攜帶ndm-1陰溝腸桿菌的臨床檢測及其耐藥機(jī)制

攜帶ndm-1陰溝腸桿菌的臨床檢測及其耐藥機(jī)制

細(xì)菌也被稱為新修訂的金屬-1胺男性酶1（新修訂的金屬-1，bla-1）或ndt-1，簡稱nd-1。這也被稱為“超級細(xì)菌”。這種超細(xì)胞通常攻擊所有重癥感染的抗生素，包括碳青霉（colino）-內(nèi)酰胺類抗生素，具有很高的抗藥性，引起了世界范圍的關(guān)注。1一般數(shù)據(jù)和方法1.1排尿管及局部培養(yǎng)菌株來源及病例簡介:陳寶X,男,83歲,漢族,河北省保定市人,企業(yè)退休,糖尿病腎病、乙肝、肝硬化失代償期、2011年確診原發(fā)性肝癌晚期,在保定市某社區(qū)醫(yī)院住院8個(gè)月余,期間間斷性使用抗生素Ⅰ聯(lián)-Ⅲ聯(lián)不等,后因病情惡化(發(fā)熱、昏迷)轉(zhuǎn)入河北大學(xué)附屬醫(yī)院消化科住院?；颊咿D(zhuǎn)院過程中即帶有鎖骨靜脈插管和尿道插管,在轉(zhuǎn)院過程中導(dǎo)尿管脫落,因患者睪丸及尿道口過于腫大,入院后請泌尿外科醫(yī)師會(huì)診并行導(dǎo)尿管植入術(shù),同時(shí)留取尿液細(xì)菌培養(yǎng),連續(xù)3次均培養(yǎng)出包括亞胺培南、美羅培南耐藥的泛耐藥陰溝腸桿菌。入院21d終因年老、體弱、惡性腫瘤伴糖尿病腎病等疾病導(dǎo)致多器官衰竭病故。1.2細(xì)菌鑒定及pcr擴(kuò)增vitek生化鑒定條(法國生物梅里埃公司);美國BDPHOENIX-100全自動(dòng)細(xì)菌鑒定藥敏儀;PCR擴(kuò)增儀(美國BIO-RAD公司);PCR試劑(上海生物工程有限公司);高速冷凍離心機(jī)(美國Thermo公司);DNA提取試劑盒(北京天根生化科技有限公司)。1.3方法1.3.1藥物敏感測試采用WHO推薦的K-B紙片擴(kuò)散法1.3.2美羅培南膠片實(shí)驗(yàn)將0.5麥?zhǔn)蠁挝坏拇竽c埃希菌ATCC25922菌液1∶10稀釋后均勻涂布在MH平皿上,中間貼美羅培南紙片,將實(shí)驗(yàn)菌株以美羅培南紙片為起點(diǎn),沿離心方向劃線,35℃培養(yǎng)過夜,抑菌圈內(nèi)呈現(xiàn)出矢狀者為陽性。肺炎克雷伯菌ATCCBAA1705作為陽性對照,ATCCBAA1706作為陰性對照。1.3.3金屬酶檢測試驗(yàn)陰溝腸桿菌配成0.5麥?zhǔn)蠁挝坏木?均勻涂布于MH平板上,平板上分貼2片美羅培南(10μg)紙片,并在其中一片美羅培南紙片上滴加EDTA(0.5μmol)10μL,35℃孵育18h,觀察各紙片抑菌環(huán)大小,如果加酶抑制劑與不加酶抑制劑的抑菌環(huán)直徑相差大于5mm為金屬酶實(shí)驗(yàn)陽性。1.3.4內(nèi)酰胺酶基因及外膜蛋白基因的pcr檢測分別用blaIMP、blaVIM、blaNDM、blaKPC、blaCTX-M等β內(nèi)酰胺酶基因及外膜蛋白基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增(表1)。1.3.5序列與序列比比較PCR擴(kuò)增產(chǎn)物由上海生物工程公司純化后雙向測序,序列經(jīng)BLAST比對分析,以明確基因型。2結(jié)果2.1抗菌藥物檢測該株菌對所有檢測的β-內(nèi)酰胺類抗生素、加酶抑制劑類抗生素、四環(huán)素類、磺胺類及氯霉素類等多種抗生素均顯示耐藥,對氨基糖苷類抗生素中阿米卡星敏感,喹諾酮類抗生素中左旋氧氟沙星敏感。2.2碳綠霉酶篩選試驗(yàn)改良Hodge實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示陽性,金屬酶表型初篩試驗(yàn)檢測陽性。2.3ldwell染色結(jié)果NDM-1基因的核心序列PCR擴(kuò)增后,PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳分離,Goldview染色后用凝膠成像系統(tǒng)觀察結(jié)果,顯示核心序列為陽性,結(jié)果見圖1,與Genbank比對有99.99%的相似性。比對結(jié)果見圖2。blaIMP、blaVIM、blaKPC、blaCTX-M和OMPK36基因檢測均為陰性。3討論3.1攜帶nd-1菌株的感染國內(nèi)分布近年來,攜帶NDM-1的多重耐藥菌是倍受全球關(guān)注的公共衛(wèi)生問題之一。在中國也陸續(xù)出現(xiàn)攜帶NDM-1菌株的感染報(bào)道,這些菌株出現(xiàn)的地理位置分布涵蓋了中國的東、南和西部,地域分布的跨度比較大,并以腸桿菌科細(xì)菌為主,如肺炎克雷伯菌、大腸埃希菌、陰溝腸桿菌等3.2多重耐藥菌發(fā)生或感染時(shí),個(gè)體免疫功能的缺失,是造成多重耐藥菌感染發(fā)生的重要危險(xiǎn)因素之一回顧分析本感染病例不難得出,年老、體弱,惡性腫瘤,尤其惡腫治療削弱了人體免疫系統(tǒng),且各種導(dǎo)管的使用使得細(xì)菌進(jìn)入血液循環(huán)的機(jī)會(huì)大大增加,個(gè)體免疫功能的缺失,侵襲性導(dǎo)尿管的應(yīng)用和抗生素的不規(guī)范使用等都是誘發(fā)多重耐藥菌產(chǎn)生甚至感染發(fā)生的重要危險(xiǎn)因素,因此,對患者進(jìn)行相應(yīng)的操作時(shí),必須明確指征,及時(shí)拔管;同時(shí)必要的行政手段和專題講座,