實(shí)驗(yàn)四、Vc的含量測(cè)定(草酸)課件

實(shí)驗(yàn)五、維生素C的定量測(cè)定（2，6-二氯酚靛酚法)實(shí)驗(yàn)五、維生素C的定量測(cè)定（2，6-二氯酚靛酚法)1一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、學(xué)習(xí)維生素C2，6-二氯酚靛酚定量測(cè)定法的原理和方法。2、進(jìn)一步熟悉、掌握微量滴定法的基本操作技術(shù)。3、了解蔬菜、水果中維生素C含量情況。

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、學(xué)習(xí)維生素C2，6-二氯酚靛酚定量測(cè)定法的2二、原理維生素C是人類營(yíng)養(yǎng)中最重要的維生素之一，缺少它時(shí)會(huì)產(chǎn)生壞血病，因此又稱為抗壞血酸（ascorbicacid）。它對(duì)物質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)具有重要的作用。維生素C是具有L系糖型的不飽和多羥基物，屬于水溶性維生素。它分布很廣，植物的綠色部分及許多水果（如橘子、蘋(píng)果、草莓、山楂等）、蔬菜（黃瓜、洋白菜、西紅柿等）中的含量更為豐富。

二、原理維生素C是人類營(yíng)養(yǎng)中最重要的維生素之一，3抗壞血酸分子中存在烯醇式結(jié)構(gòu)——C=C——

OHOH

因而具有很強(qiáng)的還原性，氧化失去兩個(gè)氫原子而轉(zhuǎn)變成脫氫抗壞血酸。維生素C的結(jié)構(gòu)抗壞血酸分子中存在烯醇式結(jié)構(gòu)維生素C的結(jié)構(gòu)4實(shí)驗(yàn)四、Vc的含量測(cè)定(草酸)課件52，6—二氯酚靛酚鈉鹽（C12H6O2NCl2Na)染料2，6—二氯酚靛酚鈉鹽（C12H6O2NCl2Na)染料具有氧化性，可氧化抗壞血酸而其本身被還原為無(wú)色的衍生物，可作為維生素C含量測(cè)定的滴定劑和指示劑。在酸性環(huán)境中氧化型2，6-二氯酚靛酚呈紅色，在中性或堿性溶液中呈藍(lán)色。

2，6—二氯酚靛酚鈉鹽（C12H6O2NCl2Na)染料6用2，6—二氯酚靛酚滴定含有抗壞血酸的酸性溶液時(shí)，在抗血酸尚未完全被氧化時(shí)，滴下的2，6-二氯酚靛酚立即被還原為無(wú)色，當(dāng)抗壞血酸全被氧化時(shí)，則滴下的2，6-二氯酚靛酚溶液呈紅色。所以在滴定過(guò)程中當(dāng)溶液從無(wú)色轉(zhuǎn)變?yōu)槲⒓t色時(shí)，表示抗壞血酸全部被氧化，此時(shí)即為滴定的終點(diǎn)。根據(jù)滴定消耗染料標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，可以計(jì)算出被測(cè)定樣品中抗壞血酸（維生素C）的含量。用2，6—二氯酚靛酚滴定含有抗壞血酸的酸性溶7三、器材1、研缽2、移液管3、容量瓶4、錐形瓶5、微量滴定管（5ml）6、漏斗7、紗布8、濾紙9、分析天平三、器材1、研缽8附微量滴定管使用：附微量滴定管使用：9座式微量滴定管夾式微量滴定管座式微量滴定管夾式微量滴定管10微量滴定管的操作

1、檢查：用蒸餾水檢查滴定管的活塞是否漏水，活塞轉(zhuǎn)動(dòng)是否靈活。2、裝滴定劑：搖勻試劑溶液，用試劑潤(rùn)洗滴定管2-3次，約裝10-15ml左右。3、排氣泡：調(diào)節(jié)起始刻度（最好在整mL的刻度處，或調(diào)零，并記錄初始刻度數(shù)。4、滴定：勿頂活塞，防漏液，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)活塞，滴定時(shí)邊用手腕輕輕搖動(dòng)錐形瓶，近終點(diǎn)時(shí)要“半滴”操作——沖洗。微量滴定管的操作

1、檢查：用蒸餾水檢查滴定管的活塞是否漏水11V1讀數(shù)偏小V2正確讀數(shù)V3讀數(shù)偏大V1讀數(shù)偏小125、觀察顏色的變化和讀數(shù)。注意滴定管要垂直，視線與刻度平行，保留小數(shù)點(diǎn)后三位。6、滴定完畢，清洗干凈，涼干后在活塞處放一小紙片存放。5、觀察顏色的變化和讀數(shù)。注意滴定管要垂直，視線與刻度平行，13四、試劑和材料1、蘋(píng)果、Vc注射液

