GMP培訓(xùn)-微生物控制與潔凈室衛(wèi)生知識(shí)課件

GMP培訓(xùn)

微生物的控制及潔凈室衛(wèi)生知識(shí)

嘉和生物QC李莊2012.12.06GMP培訓(xùn)

微生物的控制及潔凈室衛(wèi)生知識(shí)

嘉和生物QC李微生物基礎(chǔ)知識(shí)潔凈室分級(jí)無菌制劑的微生物控制微生物基礎(chǔ)知識(shí)潔凈室分級(jí)無菌制劑的微生物控制微生物基礎(chǔ)知識(shí)微生物定義特點(diǎn)形態(tài)營養(yǎng)需求影響因子微生物微生物定義特點(diǎn)形態(tài)營養(yǎng)影響

一類形體微小,結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單,用肉眼難以看到,必須借助光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才能看清的低等微小生物的統(tǒng)稱

。微生物定義原核細(xì)菌放線菌支原體衣原體藍(lán)細(xì)菌真菌酵母菌霉菌非細(xì)胞類病毒類病毒

微生物定義原核細(xì)菌放線菌支原體衣原體藍(lán)細(xì)菌真菌酵母菌霉菌非微生物特點(diǎn)種類多、分布廣個(gè)體小、面積大吸收多、轉(zhuǎn)化快適應(yīng)強(qiáng)、異變異微生物特點(diǎn)種類多、分布廣個(gè)體小、面積大吸收多、轉(zhuǎn)化快適應(yīng)強(qiáng)、電鏡圖菌落圖形態(tài)電鏡圖菌落圖形態(tài)

芽孢桿菌（細(xì)菌）芽孢桿菌

金黃色葡萄球菌（細(xì)菌）金黃色葡萄球菌大腸桿菌（細(xì)菌）大腸桿菌細(xì)菌的菌落

單個(gè)或少數(shù)細(xì)菌細(xì)胞生長繁殖后，會(huì)形成以母細(xì)胞為中心的一堆肉眼可見、有一定形態(tài)構(gòu)造的子細(xì)胞集團(tuán)，這就是菌落。細(xì)菌的菌落特征因種而異。可作為鑒定細(xì)菌種的依據(jù)。

細(xì)菌的菌落單個(gè)或少數(shù)細(xì)菌細(xì)胞生長繁殖后，會(huì)形成以母細(xì)胞

粘質(zhì)沙雷氏菌的菌落特征

沙門氏菌的菌落特征

銅綠假單孢菌的菌落特征

弗氏志賀氏菌的菌落特征

粘質(zhì)沙雷氏菌的菌落特征

粘質(zhì)沙雷氏菌的菌落特征沙門氏菌的菌落特征銅綠假單霉菌絲狀真菌的俗稱，它們往往能形成分枝繁茂的菌絲體，但又不象蘑菇那樣產(chǎn)生大型的子實(shí)體。霉菌曲霉的菌落

曲霉的菌落病原真菌的菌落

青霉的菌落病原真菌的菌落青霉的菌落酵母菌的菌落

大多數(shù)酵母菌的菌落特征與細(xì)菌相似，但比細(xì)菌菌落大而厚，菌落表面光滑、濕潤、粘稠，容易挑起，菌落質(zhì)地均勻，正反面和邊緣、中央部位的顏色都很均一，菌落多為乳白色，少數(shù)為紅色，個(gè)別為黑色。酵母菌的菌落

大多數(shù)酵母菌的菌落特征與細(xì)菌相似，但比細(xì)菌

各種酵母菌的菌落

啤酒酵母的菌落

紅酵母的菌落

各種酵母菌的菌落啤酒酵母的菌落紅酵母的菌落營養(yǎng)需求水分水占細(xì)胞漿的70%～90%，是細(xì)胞的重要組成成分。碳源碳源是構(gòu)成細(xì)胞的重要物質(zhì)。氮源氮是組成蛋白質(zhì)和核酸的重要元素。無機(jī)鹽磷、硫、鎂、鐵、鉀、鈉、鈣、氯、錳、鋅、鈷、銅等。生長因子微生物生長發(fā)育所必需，而其自身不能合成的一類營養(yǎng)物質(zhì)。包括維生素、嘌呤和嘧啶。營養(yǎng)需求水分水占細(xì)胞漿的70%～90%，是細(xì)胞的重要組成成分微生物生長的影響因素營養(yǎng)物pH溫度氧氣滲透壓微生物生長的影響因素營養(yǎng)物pH溫度氧氣滲透壓新版GMP介紹中國GMP和WHO一致WHOGMP的主要內(nèi)容來源于EU附錄1中國GMP與EU、WHO接近。新版GMP介紹中國GMP和WHO一致

