2021高考山東卷生物試題(含官方答案和解析)

#25?.Sall②.EcoRI3.6④.F7與R擴(kuò)增產(chǎn)物不含完整的啟動子，熒光蛋白基因不表達(dá)⑤.引物F4與F5在調(diào)控序列上所對應(yīng)序列之間的區(qū)段上⑥.根據(jù)有無熒光情況判斷，F(xiàn)1?F4與R擴(kuò)增產(chǎn)物上均有結(jié)合位點，因此結(jié)合位點位于F4所對應(yīng)調(diào)控序列的卞游（右側(cè)）；F5?F6與R擴(kuò)増產(chǎn)物上均無結(jié)合位點，可知結(jié)合位點位于F5所對應(yīng)調(diào)控序列的上游（左側(cè)），所以結(jié)合位點位于引物F4與F5在調(diào)控序列上所對應(yīng)序列之間的區(qū)段上【分析】1、據(jù)題意可知，科研人員擴(kuò)增了丫基因上游不同長度的片段，據(jù)圖中注釋可知，F(xiàn)1?F7以及R位置均為引物，故擴(kuò)增的序列分別是引物F1和引物R之間的序列，引物F2和引物R之間的序列，引物F3和引物R之間的序列，引物F4和引物R之間的序列，引物F5和引物R之間的序列，引物F6和引物R之間的序列，引物F7和引物R之間的序列；2、據(jù)圖中對限制酶的注釋可知，限制MunI識別并切割后的黏性末端與限制晦EcoAI識別并切割后的黏性末端相同，限制^XhoI識別并切割后的黏性末端與限制晦SRI識別并切割后的黏性末端相同?！驹斀狻浚?）據(jù)提意可知，需妥將擴(kuò)增后的產(chǎn)物定向插入并指導(dǎo)熒光蛋臼基因的表達(dá)，則含有啟動子P的擴(kuò)增后的產(chǎn)物讀取方向與熒光蛋臼基因的讀取方向一致，故擴(kuò)增后的產(chǎn)物中的R端與熒光蛋臼基因中限制MunI識別序列端結(jié)合，才能保證擴(kuò)增后的產(chǎn)物定向插入并指導(dǎo)熒光蛋臼基因的表達(dá)。要做到定向插入，需要引物末端兩端添加限制酶的識別序列，且被限制酶識別并切割后，兩端的黏性末端不能相同。而擴(kuò)增后的產(chǎn)物中可能含有A/mI和XhoI的識別位點，故在引物末端添加限制晦的識別序列不能被限制酶MmI和XhoI所識別，故應(yīng)該選用添加限制酶EcoAI和限制SalI識別序列，據(jù)圖中對限制晦的注釋可知，限制MunI識別并切割后的黏性末端與限制晦EcoAI識別并切割后的黏性末端相同，故R末端添加的序列所對應(yīng)的限制酶是EsAI,在F1~F7末端添加的序列所對應(yīng)的限制酶是曲I；熒光蛋臼基因中含有限制酶EcoRI的識別位點，故對載體使用限制MunI和XhoI切割。綜上所述，對載體使用限制MunI和I切割，對擴(kuò)增后的產(chǎn)物用限制酶EcoAI和限制欝S刃I識別序列，然后在DNA連接酶的催化作用下，連接形成重組載體；產(chǎn)物擴(kuò)增中需妥使用T叫酶催化，合成更多的產(chǎn)物，故從產(chǎn)物擴(kuò)增到載體構(gòu)建完成的整個過程共需要6種酶，分別是兀g酶、限制EcoRI、限制晦曲I、限制晦、限制酶XhoI、DNA連接晦；（2）受體細(xì)胞中已經(jīng)除去BCL11A基因，故擴(kuò)增產(chǎn)物中的BCLUA蛋臼結(jié)合位點，不會抑制熒光蛋臼基因的表達(dá)；基因的表達(dá)需要RNA聚合酶與啟動子結(jié)合，才能完成熒光蛋臼基因的轉(zhuǎn)錄過程；含F(xiàn)1?F6與R擴(kuò)增產(chǎn)物的載體表達(dá)熒光蛋臼，受體細(xì)胞有熒光，含F(xiàn)7與R擴(kuò)增產(chǎn)物的受體細(xì)胞無熒光，則可能是F7與R擴(kuò)增產(chǎn)物不含完整的啟動子，熒光蛋臼基因不表達(dá)；（3）向培養(yǎng)液中添加適量的雌激素，此時重組載體上的BCL11A基因表達(dá)，產(chǎn)生BCL11A蛋臼，BCL11A蛋臼與BCL11A蛋臼結(jié)合位點結(jié)合后，導(dǎo)致熒光蛋臼基因被抑制；含F(xiàn)1~F4與R擴(kuò)增產(chǎn)物的受體細(xì)胞不再有熒光，則說明BCL11A蛋臼結(jié)合位點結(jié)合后在引物F4與引物R之間的序列上；含F(xiàn)5?F6與R擴(kuò)增產(chǎn)物的受體細(xì)胞仍有熒光，則說明BC