腎素-血管緊張素系統(tǒng)調(diào)節(jié)劑對hel細(xì)胞增殖的影響

腎素-血管緊張素系統(tǒng)調(diào)節(jié)劑對hel細(xì)胞增殖的影響

腎素-血管緊張素系統(tǒng)（ras）能調(diào)節(jié)血壓和水電解質(zhì)的平衡。該系統(tǒng)由血管緊張素原(angiotensinogen,AGT)、腎素(renin)、血管緊張素(angiotensin,Ang)、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(angiotensin-convertingenzyme,ACE)及各血管緊張素受體組成。近年來研究發(fā)現(xiàn),RAS的2個(gè)主要活性成分AngII及Ang-(1-7)對細(xì)胞增殖及凋亡有調(diào)控作用,惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展與RAS的異常激活及成分失衡密切相關(guān)真性紅細(xì)胞增多癥(polycythemiavera,PV)是一種獲得性克隆性造血干細(xì)胞腫瘤,其發(fā)病機(jī)制為造血干細(xì)胞水平發(fā)生了JAK2突變,使得JAK2過度激活下游通路導(dǎo)致細(xì)胞惡性增殖和凋亡抑制材料和方法細(xì)胞培養(yǎng)HEL細(xì)胞由第三軍醫(yī)大學(xué)預(yù)防系惠贈(zèng)。HEL細(xì)胞懸于含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液于37℃及5%CO細(xì)胞凋亡和周期氯沙坦(美國默沙東公司)、替米沙坦(德國勃林格殷格翰公司)、阿利吉侖(瑞士諾華公司)、Ang-(1-7)(中國吉爾生化有限公司)。CCK試劑盒(日本株式會(huì)社同仁化學(xué)研究所)。AnnexinV-FITC/PI細(xì)胞凋亡雙染試劑盒(美國BectionDickinson公司)。PI/RNase流式細(xì)胞周期試劑盒(中國賽默飛世爾科技有限公司)。MODEL680酶標(biāo)儀(美國伯樂公司)。CytoFLEX流式細(xì)胞儀(美國Beckmancoulter公司)。藥物干預(yù)組氯沙坦、替米沙坦和阿利吉侖按10測定植物生長曲線取對數(shù)生長期的HEL細(xì)胞,每孔100μl接種于96孔培養(yǎng)板中,每列的第1孔不加細(xì)胞,為調(diào)零孔。24h后分別加入5個(gè)不同濃度的4種藥物,每個(gè)濃度設(shè)3個(gè)復(fù)孔。I組為對照組,Ⅱ-V組為實(shí)驗(yàn)組(分別為氯沙坦、替米沙坦、阿利吉侖、Ang-(1-7))。96孔板每孔加CCK-810μl,混勻,37℃孵育,設(shè)定時(shí)間點(diǎn)為3、6、12和18d4個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行篩選濃度。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效藥物的最佳干預(yù)濃度設(shè)定時(shí)間點(diǎn)為6、9、12和15d4個(gè)時(shí)間點(diǎn)。酶標(biāo)儀檢測波長450nm的每孔吸光度值,求其平均值,根據(jù)吸光度值作生長曲線。根據(jù)下列公式計(jì)算細(xì)胞存活率。流式細(xì)胞術(shù)檢測各組藥物對hel細(xì)胞的死亡取HEL細(xì)胞2×10均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差ue0afsd對所有計(jì)量資料行正態(tài)檢驗(yàn),所有數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布,用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(ue0af±SD)表示。多組比較采用單因素方差分析。所有的數(shù)據(jù)均通過SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果不同濃度組的藥物梯度的測定10各組藥物對hel細(xì)胞生長的影響10各組藥物對hel細(xì)胞周期的影響10各組藥物對hel細(xì)胞死亡的影響10ang1-7的降解循環(huán)RAS是由兩個(gè)軸構(gòu)成。腎素、AGT、ACE分別由腎臟、肝臟、肺組織分泌后,腎素將AGT轉(zhuǎn)化為AngI,ACE將AngI裂解為AngII,AngII通過AT1受體結(jié)合而產(chǎn)生收縮血管效應(yīng),此為ACE-AngII-AT1受體軸;ACE2將AngII轉(zhuǎn)換為Ang-(1-7),后者通過與Mas受體結(jié)合而產(chǎn)生與AngII相反的擴(kuò)張血管效應(yīng),此為ACE2-Ang-(1-7)-Mas受體軸。此外,AngI在ACE2作用下,先生成Ang-(1-9),后經(jīng)ACE轉(zhuǎn)化為Ang-(1-7),此為Ang-(1-7)的次要來源。Ang-(1-7)的代謝則由ACE降解為Ang-(1-5)而滅活既往學(xué)者研究發(fā)現(xiàn),PV患者AngⅡ與血管緊張素Ⅱ受體1(angiotensinⅡtype-1receptor,AT1R)的表達(dá)是異常增高的本研究結(jié)果顯示,調(diào)節(jié)RAS的4種藥物中Ang-(1-7)有顯著抑制作用,而ARB僅有輕度抑制作用,腎素抑制劑幾乎沒有抑制作用。由圖2可以看出,ARB制劑阻斷AngⅡ和AT1受體的結(jié)合,將導(dǎo)致AngⅡ向Ang-(1-7)轉(zhuǎn)化增多,推斷ARB制劑對HEL細(xì)胞輕度的抑制作用可能源于Ang-(1-7)的增多;AngⅠ、AngⅡ分別是Ang-(1-7)的次要來源和主要來源,阿利吉侖作為腎素抑制劑,降低AngⅠ、AngⅡ水平必然導(dǎo)致Ang-(1-7)的匱乏;結(jié)合本研究結(jié)果提示RAS中真正對HEL細(xì)胞生長起抑制作用的是Ang-(1-7)。正常的紅系造血調(diào)控依賴EPO與受體結(jié)合活化JAK2而激活下游通路,引起紅系的增殖和分化;而JAK2突變導(dǎo)致異?；罨疛AK2持續(xù)激活下游通路,導(dǎo)致HEL細(xì)胞惡性增殖和凋亡抑制,這種活化是非EPO依賴的本研究顯示,Ang-(1-7)明顯抑制HEL細(xì)胞的生長周期,用10Ang-(1-7)明顯抑制HEL細(xì)胞的生長,其機(jī)