潔凈度級(jí)別浮游菌cfu/m3 沉降菌（90mm）cfu/4小時(shí)表面微生物

接觸（55mm）cfu/碟5指手套cfu/手套A級(jí)<1<1<1<1B級(jí)10555C級(jí)1005025_D級(jí)20010050_潔凈區(qū)微生物監(jiān)測(cè)的動(dòng)態(tài)標(biāo)準(zhǔn)（GMP2011版）

潔凈度級(jí)別浮游菌沉降菌（90mm）cfu/4小時(shí)表面微微生物監(jiān)測(cè)新GMP的觀點(diǎn)1、對(duì)A級(jí)區(qū)而言，發(fā)現(xiàn)的每個(gè)微生物污染都必須徹底調(diào)查并考察其對(duì)放行批得影響。2、沉降菌放置時(shí)間不得少于4小時(shí)，除非整個(gè)工藝操作時(shí)間少于4小時(shí)。3、無菌藥品應(yīng)根據(jù)所用滅菌方法的效果確定滅菌前產(chǎn)品微生物污染水平的監(jiān)控標(biāo)準(zhǔn)，并定期監(jiān)控。必要時(shí)，還應(yīng)監(jiān)控?zé)嵩蚣?xì)菌內(nèi)毒素。（第五十八條）

微生物監(jiān)測(cè)新GMP的觀點(diǎn)1、對(duì)A級(jí)區(qū)而言，發(fā)現(xiàn)的每個(gè)微生物污無菌制劑的微生物控制微生物控制概念污染來源與控制消毒與滅菌良好行為無菌制劑的微生物控制微生物控制概念污染消毒與滅菌良好行為概念無菌不存在活的生物（GMP指南）。FDA、歐洲制藥工業(yè)界將百萬分之一（10-6）微生物污染率作為滅菌產(chǎn)品“無菌”的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)。滅菌用物理或化學(xué)方法殺滅傳播媒介上所有的微生物，使其達(dá)到無菌（包括繁殖體和芽孢）。消毒用物理或化學(xué)方法殺滅或清除傳播媒介上的病原微生物，使其達(dá)到無害化。通常是指殺死病原微生物的繁殖體，但不能破壞其芽孢。消毒是不徹底的，不能代替滅菌。概念無菌不存在活的生物（GMP指南）。FDA、歐洲制藥工業(yè)界污染的來源與控制空氣水人物料設(shè)備藥品質(zhì)量的形成是設(shè)計(jì)和生產(chǎn)出來的，而不是檢驗(yàn)出來的。因此，加強(qiáng)生產(chǎn)工藝過程中的預(yù)防污染與差錯(cuò)，就成了藥品GMP重要的環(huán)節(jié)。污染的來源與控制空氣水人物料設(shè)備藥品質(zhì)量的形成是設(shè)計(jì)和生產(chǎn)出藥品中微生物污染的特殊性能繁殖的活細(xì)胞生物。數(shù)量少而分布不均勻。多數(shù)處于受損傷狀態(tài)。無繁殖能力或死亡的微生物。藥品中微生物污染的特殊性污染的來源與控制:空氣、壓縮空氣微生物類型來源影響因素監(jiān)測(cè)方法措施與手段產(chǎn)芽孢的細(xì)菌：桿菌屬、梭菌屬不產(chǎn)芽孢的細(xì)菌：葡萄球菌屬、鏈球菌屬霉菌：青霉屬、曲霉酵母菌：紅酵母菌屬塵埃人的皮膚人的體液衣服水滴附著的微粒大小空氣的濕度決定的沉降系數(shù)浮游菌監(jiān)測(cè)沉降菌監(jiān)測(cè)過濾層流技術(shù)化學(xué)消毒紫外線（UV)污染的來源與控制:空氣、壓縮空氣微生物來源影響因素監(jiān)測(cè)方法措污染的來源與控制:水微生物類型來源影響因素監(jiān)測(cè)方法措施與手段革蘭陰性菌（98％）微球菌屬酵母菌真菌放線菌原水軟化水去離子水蒸餾水反滲透水分配系統(tǒng)原水質(zhì)量水的處理與分配膜過濾法計(jì)數(shù)化學(xué)法過濾法光處理法污染的來源與控制:水微生物來源影響因素監(jiān)測(cè)方法措施與手段革蘭污染的來源與控制:人的皮膚和呼吸道微生物類型來源影響因素監(jiān)測(cè)方法措施與手段金黃色葡萄球菌八疊球菌類白喉菌不動(dòng)桿菌產(chǎn)堿菌親脂的酵母菌真菌類的表皮癬菌、小芽孢癬菌、發(fā)癬菌浮生細(xì)菌（耳道）皮膚衣著化妝品首飾分泌物不良操作習(xí)慣接觸藥物的機(jī)率衛(wèi)生操作習(xí)慣培訓(xùn)接觸皿法個(gè)人衛(wèi)生措施（洗滌、更衣、消毒）潔凈服無菌手套護(hù)目鏡污染的來源與控制:人的皮膚和呼吸道微生物來源影響因素監(jiān)測(cè)方法污染的來源與控制:物料微生物類型來源影響因素監(jiān)測(cè)方法措施與手段動(dòng)物源性致病菌如：大腸桿菌、沙門菌植物源性致病菌如：歐文菌、假單胞菌、乳酸菌、芽孢桿菌、鏈球菌、黑霉菌、鏈格菌、鐮刀霉菌、無菌絲酵母菌等未經(jīng)處理的物料物料操作中的污染，如取樣、操作等物料處理的效率儲(chǔ)存條件物料未保護(hù)，導(dǎo)致污染微生物限度熱處理過濾輻射環(huán)氧乙烷衛(wèi)生操作污染的來源與控制:物料微生物來源影響因素監(jiān)測(cè)方法措施與手段動(dòng)污染的來源與控制:建筑、設(shè)備微生物類型來源影響因素監(jiān)測(cè)方法措施與手段霉菌：分枝孢子霉菌、曲霉菌墻壁天花板地板排水門窗設(shè)備管道材料選型施工維護(hù)潔凈設(shè)計(jì)接觸皿法清潔驗(yàn)證衛(wèi)生設(shè)計(jì)衛(wèi)生材料清潔（SOP、清潔劑、消毒劑）滅菌清洗室設(shè)計(jì)清潔工具污染的來源與控制:建筑、設(shè)備微生物來源影響因素監(jiān)測(cè)方法措施與消毒與滅菌常用消毒劑作用機(jī)理影響效力因素滅菌方法消毒與滅菌常用消毒劑作用機(jī)理影響效力因素滅菌方法常用消毒劑

