不同光強(qiáng)下生長(zhǎng)的垂盆草對(duì)ccl

不同光強(qiáng)下生長(zhǎng)的垂盆草對(duì)ccl

環(huán)境影響藥物的化學(xué)成分組成和含量，并影響藥物的藥理作用。隨著藥用植物人工栽培工作的推進(jìn)，大量研究探討了環(huán)境因子如光照、水分、養(yǎng)分等對(duì)藥用植物生長(zhǎng)、產(chǎn)量及化學(xué)成分的影響。有研究者氧化應(yīng)激是植物包括藥用植物在面對(duì)逆境的正常反應(yīng)之一，同時(shí)氧化脅迫是許多疾病發(fā)生的病理基礎(chǔ)，因此氧化脅迫和人類疾病之間的關(guān)系受到廣泛關(guān)注。多種次生物質(zhì)的產(chǎn)生和積累是藥用植物應(yīng)對(duì)逆境的反應(yīng)之一，研究表明可以通過(guò)對(duì)植物施加逆境脅迫以促進(jìn)具有抗氧化作用的化學(xué)成分的積累目前光照強(qiáng)度對(duì)藥用植物的影響主要集中于生長(zhǎng)、產(chǎn)量及化學(xué)成分的研究材料表面細(xì)胞培養(yǎng)—藥材與細(xì)胞研究材料來(lái)自南京農(nóng)業(yè)大學(xué)中藥材研究所，經(jīng)郭巧生教授鑒定為景天科景天屬植物垂盆草HepG2細(xì)胞購(gòu)自江蘇凱基生物技術(shù)股份有限公司，來(lái)源于ATCC細(xì)胞庫(kù)。試劑MEM培養(yǎng)基(美國(guó)GIBCO,11095-080);FBS(美國(guó)ExCellBiology,FSS500);CCl儀器96孔、24孔細(xì)胞培養(yǎng)板(美國(guó)CorningIncorporated);CO方法細(xì)胞培養(yǎng)HepG2細(xì)胞用含10%胎牛血清FBS的MEM培養(yǎng)基于37℃,5%CO處理組基于前期研究，參考楊金鳳等mtt法對(duì)細(xì)胞的存活率進(jìn)行檢測(cè)細(xì)胞經(jīng)消化、計(jì)數(shù)，配制成濃度為5×10細(xì)胞存活率=細(xì)胞凋亡和周期檢測(cè)分別將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HepG2細(xì)胞消化接種到6孔板中，次日待細(xì)胞貼壁后，根據(jù)組別設(shè)置加入相應(yīng)的含藥培養(yǎng)基，同時(shí)設(shè)立陰性對(duì)照組，藥物作用72h后，消化收集細(xì)胞，按照檢測(cè)試劑盒說(shuō)明檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況與細(xì)胞周期。alt,ast,sod,mda,gsh及gsh-px活性檢測(cè)將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HepG2細(xì)胞消化接種到細(xì)胞板中，根據(jù)分組設(shè)置分別加入對(duì)應(yīng)的含藥培養(yǎng)基，藥物作用72h后，收集細(xì)胞，吸取上清，按照試劑盒說(shuō)明分別測(cè)定ALT,AST,SOD,GSH-Px活性及MDA,GSH含量，評(píng)價(jià)HepG2細(xì)胞損傷程度。數(shù)據(jù)分析采用Excel2010和SPSS18.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)與分析，不同處理相同指標(biāo)進(jìn)行Duncan0.05多重比較。結(jié)果與分析各組胞存活率比較不同光強(qiáng)處理的垂盆草水提液對(duì)HepG2細(xì)胞存活率影響差異顯著，見(jiàn)圖1。垂盆草組除G2組外，HepG2細(xì)胞存活率顯著高于模型組(存活率為38.30%)。G2組存活率為39.28%,與模型組無(wú)顯著差異，但存活率比模型組高2.56%,同時(shí)顯著低于水飛薊賓組(存活率為62.93%)。G4組HepG2細(xì)胞存活率次之，與G3組無(wú)顯著差異；G1組HepG2細(xì)胞存活率最高，為63.93%,與陽(yáng)性對(duì)照水飛薊賓組無(wú)顯著差異。垂盆草細(xì)胞凋亡率模型構(gòu)建不同處理對(duì)HepG2細(xì)胞凋亡的影響見(jiàn)圖2。