乙型鏈球菌甲型鏈球菌肺炎鏈球菌血漿凝固酶膽汁溶菌試驗(yàn)G+，球型葡萄狀排列G+，球型葡萄狀排列G+,球型長(zhǎng)鏈狀排列G+,球型短鏈狀排列G+,球形成雙,矛頭相對(duì)β溶血環(huán)無(wú)溶血環(huán)β

溶血環(huán)α溶血環(huán)α溶血環(huán)顏色金黃灰白色草綠+—溶血菌落特征生化反應(yīng)白色+++——————————草綠甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)菊糖發(fā)酵試驗(yàn)+————+————第十六頁(yè)，共二十一頁(yè)。常見(jiàn)腸道桿菌在伊紅美蘭瓊脂(qióngzhī)平板（EMB）及SS培養(yǎng)基上的菌落特點(diǎn)1.大腸桿菌菌落：較大、圓形、光滑、不透明，在EMB上形成深紫蘭色菌落（因分解乳糖產(chǎn)酸，與伊紅美蘭結(jié)合之故），在SS瓊脂平板上形成紅色菌落(因分解乳糖產(chǎn)酸，中性紅指示劑變紅)。2.傷寒桿菌和痢疾桿菌菌落：中等(zhōngděng)大、圓形、光滑、半透明、在EMB上無(wú)色（因不分解乳糖），在SS上無(wú)色或淡黃色。實(shí)驗(yàn)(shíyàn)四（二）腸道桿菌的病原學(xué)的檢測(cè)

第十七頁(yè)，共二十一頁(yè)。乳糖發(fā)酵試驗(yàn)原理：腸道桿菌能分解乳糖產(chǎn)酸，指示劑溴甲酚紫(pH5．2為黃色，pH6．8為紫色)，當(dāng)發(fā)酵產(chǎn)酸時(shí)，使培養(yǎng)基由紫色變?yōu)辄S色結(jié)果：致病菌多為陰性(yīnxìng)，非致病菌多為陽(yáng)性。用途：鑒別致病性與非致病性腸道桿菌實(shí)驗(yàn)四（二）腸道桿菌(gǎnjūn)的病原學(xué)的檢測(cè)

第十八頁(yè)，共二十一頁(yè)。

問(wèn)題(wèntí)與討論1.如何(rúhé)鑒別致病性葡萄球菌與非致病性葡萄球菌？2.如何鑒別肺炎球菌與甲型鏈球菌？3.什么是抗“O”試驗(yàn)，說(shuō)明其臨床意義？4.怎樣鑒別致病性與非致病性腸道桿菌？第十九頁(yè)，共二十一頁(yè)。本次實(shí)驗(yàn)課結(jié)束(jiéshù)

交作業(yè)，值日同學(xué)留下

下周再見(jiàn)！第二十頁(yè)，共二十一頁(yè)。內(nèi)容(nèiróng)總結(jié)實(shí)驗(yàn)四（一）球菌病原學(xué)的檢測(cè)。4觸酶試驗(yàn)試驗(yàn)?！驹怼恐虏⌒云咸亚蚓墚a(chǎn)生血漿(xuèjiāng)凝固酶，使血漿(xuè