消毒劑和抗菌劑：酒精（65～75％，w/w）、異丙醇、新潔爾滅（0.1%）、過氧化氫（3％）、碘伏（0.05％）、酚類（酸性、堿性）等滅菌劑（殺孢子劑）：甲醛、戊二醛、過氧化氫、過氧乙酸、次氯酸鈉（3~5％）等常用消毒劑消毒劑和抗菌劑：酒精（65～75％，w/w）、異消毒劑作用機(jī)理鈍化胞內(nèi)酶活性，影響細(xì)胞的正常代謝酚類阻斷物質(zhì)運(yùn)輸通道季銨鹽類（＋電荷），附著于細(xì)胞膜特定部分（－電荷）破壞微生物細(xì)胞（膜）的結(jié)構(gòu)和功能醛類、含氯、過氧化物消毒劑作用機(jī)理鈍化胞內(nèi)酶活性，影響細(xì)胞的正常代謝影響消毒劑效力的因素溫度濃度pH材質(zhì)溶劑作用時(shí)間影響消毒劑效力的因素溫度濃度pH材質(zhì)溶劑作用時(shí)間消毒劑的SOP使用頻率交替使用接觸時(shí)間適當(dāng)稀釋清潔方法使用期限無菌狀態(tài)消毒劑的SOP使用頻率輪換兩種殺菌劑依次使用，定期輪換，如需要可添加滅菌劑輪換未清洗水清洗皂液清洗消毒劑清洗不同方式清洗的效果未清洗水清洗皂液清洗消毒劑清洗不同方式清洗的效果干熱滅菌常見的有火焰、燒灼、干烤和紅外線滅菌等?；鹧妗疲和ǔＳ糜趯?shí)驗(yàn)室無菌操作中金屬或其它耐火材料制成的器具的滅菌。干烤和紅外線：利用干熱空氣或熱輻射進(jìn)行滅菌。一般135~145℃需3~5h，160~170℃需2h以上，170~180℃需1h以上，180~200℃需0.5~1h。除熱原，則需250℃30min，或200℃45min，180℃2h。空氣傳熱慢，穿透力不強(qiáng)，故干熱滅菌時(shí)間長。干熱滅菌時(shí)烤箱內(nèi)裝入物品應(yīng)留有空隙，以利空氣流動(dòng)，否則使箱內(nèi)溫度不均，部分物品滅菌不徹底。干熱滅菌常見的有火焰、燒灼、干烤和紅外線滅菌等。高壓蒸汽滅菌（熱壓滅菌）通過加壓提高蒸汽溫度，滅菌效果最好。它簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)、可靠、無毒，是最可靠、應(yīng)用最廣泛的滅菌法。此法適用于耐高溫和潮濕的物品。