空白組細(xì)胞凋亡率(UR+LR)為6.63%,模型組為53.83%。5個(gè)垂盆草組HepG2細(xì)胞凋亡率均低于模型組；其中G1組凋亡率(15.78%)最低，低于水飛薊賓組(19.61%)。關(guān)于cclCCl不同光強(qiáng)梯度垂盆草水提液對(duì)hepg2細(xì)胞ast活性的影響不同光強(qiáng)處理的垂盆草水提液對(duì)HepG2細(xì)胞ALT活性影響差異顯著，見(jiàn)圖4。與空白組相比，模型組ALT活性顯著升高，比空白組增加了31.05%。與模型組相比，5個(gè)垂盆草組ALT活性顯著降低，隨光照強(qiáng)度降低呈升高趨勢(shì)。在5個(gè)光強(qiáng)梯度垂盆草水提液處理中，G1組活性最低，為38.70U·L不同光強(qiáng)處理的垂盆草水提液對(duì)HepG2細(xì)胞AST活性具有顯著影響。與空白組相比，模型組AST活力急劇升高，比空白組提高1.68倍。與模型組相比，垂盆草水提液作用于HepG2細(xì)胞后，AST活性顯著降低，隨光照強(qiáng)度降低，垂盆草組AST活性呈先升后降再升趨勢(shì)。其中，G1組最低，比模型組降低53.32%,比水飛薊賓組增加18.25%,并與水飛薊賓組無(wú)顯著差異。G5組AST活性最高，為10.04U·L水飛薊賓對(duì)gh-px活性的影響不同光強(qiáng)處理的垂盆草水提液對(duì)MDA,SOD,GSH和GSH-Px水平的影響見(jiàn)表1。與空白組相比，模型組MDA含量急劇上升，比空白組增加7.13倍；與模型組相比，垂盆草水提液預(yù)處理HepG2細(xì)胞后，HepG2細(xì)胞MDA含量顯著降低。在5個(gè)光強(qiáng)處理中，G4組MDA含量最高，與模型組差異不顯著，但比模型組減少3.08%;G2組與G3,G5組差異不顯著，與G1組有顯著差異；G1組含量最低，比模型組減少59.69%,與水飛薊賓組無(wú)顯著差異。與空白組相比，模型組SOD活性、GSH含量以及GSH-Px活性顯著降低。與模型組相比，垂盆草給藥組SOD活性、GSH-Px活性及GSH含量顯著增強(qiáng)。在5個(gè)光強(qiáng)處理中，上述3個(gè)指標(biāo)的最大值均出現(xiàn)在G1組，分別為0.31U·mg垂盆草抗氧化酶系統(tǒng)中hepg2細(xì)胞活性的關(guān)系將前期發(fā)表研究HepG2細(xì)胞存活率與鐵離子還原能力(FRAP法)呈顯著正相關(guān)，與HepG2細(xì)胞內(nèi)的SOD活性和GSH含量以及GSH-Px活性呈顯著或極顯著正相關(guān)。HepG2細(xì)胞ALT活性與異鼠李素含量呈顯著負(fù)相關(guān)。HepG2細(xì)胞MDA含量與垂盆草水提物的DPPH自由基清除能力、鐵離子還原能力(FRAP法)存在顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系。HepG2細(xì)胞SOD活性與AST活性呈顯著負(fù)相關(guān)，與鐵離子還原能力(FRAP法)、細(xì)胞內(nèi)GSH含量以及GSH-Px活性呈顯著或極顯著正相關(guān)。此外，垂盆草總酚及總黃酮與HepG2細(xì)胞存活率沒(méi)有顯著相關(guān)性。槲皮素含量與HepG2細(xì)胞內(nèi)的ALT,AST活性、MDA含量表現(xiàn)為負(fù)相關(guān)，但沒(méi)有達(dá)到顯著。對(duì)垂盆草保肝作用的影響肝損傷模型有多種，本實(shí)驗(yàn)采用經(jīng)典的CCl生長(zhǎng)環(huán)境光強(qiáng)顯著影響垂盆草藥材的保肝活性。G1處理的HepG2細(xì)胞存活率最高，與陽(yáng)性對(duì)照水飛薊賓組存活率相當(dāng)，細(xì)胞凋亡率及ALT,AST活性最低。說(shuō)明光強(qiáng)是影響垂盆草發(fā)揮保肝效果的重要環(huán)境因子，G1組處理保肝藥效最好。史紅專等潘金火等綜上所述，生長(zhǎng)環(huán)境中不同光強(qiáng)條件顯著影響垂盆草藥材的保肝功效。其中在100%全光強(qiáng)條件下生長(zhǎng)的垂盆草擁有最佳的保肝作用，其水提物保肝功效與水飛薊賓相當(dāng)。適度遮光(60%全光照)也具有較強(qiáng)保肝作用。從保肝功效角度考慮，垂盆草在全光照下種植為宜。