農(nóng)藥生物測定

《農(nóng)藥生物測定》復習要點農(nóng)藥生物測定的簡史第一時期：19世紀末~1920至1923年間:研究出測定白喉抗毒素含量的標準方法.特色：都是用單個動物體作直接的效勞測定，將待測的藥劑與標準藥劑對比較來預計其相對藥效。第二時期：20世紀30年月至20世紀70年月1937年歐文第一提出了系統(tǒng)的生物測定方法報告;1947年芬尼第一版了系統(tǒng)的生物測定統(tǒng)計方法;1950年芬尼及古德溫第一版《生物測定標準化》一書;1957年布斯維納（）第一版《殺蟲劑生物測定評論》;1959年張宗炳在其《昆蟲毒理學》一書中,以專章對殺蟲劑生物測定及統(tǒng)計剖析作了系統(tǒng)的闡述;1963年張澤溥等第一版《殺蟲劑及殺菌劑的生物測定》;1984年張澤溥第一版《生物測定統(tǒng)計》專著。特色：研究出以生物集體為反響基礎的生物測定方法，提升了測定精度。第三時期：20世紀70年月到現(xiàn)在研究利用昆蟲神經(jīng)電生理方法檢測化合物對昆蟲的拒食活性已獲得進展。2.殺菌劑也由以傳統(tǒng)的病原菌離體試驗方法為主，轉(zhuǎn)變成寄主植物上的活體試驗為主。3.20世紀80年月以來介于活體與離體之間的植物組織培養(yǎng)生物測定方法遇到了寬泛的重視，有可能發(fā)展成一類新的殺菌劑生物測定方法。如合用于細菌性病害挑選的塊根法；合用于大麥白粉病挑選的芽鞘表皮法等。第四時期：20世紀70年月到現(xiàn)在發(fā)展趨向：跟著分子生物學及生理、生化方面研究技術的提升，運用分子生物學技術和生化技術進行生測的研究亦發(fā)展很快，如對新藥劑的挑選及利用酶學試驗進行害物抗藥性的監(jiān)測和增效劑的挑選等等。因為電子計算機軟、硬件的快速發(fā)展，農(nóng)藥生物測定中的統(tǒng)計剖析，早已廣泛程序化和微機化，使生物測定結果的剖析計算更為簡易、快捷，也更為正確、靠譜。農(nóng)藥生物測定中應注意的幾點：運用特定的試驗設計；在必定條件下（局部控制）進行；均以集體反響為基礎，以生物統(tǒng)計為工具。農(nóng)藥生物測定的定義:運用特定的試驗設計，利用生物對農(nóng)藥的反響，并以生物統(tǒng)計為工具，剖析供試對象在必定條件下的效應，來胸懷某種農(nóng)藥的生物活性。農(nóng)藥生物測定的內(nèi)容及應用測定農(nóng)藥對昆蟲、螨類、病原菌、線蟲、雜草以及鼠類等靶標生物的毒力或藥效研究農(nóng)藥對植物的生理作用挑選新農(nóng)藥品種研究化合物的化學構造與生物活性關系的規(guī)律，為定向創(chuàng)制新農(nóng)藥供給依照研究農(nóng)藥的理化性質(zhì)及加工劑型與毒效關系，提升農(nóng)藥的使用成效研究有害生物的生理狀態(tài)及外界環(huán)境條件與藥效的關系，以便提升農(nóng)藥使用水平，做到合時用藥測定不一樣農(nóng)藥混用的效勞，為農(nóng)藥的合理混用及找尋增效劑提供依照對有害生物抗藥性的監(jiān)測和研究戰(zhàn)勝或延緩抗藥性發(fā)展的有效舉措研究農(nóng)藥的作用機理及生理效應還可利用敏感生物（如蚊幼蟲等）來測定農(nóng)藥的有效含量及殘留量。測定農(nóng)藥對溫血動物及有利生物的毒性農(nóng)藥生物測定基礎藥劑濃度的表示方法:(1)百分濃度(2)百萬分濃度（ppm）(3)倍數(shù)法(4)波美度百分濃度:分容量百分濃度和質(zhì)量百分濃度兩種。液體與液體之間配藥經(jīng)常用容量百分濃度。固體與固體或固體與液體之間配藥時多用質(zhì)量百分濃度。新增登記和生產(chǎn)允許的農(nóng)藥產(chǎn)品，其有效成分含量原則上一致以質(zhì)量百分含量（%）表示。