課件-酶類(lèi)藥物的鹽析純化

酶類(lèi)藥物的

鹽析純化主講：萊蕪職業(yè)技術(shù)學(xué)院孫靜（副教授）瑞陽(yáng)制藥有限公司田真（高級(jí)工）在蛋白質(zhì)水溶液中加入中性鹽，隨著鹽濃度增大而使蛋白質(zhì)沉淀析出的現(xiàn)象。鹽

析2）中性鹽離子破壞蛋白質(zhì)表面水膜1）中性鹽離子中和蛋白質(zhì)表面電荷鹽

析常用中性鹽(NH4)2SO4,Na2SO4，MgSO4，NaH2PO4，NaCl，Na3PO4,K3PO4。①溶解度大：溶解度隨溫度變化小，低溫下仍具有較大的溶解度，②分離效果好。硫酸銨分段鹽析效果也比其他鹽好，一步可除去75%的雜蛋白③不易引起蛋白質(zhì)變性：0-4°C④價(jià)格便宜。(NH4)2SO4：鹽

析蛋白質(zhì)的濃度2.5%-3.0%的蛋白質(zhì)濃度溫度溫度提高利于蛋白質(zhì)沉淀室溫（10~25℃）少數(shù)不穩(wěn)定、易失活的物質(zhì)：低溫（0-4℃）pH溶液PH值調(diào)到目的蛋白的等電點(diǎn)處鹽濃度硫酸銨飽和度不同，析出的成分不同

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0204影響鹽析因素制藥企業(yè)鹽析精益求精匠心制藥操作：C級(jí)潔凈區(qū)的粗純間設(shè)備：鹽析罐對(duì)破壁提取崗位生產(chǎn)的稀酶液（即上清液）進(jìn)行鹽析操作，以達(dá)到沉淀目標(biāo)蛋白的目的鹽析崗位精益求精匠心制藥鹽析操作鹽析清場(chǎng)一次鹽析二次鹽析更衣生產(chǎn)前檢查清場(chǎng)準(zhǔn)備工作鹽析操作硫酸銨分級(jí)鹽析一次鹽析：硫酸銨濃度為55%（飽和度）二次鹽析硫酸銨的濃度為90％（飽和度）。鹽析操作①更衣②檢查地面有無(wú)上批次遺留物②檢查桌面有無(wú)上批次遺留物③檢查崗位清場(chǎng)合格證④檢查設(shè)備狀態(tài)標(biāo)志⑤檢查地漏⑥檢查溫濕度是否符合要求⑦鹽析崗位操作及清潔SOP：齊全⑧鹽析罐操作及清潔SOP：齊全生產(chǎn)前準(zhǔn)備（更衣

檢查）一次鹽析操作鹽析操作二次鹽析操作鹽析操作清

場(chǎng)孫老師（出鏡）：感謝田老師的操作及講解。固體投鹽法先將鹽粒研細(xì)，在不斷攪拌下分批緩慢加入到溶液中，避免局部過(guò)濃造成共沉淀和某些蛋白質(zhì)變性。A鹽析后的蛋白質(zhì)最好盡快進(jìn)行脫鹽處理，以免變性，采用超濾和離子層析處理B操作注意事項(xiàng)實(shí)事求是，不提前，不滯后生產(chǎn)記錄21用量及鹽處理固體硫酸銨加入法（量大時(shí)）加入飽和硫酸銨溶液法（量小時(shí)）硫酸銨用化學(xué)法將重金屬除去（如通入H2S后過(guò)濾），再將硫酸銨重結(jié)晶備用。操作注意事項(xiàng)3.嚴(yán)格按操作規(guī)程操作操作注意事項(xiàng)總

結(jié)●生產(chǎn)前檢查●一次鹽析●二次鹽析●清洗鹽析原理及影響因素鹽析崗位鹽析操作注意事項(xiàng)鹽析操作●固體投鹽法，先將鹽粒研細(xì)，在不斷攪拌下分批緩慢加入到溶液中●鹽析后的蛋白質(zhì)采用超濾和離子層析處理●指在蛋白質(zhì)水溶液中加入中性鹽，隨著鹽濃度增大而使蛋白質(zhì)沉淀析出的現(xiàn)象?！覃}濃度、蛋白質(zhì)