常用條件為：115.5℃、30min；121.1℃、20min；126.5℃、15min。高壓蒸汽滅菌（熱壓滅菌）通過加壓提高蒸汽溫度，滅菌效潔凈室良好的行為人員要求人員自我約束常見缺陷行為的對(duì)比潔凈室良好的行為人員要求人員自我約束常見缺陷行為的對(duì)比人員要求健康，有下列情況之一者應(yīng)及時(shí)報(bào)告發(fā)燒鼻炎咳嗽傳染病創(chuàng)傷嚴(yán)格按照SOP操作人員要求健康，有下列情況之一者應(yīng)及時(shí)報(bào)告人員在潔凈室（區(qū)）內(nèi)的自我約束

嚴(yán)格遵守潔凈室（區(qū)）的規(guī)則。潔凈區(qū)工作的操作人員自我約束：操作動(dòng)作的幅度及工作服的質(zhì)量、式樣、穿戴等對(duì)微粒的含量有明顯的影響。出入次數(shù)應(yīng)盡可能地少，操作減小動(dòng)作幅度，避免不必要的走動(dòng)和移動(dòng)，以保持潔凈室（區(qū)）的氣流、風(fēng)量和風(fēng)壓。無菌區(qū)的操作人員自我約束：操作人員正戴著無菌手套，就不要破壞它的無菌狀態(tài)。開門的話，用肘而不是使用抓門把手的方法；不要碰口罩或帽子；不要直接用手拾地上的東西；開始工作前和碰了未消毒的東西后均要以消毒劑擦洗。此外，每次休息或手套碰破或臟污時(shí)要更換手套?？谡衷谛菹r(shí)或間隔一定時(shí)間就要更換一次。人員在潔凈室（區(qū)）內(nèi)的自我約束嚴(yán)格遵守潔凈室（區(qū)）的規(guī)則。常見缺陷無菌工作服穿著不規(guī)范未對(duì)無菌更衣進(jìn)行監(jiān)控?zé)o菌操作不規(guī)范常見缺陷無菌工作服穿著不規(guī)范穿著要領(lǐng)盡可能不要直接接觸無菌服的外表面穿著要領(lǐng)行為的對(duì)比潔凈區(qū)更衣無菌工作服的穿著無菌工作服的微生物控制無菌操作行為的對(duì)比潔凈區(qū)更衣潔凈區(qū)更衣YESNONO頭發(fā)應(yīng)完全包在帽子內(nèi)潔凈區(qū)更衣YESNONO頭發(fā)應(yīng)完全包在帽子內(nèi)潔凈區(qū)更衣YESNO工作服的紐扣應(yīng)完全扣上潔凈區(qū)更衣YESNO工作服的紐扣應(yīng)完全扣上潔凈區(qū)更衣YESNO鞋套不能有破損潔凈區(qū)更衣YESNO鞋套不能有破損潔凈區(qū)更衣不能配戴手表、首飾YESNO潔凈區(qū)更衣不能配戴手表、首飾YESNO無菌工作服的穿著NOYES面罩不得敞開無菌工作服的穿著NOYES面罩不得敞開無菌工作服的穿著手套尺寸不對(duì)戴法不正確無菌工作服的穿著手套尺寸不對(duì)戴法不正確無菌工作服的穿著手套破損無菌工作服的穿著手套破損無菌工作服的穿著鞋套穿戴不正確YESNO無菌工作服的穿著鞋套穿戴不正確YESNO無菌工作服的微生物控制污染產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)大處需取樣衣服袖管取樣示意衣服胸部取樣示意背部不需要取樣無菌工作服的微生物控制污染產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)大處需取樣衣服胸部取樣示意無菌工作服的微生物控制手指接觸碟試驗(yàn)無菌工作服的微生物控制手指接觸碟試驗(yàn)無菌操作NOYES不要在更衣室交談無菌操作NOYES不要在更衣室交談無菌操作NOYESYES不操作時(shí)，應(yīng)將前臂和雙手放