百萬分濃度（ppm）ppm：partpermillion（百萬分之）10-6ppb：partperbillion（十億分之）10-9ppt：partpertrillion（萬億分之）10-12與“％”同樣，ppm、ppb、ppt不是濃度單位。但可定義為摩爾比、體積比、質(zhì)量比或質(zhì)量體積比等。百萬分濃度:即100萬份藥液或藥粉中含有這類藥劑成分的份數(shù)，以10-6(ppm)表示，其基本單位為百萬分之一。常用mg/kg（μg/g）或mg/L（μg/mL）表示，即每L或每kg物質(zhì)中所含的物質(zhì)的mg數(shù)。如：1ppm阿維菌素丙酮溶液＝1mg/L.倍數(shù)法①內(nèi)比法：稀釋100倍或100倍以下計算稀釋量時，要扣除原有藥劑所占的那一份數(shù)目。如：稀釋50倍時，表示用藥劑1份加水49份。②外比法：稀釋100倍以上計算稀釋時，則不扣除原有藥劑所占的那一份。如：稀釋1000倍，則用原藥劑1份加水1000份。在稀釋農(nóng)藥時,假如未注明按容量稀釋則均按質(zhì)量計算！波美度石硫合劑有效成分的表示單位，用“oBe”表示，它表示濃度與比重的正有關。百分濃度和百萬分濃度之間的換算百萬分濃度（ppm）=10000×百分濃度,如:75%的多菌靈丙酮溶液，為多少ppm？由上式得：10000×75=750000（ppm）即:750000ppm百分濃度和稀釋倍數(shù)之間的換算百分濃度（%）=原藥劑濃度÷稀釋倍數(shù)×100%如：90%的敵百蟲稀釋1000倍后的藥液百分濃度為多少？由上式得90%÷1000=0.09%即得為0.09%百分濃度與有效成分之間的換算當原藥劑的比重等于或近似1時，百分濃度與有效成分（g）之間的換算關系為:藥液有效成分（g）=毫升數(shù)×藥液濃度如：25%功夫菊酯乳油100毫升，含有多少功夫菊酯有效成分？解：100×25%=2.5（g）波美度和稀釋倍數(shù)之間的換算重量稀釋倍數(shù)原液波美度數(shù)=-1需用波美度數(shù)容量稀

原液波美度×(145-需=-釋倍數(shù)需用藥液波美度×稀釋劑用量的計算公式例：將10毫升20％殺滅菊酯乳油稀釋成50ppm的藥液，需用多少水？解：原藥劑的量＝10毫升原藥劑濃度＝20%＝20×10000ppm所配制的藥劑濃度＝50ppm依據(jù)公式10×200000÷50＝40000(毫升)＝40(升)原藥劑用藥量的計算公式比如：50％敵敵畏配100公斤含量為500ppm的藥液，需要原藥多少？解：所配藥劑量＝100公斤（kg）,所配制藥劑濃度＝500ppm,原藥劑濃度＝50%＝500000ppm依據(jù)公式100×500÷500000＝0.1（公斤）＝100克倍數(shù)法計算公式當稀釋倍數(shù)在100倍以下時（內(nèi)比法）:當稀釋倍數(shù)在100倍以上時（外比法）:例（內(nèi)比法）：需配制98公斤20％敵稗乳油50倍液用于水稻秧苗除草，求用藥量是多少？解：所需藥劑量＝98公斤稀釋倍數(shù)＝50依據(jù)公式98÷(50-1)＝2公斤例（外比法）：需配制2.5％敵殺死乳油稀釋2000倍液10升，求需加2.5％乳油多少？解：所需藥劑重量＝10升稀釋倍數(shù)＝2000依據(jù)公式10÷2000＝0.005升＝5豪升用64%殺毒礬可濕性粉劑750X防治黃瓜霜霉病檢查狀況以下：①請計算藥前及第一次藥后10天及第二次藥后15天的病指。②請計算第一次藥后10天及第二次藥后15天的防效。③假如畝用藥液為75升，每畝需要多少克64%殺毒礬WP？室內(nèi)毒力測定和田間試驗一般地，農(nóng)藥生物測定指在室內(nèi)進行的測定。室內(nèi)毒力測定主假如測定一種藥劑的毒性、毒力或比較幾種藥劑毒力的大小。室內(nèi)試驗的結果，除可作為藥劑的初步挑選的依據(jù)外，還可為田間試驗供給參照。