2、1％、2％草酸溶液3、2，6-二氯酚靛酚溶液100ml/組稱取0.21g碳酸氫鈉，0.26g2,6-二氯酚靛酚，溶于250ml蒸餾水中，稀釋到1000ml.過(guò)濾，裝入棕色瓶?jī)?nèi)，置冰箱內(nèi)備用，保存不超過(guò)3天。每次臨用前用新配制的標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸溶液標(biāo)定。已配好全班公用。四、試劑和材料1、蘋(píng)果、Vc注射液144、標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸溶液準(zhǔn)確稱取純抗壞血酸結(jié)晶100mg溶于1％草酸溶液定容到100ml。裝入棕色瓶中貯存冰箱內(nèi)。（已配好，全班公用）4、標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸溶液15五、操作五、操作161、維生素C提取液制備

待測(cè)樣品1：水洗干凈整株新鮮蔬菜或整個(gè)新鮮水果，用紗布或吸水紙吸干表面水分。然后稱取20g，加入20ml2％草酸，用研缽研磨，四層紗布過(guò)濾，反復(fù)抽提2-3次，（紗布可用少量2％草酸洗幾次）合并濾液，定容至50ml（濾液混濁可離心）備用。1、維生素C提取液制備172、標(biāo)定準(zhǔn)確量取1ml標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸溶液加入9ml1％草酸溶液于100ml錐形瓶。然后用2，6-二氯酚靛酚溶液滴定，以生成為微紅色持續(xù)15秒不退色為終點(diǎn)。計(jì)算2，6-二氯酚靛酚溶液的濃度，以每ml2，6-二氯酚靛酚溶液相當(dāng)于抗壞血酸的mg數(shù)來(lái)表示。（取10ml1％草酸液做空白對(duì)照，按以上方法滴定）2、標(biāo)定183、滴定量取10ml樣品1提取液于錐形瓶中。用微量滴定管，以2，6-二氯酚靛酚溶液滴定樣品提取液，呈微弱的玫瑰色，持續(xù)5秒鐘不退色為終點(diǎn)，記錄所用2，6-二氯酚靛酚的ml數(shù)。注意整個(gè)滴定過(guò)程不要超過(guò)2分鐘。另取10ml1％草酸做空白對(duì)照滴定。樣品及空白同時(shí)各做二份。3、滴定19注意事項(xiàng)(1)某些水果、蔬菜（如橘子、西紅柿等）漿狀物泡沫太多，可加數(shù)滴丁醇或辛醇。(2)整個(gè)操作過(guò)程要迅速，防止還原型抗壞血酸被氧化。滴定過(guò)程一般不超過(guò)2min。滴定所用的染料不應(yīng)小于1ml或多于4ml，如果樣品含維生素C太高或太低時(shí)，可酌情增減樣液用量或改變提取液稀釋度。注意事項(xiàng)(1)某些水果、蔬菜（如橘子、西紅柿等）漿狀物泡沫20(3)本實(shí)驗(yàn)必須在酸性條件下進(jìn)行。在此條件下，干擾物反應(yīng)進(jìn)行得很慢。(4)干擾滴定因素有：

色素：若提取液中色素很多時(shí)，滴定不易看出顏色變化，可用白陶土脫色，。

還原劑：樣品中可能有其它雜質(zhì)還原二氯酚靛酚，但反應(yīng)速度均較抗壞血酸慢，因而滴定開(kāi)始時(shí)，染料要迅速加入，而后盡可能一點(diǎn)一點(diǎn)地加入，并要不斷地?fù)u動(dòng)三角瓶直至呈粉紅色，于15s內(nèi)不消退為終點(diǎn)。(5)提取的漿狀物如不易過(guò)濾，亦可離心，留取上清液進(jìn)行滴定。(3)本實(shí)驗(yàn)必須在酸性條件下進(jìn)行。在此條件下，干擾物反應(yīng)進(jìn)21實(shí)驗(yàn)四、Vc的含量測(cè)定(草酸)課件22實(shí)驗(yàn)四、Vc的含量測(cè)定(草酸)課件23實(shí)驗(yàn)四、Vc的含量測(cè)定(草酸)課件24六、結(jié)果計(jì)算（VA-VB）*S維生素Cmg數(shù)/100g樣品=——————*100

VA為滴定樣品提取液所用的2，6-二氯酚靛酚溶液的mL數(shù)VB為滴定空白對(duì)照所用的2，6-二氯酚靛酚溶液的mL數(shù)S為1mL染料能氧化抗壞血酸mg數(shù)W為待測(cè)樣品的重量。