煙嘧磺隆安全性檢測(cè)

煙嘧磺隆安全性檢測(cè)

磺酰胺是20世紀(jì)80年代開發(fā)的一種新型雜草。具有高度的雜草活性、少量的草、廣泛的殺草譜和長(zhǎng)期的長(zhǎng)期療效等特點(diǎn)。這是消毒超標(biāo)時(shí)代的象征，對(duì)消毒發(fā)展史具有里程碑意義。煙嘧磺隆(nicosulfuron)是磺酰脲類除草劑商品化品種之一,是一種高效、低毒玉米田苗后專用一次性除草劑,具有用量低、殺草譜廣、除草效果好等特點(diǎn),并對(duì)野高梁、野黍子有特效,為了保證其安全使用,我們從遺傳毒理學(xué)方面進(jìn)行了鼠傷寒沙門氏菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)(Ames試驗(yàn))、小鼠骨髓多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)、小鼠睪丸精母細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)、V79細(xì)胞基因突變?cè)囼?yàn),探討其有無(wú)致突變作用。11.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和動(dòng)物煙嘧磺隆原藥(國(guó)內(nèi)某單位提供),純度>95%;2,4,7-三硝基-9-芴酮(Fluka公司);MMS(Merck公司);二羥基蒽醌和2-AF(上海試劑廠);培養(yǎng)基和胰酶(Gibco公司);環(huán)磷酰胺(上海華聯(lián)制藥有限公司);絲裂霉素C、氧化型輔酶Ⅱ、6-磷酸葡萄糖鈉鹽、6-巰基鳥嘌呤(6-TG)、胸苷、次黃嘌呤、氨甲喋呤、甘氨酸(Sigma公司)。鼠傷寒沙門氏菌株TA97、TA98、TA100、TA102,由美國(guó)Ames實(shí)驗(yàn)室提供,經(jīng)特性鑒定符合要求;肝微粒體酶S9(多氯聯(lián)苯誘導(dǎo))本實(shí)驗(yàn)室按Ames方法制備。三級(jí)昆明種小鼠,購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心[京動(dòng)許字(2000)第017號(hào)]。中國(guó)倉(cāng)鼠肺細(xì)胞株(V79細(xì)胞),本實(shí)驗(yàn)室液氮保存。1.2制備陽(yáng)性對(duì)照和回變性對(duì)照采用平板摻入法,劑量為8、4、2μg/皿,同時(shí)設(shè)自發(fā)回變、溶劑對(duì)照(無(wú)菌蒸餾水)和陽(yáng)性對(duì)照。在加和不加S9條件下分別進(jìn)行試驗(yàn)。1.3h經(jīng)口染毒試驗(yàn)昆明種小鼠體重25~30g,每組10只動(dòng)物(雌雄各半)。間隔24h經(jīng)口染毒兩次,劑量為1000、500、250mg/kgbw。于第二次給藥后6h取胸骨骨髓常規(guī)制片,Giemsa染色,每只動(dòng)物觀察1000個(gè)多染紅細(xì)胞(PCE),并計(jì)數(shù)含有微核細(xì)胞數(shù)。1.4小鼠睪丸常規(guī)片昆明種雄性小鼠體重25~30g,每組5只動(dòng)物。連續(xù)5d經(jīng)口染毒,劑量為2500、1250、625mg/kgbw。于第一次給藥后第14d處死動(dòng)物,取出兩側(cè)睪丸常規(guī)制片,Giemsa染色。每只動(dòng)物每側(cè)睪丸觀察50個(gè)中期分裂精母細(xì)胞,記錄染色體畸變細(xì)胞數(shù)和畸變類型并計(jì)算畸變率。1.5小鼠血清中型mds-pcr檢測(cè)細(xì)胞集落形成率根據(jù)細(xì)胞毒性測(cè)定試驗(yàn)確定5個(gè)測(cè)試劑量,依次為:5000、2500、1250、625、312.5μg/ml。細(xì)胞于含THMG的MEM培養(yǎng)液中培養(yǎng)一周(以殺滅自發(fā)HGPRT座位突變體)后,接種于無(wú)血清MEM培養(yǎng)液中,在加和不加S9條件下與受檢樣品接觸5h,置含10%小牛血清的MEM培養(yǎng)液中培養(yǎng),進(jìn)行集落形成率測(cè)定和突變體的選擇。集落形成率測(cè)定:表達(dá)結(jié)束的細(xì)胞,以400個(gè)細(xì)胞/瓶密度接種,每劑量組5瓶細(xì)胞,培養(yǎng)7d后,用甲醇固定、姬姆薩染色,計(jì)數(shù)各瓶的細(xì)胞集落數(shù)并計(jì)算集落形成率(CFE)。表達(dá)和突變體的選擇:表達(dá)結(jié)束的細(xì)胞,按2.5×1022.1回變菌落數(shù)測(cè)定煙嘧磺隆原藥在加與不加S9時(shí),誘發(fā)鼠傷寒沙門氏菌株回變菌落數(shù)均未超過(guò)自發(fā)回變菌落數(shù)的2倍;各劑量組回變菌落數(shù)與溶劑對(duì)照比較無(wú)顯著性差異(P>0.05),各劑量組間無(wú)明顯的劑量-反應(yīng)關(guān)系(見(jiàn)表1)。2.2組溶劑對(duì)照比較煙嘧磺隆原藥各劑量組的微核細(xì)胞率為3.2‰~5.2‰,與溶劑對(duì)照比較無(wú)顯著性差異(P>0.05);陽(yáng)性對(duì)照與溶劑對(duì)照比較有顯著性差異(P<0.01,見(jiàn)表2)。2.3兩組陽(yáng)性對(duì)照和不陽(yáng)性對(duì)照的比較見(jiàn)表1煙嘧磺隆原藥各劑量組的染色體畸變率為0.8%~1.0%,與溶劑對(duì)照比較無(wú)顯著性差異(P>0.05),陽(yáng)性對(duì)照與溶劑對(duì)照比較有顯著性差異(P<0.01,見(jiàn)表3)。2.4試驗(yàn)結(jié)果的選擇各試驗(yàn)劑量組的突變頻率為24.77/10每種體外短期檢測(cè)系統(tǒng)均會(huì)受到實(shí)驗(yàn)條件(如有限的體外代謝活化系統(tǒng))、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、不同受試農(nóng)藥的特殊性等因素影響,使試驗(yàn)結(jié)果存在一定比例的假陰性或假陽(yáng)性的可能,任何一項(xiàng)遺傳毒性試驗(yàn)中的陽(yáng)性/陰性結(jié)果不能完全說(shuō)明受試農(nóng)藥對(duì)人體具有/無(wú)突變性,需結(jié)合遺傳毒性方面的多項(xiàng)檢測(cè)試驗(yàn)結(jié)果全面考慮,以提高對(duì)農(nóng)藥是否具有誘變性及潛在致癌性評(píng)價(jià)的可靠性。因此,我們選擇Ames試驗(yàn)、小鼠骨髓多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)、