有時在田間發(fā)現(xiàn)的問題一定拿回室內(nèi)作比較精美的試驗研究。田間試驗主要測定或比較藥劑在田間條件下的藥效，其結果比較靠近實質(zhì)狀況，為生產(chǎn)防治供給靠譜的依照。農(nóng)藥生物測定試驗設計的原則1）相對控制測定條件（2）一定建立比較（3）各樣辦理一定設置平行重復4）運用生物統(tǒng)計剖析試驗結果1）相對控制測定條件環(huán)境條件：溫度、濕度、光照。供試生物：標準化生物（同一環(huán)境下培養(yǎng)的，發(fā)育一致）。供試藥劑：室內(nèi)生物測定一定純凈（原油或原粉），起碼要有切實的有效成分含量。施藥要平均一致。2）一定建立比較比較(check，符號CK)，比較有三種：空白比較：非藥劑成分比較：如丙酮比較。標準藥劑比較：多菌靈依據(jù)詳細狀況和測定要求確立試驗中所需設置的比較。3）各樣辦理一定設置平行重復任何實驗都一定能夠重復，這是擁有科學性的標記。增添重復是減少偏差的一種方法。一般室內(nèi)毒力測定要求起碼重復3次。田間小區(qū)藥效試驗，則要求重復4-5次。室內(nèi)毒力測定線性濃度范圍的找尋（1）濃度（或劑量）范圍的找尋將待測樣品分別配制成跨度較大的幾個濃度，依據(jù)試驗所需要的方法測定每個濃度（或劑量）對供試生物的活性，找尋其效應值（如死亡率、克制率等）在1%-99%之間的濃度（或劑量），即可確立大概的濃度范圍（2）設置濃度（或劑量）在所獲得的大概濃度范圍內(nèi)，設計一系列不一樣的藥劑濃度（或劑量），濃度梯度能夠依據(jù)藥劑特色及初步確立的濃度范圍設置成等比、等差或其余形式，而后測定不一樣濃度藥劑對目標生物的效應值。3）最后的濃度確立:若可選出5-7組知足上邊兩個條件的數(shù)據(jù)，即所設置濃度合理。反之，則需要從頭設置濃度。注意：殺蟲實驗中比較組的死亡率不可以超出20%殺蟲劑室內(nèi)生物測定殺蟲劑生物測定技術的一般原則（一）控制影響要素環(huán)境條件、昆蟲、藥劑、溶劑等。（二）一定建立比較空白比較、溶劑比較、標準藥劑比較。（三）一定設重復一般重復3次，每重復20~50頭試蟲。（四）供試的目標昆蟲盡量選擇農(nóng)作物害蟲，在同一環(huán)境條件下人工飼養(yǎng),或在田間同一環(huán)境條件下抓捕，盡量一致。標準目標昆蟲：是指在生物測定中被廣泛采納的，擁有必定代表性和經(jīng)濟意義，并且抗藥力穩(wěn)固平均的農(nóng)藥殺蟲毒力和毒效指示的試蟲集體。對標準目標昆蟲的要求1、易飼養(yǎng)，生殖力強，不相互殘殺，不受季節(jié)限制，能保證常年充分供給；2、要求有必定的代表性和經(jīng)濟意義。3、生活力及抗藥力要穩(wěn)固和平均一致；4、采納適合蟲期、齡期、年紀的試蟲集體或混淆集體作為測試對象。5、便于進行移取辦理標準目標昆蟲的移取方法(一)一般移取法(二)趨光法(三)麻醉法:1、CO2法；2、揮發(fā)蒸氣法；3、冷凍法；4、乙醚低溫麻醉法(四)吸蟲法(五)自行運動移蟲法二、初步毒力試驗1、應用范圍:①主要用于對大批化合物的殺蟲活性挑選②用于為田間防治害蟲挑選有效藥劑初步毒力試驗又叫過篩試驗（screentest）。其目的是：確立一種新化合物對某一目標昆蟲能否有毒，以便確立能否有必需進一步做毒殺作用方式或精美的毒力測定。比較粗放的初步試驗，對挑選新農(nóng)藥來說是更為主要的。初步毒力測定的方法:①噴霧②噴粉③浸漬④食料混藥法精美的毒力測定:就是我們常說的毒力測定。指在特定條件下權衡某種殺蟲劑對某種昆蟲毒力程度的一種方法?？捎脕碚J識某一殺蟲劑對某一害蟲的毒力程度，也可用來比較幾種殺蟲劑對某一種昆蟲的毒力差異；1、內(nèi)容:①毒殺作用方式的測定②毒力程度的測定定量取食法、夾毒葉片法、液滴飼喂法、口腔注射法葉片夾毒法致死中量的計算：依據(jù)取食面積、單位面積上的著藥量及試蟲體重，求出每頭試蟲的單位體重受藥量，排序，分組:生計組、存亡組、死亡組。葉片夾毒法致死中量的計算：A:中間組每項死蟲單位體重藥量累加除以總死蟲數(shù)得A。B:中間組每項活蟲單位體重藥量累加除以總死蟲數(shù)得B。經(jīng)典夾毒葉片法的弊端：操作麻煩.需要控制取食量。濕度不好控制，以致葉片干縮，難測定面積。要求施藥平均。殺蟲劑胃毒毒力測定技術——改良夾毒葉片法改良夾毒葉片法的特色：將不定量進食改為定量給食，并用點滴藥量取代噴粉或噴霧。殺蟲劑的觸殺毒力測定技術－局部施藥法①點滴法（topicalapplication)將必定濃度的藥液點滴于蟲體的某一部位，多在幼蟲的前胸背板上，藥劑快速揮發(fā)，藥劑在體壁形成藥膜而侵入體內(nèi)。熏蒸殺蟲作用測定方法：（1）二重皿法（2）三角瓶法（3）廣口瓶法葉蝶法：拒食率（%）=(比較取食面積－辦理取食面積)/比較取食面積×100溫濕度對殺蟲劑的熏蒸毒力影響較大，一般在25℃、相對濕度50%條件下測定。熏蒸劑的藥量計算：以單位容積內(nèi)的藥劑用量來表示（mg/L或ml/L）。辦理死亡率－比較死亡校訂死亡率（%）＝×1001－比較死亡校訂死亡率公式的限制性1、只有當自然死亡與藥劑所惹起的死亡沒有關系時,自然死亡率在5%～20%之間時才運用；2、如自然死亡率過大或藥劑辦理對自然死亡率有影響時均不運用；3、如自然死亡率在5%以下，可將辦理組死亡率減去自然死亡率即可獲得校訂，即：校訂死亡率=辦理組－比較組4、如自然死亡率>20%時，則表示該目標昆蟲種群不宜供試驗用，試驗結果不行靠。致死中量（MediumLethalDose）LD50：指在必定條件下，可致供試生物多半死亡時機的藥劑劑量，表示單位：mg/kg、μg/g或μg/頭。致死中濃（MediumLethalConcentration）LC50：可致供試生物半數(shù)死亡時機的藥劑濃度。致死中時(MediumLethalTime)LT50或擊倒中時(MediumKnockdownTime)KT50即殺死或擊倒昆蟲集體一半個體所需的時間。相對毒力指數(shù)昆蟲對殺蟲劑的敏感性散布是一個偏常態(tài)散布，殺蟲劑對昆蟲的效應的增添不是和劑量的增添成比率，而是與劑量增添的比率成比率。毒力指數(shù)（TI）(%)＝標準殺蟲劑LD50*100/供試殺蟲劑LD50混劑（M）的實質(zhì)毒力指數(shù)（ATI）(%)＝標準殺蟲劑的LD50*100/混劑M的LD50混劑M的理論毒力指數(shù)（TTI）＝A藥的TI×M藥中的A%＋B藥的TI×M藥中的B%混劑M的共毒系數(shù)（CTC）＝ATI÷TTI×100增效與否判斷標準：CTC>120增效作用；CTC＝80~120相加作用；CTC<80拮抗作用實質(zhì)死亡率與理論死亡率之差或共同毒力指數(shù)大于20％時屬增效，小-20％屬拮抗。共同毒力指數(shù)（％）＝實質(zhì)死亡率－理論死亡率×100理論死亡率一般以為預期LD50/實測LD50的毒力比值在0.5~2.6之間屬相加作用，大于2.6時屬增效，小于0.5屬拮抗。實例：菊·殺混劑(3:7混配)對棉鈴蟲3齡幼蟲毒力測定數(shù)據(jù)為：氰戊菊酯LD50＝0.6598μg/g殺螟硫磷LD50＝78.2013μg/g菊·殺混劑LD50＝1.0831μg/g經(jīng)過計算，請說明這兩種農(nóng)藥混配后有無增效作用？菊·殺混劑理論毒力指數(shù)（TTI）(0.6598÷0.6598)×30%×100+(0.6598÷78.2013)×70%×100=30.6菊·殺混劑實質(zhì)毒力指數(shù)（ATI）＝(0.6598÷1.0831)×100=60.9菊·殺混劑共毒系數(shù)（CTC）＝60.9÷30.6×100＝199＞120說明：氰戊菊酯與殺螟硫磷以3:7混配具增效作用。殺菌劑的生物測定殺菌劑生物測定：以病菌（活體或離體）為測定對象，評論各樣殺菌劑的毒效一、離體測定：這類測定中僅包含病菌和藥劑，判斷藥劑的毒力主假如依據(jù)病菌與藥劑接觸后的反響（如孢子不萌生，不長菌絲等）。長處：易于控制、操作簡易快速、精準度較高。弊端：測定結果與生產(chǎn)實質(zhì)距離較大，而有些化合物一定在寄主植物體內(nèi)活化后才起殺菌作用。可能漏篩一些將來頗具潛力的化合物。二、活體測定:這一種類的方法包含病原菌、藥劑和寄主植物。殺菌劑毒力以寄主植物的發(fā)病狀況（廣泛程度、嚴重程度）來評判。特色：測定周期較長，操作比較復雜，大田藥效測定常受季節(jié)限制，測準時受多種因子的影響，以致結果不穩(wěn)固。但在應用實質(zhì)較靠近，有很大適用價值殺菌劑毒力測定步驟：1、在室內(nèi)進行殺菌劑生物測定；2、在控制條件下，進行殺菌劑溫室盆栽生物測定；3、在自然條件下，進行殺菌劑的大田藥效試驗。潔凈：清除其余化合物的影響。滅菌：用物理或化學方法滅菌，完整除掉或殺死器皿表面和內(nèi)部的一些微生物。消毒：消毒是消滅或減少某些病原微生物，而不是消滅全部微生物。在進行分別工作時，植物組織表面常常要消毒、去雜而保“真”（病原菌）1）物理滅菌①干熱滅菌：利用干熱空氣來滅菌溫度：160℃~180℃，不宜超出180℃。時間：160°，2h；180℃，1h。為提升成效，可用間歇滅菌法，熱-冷-熱（溫度可低些）。②濕熱滅菌：高壓蒸氣滅菌較常用，效率高。干熱：160℃，2h，滅菌濕熱：121℃，20min2）化學滅菌：殺菌力極強的洗液有：1%升汞活液、5%福爾馬林、70%酒精次氯酸鹽3）過濾滅菌：細菌不可以經(jīng)過，如過濾漏斗可用來濾出含蛋白的培養(yǎng)基、血清及抗藥素中的細菌。（二）植物病原菌的培養(yǎng)步驟（要求：在無菌條件下進行）1、培養(yǎng)基的制備2、接菌3、保留對供試菌的要求1、較易生殖、菌落邊沿顯然，產(chǎn)菌絲、孢子量適合；2、要求有必定代表性、經(jīng)濟意義，為重要的農(nóng)業(yè)病菌；3、生活力、抗性平均、穩(wěn)固、一致；4、便于操作、移取等。殺菌劑皿內(nèi)生物測定:（一）孢子萌生法（二）含毒介質(zhì)培養(yǎng)法（三）葉碟法（一）孢子萌生法基來源理：將供試藥劑附著在載玻片上或其余平面上，而后將供試病菌孢子懸浮液滴在上邊（或?qū)㈡咦討腋∫号c藥液混淆后滴在玻片上），在保溫、保濕條件下培養(yǎng)一準時間后鏡檢以孢子萌生力判斷殺菌劑毒力。長處：快速、試驗當日即可得結果。步驟：1.萌生表面的辦理2.藥劑在玻片上的附著3.孢子懸浮液的準備4.定溫保濕培養(yǎng)結果檢查及表示孢子懸浮液的準備:菌種應是標準菌種，供試菌種應切合以下條件①菌種純粹，在一般培養(yǎng)基上易大批產(chǎn)生孢子；②多代生殖不易產(chǎn)生變異；③孢子個體較大，易于在顯微鏡下察看萌生狀況；④在分類上有必定的代表性，并且是重要的植物病害病原菌。調(diào)至最高濃度（10×10倍，40個孢子），一準時間后（比較萌生率在無菌水，攪勻二層紗離心無菌洗凈的孢子菌液菌種懸85%以上）檢查孢子萌生除率去，菌一絲般體在及低破倍鏡下，隨機檢查200個孢子。比較孢子萌生率－辦理孢子萌生率克制孢子萌生率%×100比較萌(二)含毒介質(zhì)培養(yǎng)法：水平擴散法（又叫抑菌圈法或平面法）2.生長速率法3.最低克制濃度法水平擴散法（又叫抑菌圈法或平面法）步驟：制備雙層培養(yǎng)基、擺放牛津杯放帶濾紙片、低溫擱置、適溫培養(yǎng)、結果檢查長處：精準度高，操作簡單，很快可獲得結果.弊端：測定結果受藥劑溶解后和擴散能力影響很大，有必定限制性，此外，對嚴格的寄生菌不適合。生長速率法步驟：制備菌餅；制備帶毒培養(yǎng)基；移菌餅；結果檢查比較的菌落直徑－辦理的菌落直徑生長克制率（%）＝×100比較菌落生長直徑病菌的生長速度可用兩種方法表示