(SOP-QC-007-01)-Bradford法檢測蛋白質(zhì)含量標(biāo)準操作規(guī)程

標(biāo)準操作規(guī)程StandardOperationProcedure吉林大學(xué)研發(fā)中心Bradford法測蛋白質(zhì)含量標(biāo)準操作規(guī)程編號SOP-QC-007-01Bradford法檢測蛋白質(zhì)含量1.試劑與水：所有試劑為分析純（AR）；水為蒸餾水或超純水。2.器皿與耗品：所有玻璃器皿為清潔級，37度烤干。tube、tip：—次性使用，容量瓶，96孔酶標(biāo)板，3.儀器設(shè)備：酶標(biāo)儀：旋渦混勻器。4.溶液的配置：G250儲存液：95%無水乙醇：100ml88%磷酸：200ml考馬斯量蘭G250：350mg室溫下可長期保存，穩(wěn)定。G250工作液：雙蒸水：425ml95%無水乙醇：15ml88%磷酸：30mlG250儲存液：30ml可根據(jù)體積相應(yīng)縮小比例配制，用1號濾紙過濾并保存于室溫棕色瓶中，可使用數(shù)周。6.3牛血清白蛋白標(biāo)準品BSA（實驗室購買）.配制標(biāo)準品標(biāo)準程序：將牛血清白蛋白配制成lmg/m1,取牛血清白蛋白lOOmg，先用超純水溶解，待其溶解后定容到一個潔凈的100ml容量瓶中，300ul分裝，保存于-20度，使用時，將其稀釋至200ug/ml,配制標(biāo)準品備用。標(biāo)準品的鑒定用原有的標(biāo)準品做標(biāo)準曲線，隨機取三支本分裝品為樣品，測定樣品蛋白含量，得X土SD（其中X單位為ug/ml）與RSD,當(dāng)X值為98-102，且RSD值小于等于2%者，認為該標(biāo)準品的標(biāo)示濃度為200ug/ml。l標(biāo)準操作規(guī)程StandardOperationProcedure吉林大學(xué)研發(fā)中心Bradford法測蛋白質(zhì)含量標(biāo)準操作規(guī)程編號SOP-QC-007-015.程序：5.1.樣品的處理一次檢測過程包括標(biāo)準不能超過20個樣品。若是原液或成品,每個樣品需做2個或3個稀釋度：V廠V原（dT）其中V水為需要加入純化水的體積，V原為稀釋前樣品的體積，d為稀釋度水原待測樣品如為凍干品，則根據(jù)標(biāo)示量稀釋至lmg/m1,再稀釋10倍；待測樣品如為未知濃度的樣品，可以根據(jù)bradford標(biāo)準品顏色目測后稀釋樣品。待測樣品均需溶解后先離心，再進行稀釋和檢測操作。稀釋后的樣品需做同樣的三個反應(yīng)體系。標(biāo)準曲線的制備（見9.5工作標(biāo)準品的配制）管號123456配制工作標(biāo)準品濃度（ug/ml）20016012080400200ug/m1標(biāo)準品加入量（ul）20016012080400ddH2O加入量（ul）040801201602005.3.測定步驟（操作溫度不能高于室溫，每2個加樣時間間隔均勻，為15秒）步驟內(nèi)容標(biāo)記管號123456N工作標(biāo)準品濃度（ug/ml）20016012080400一加入工作標(biāo)準品10ul加入稀釋后樣品（ul）10ul一加入G250工作液125ul混勻，室溫靜置2-3分鐘5.4.使用酶標(biāo)板測OD值每管樣品（包括標(biāo)準品）取lOul加在酶標(biāo)板上，然后沒孔加入125U1G250工作液，做三復(fù)孔，使用酶標(biāo)儀檢測578nm比色波長（單波長），并計算得出蛋白濃度數(shù)值。酶標(biāo)準操作規(guī)程StandardOperationProcedure吉林大學(xué)研發(fā)中心Bradford法測蛋白質(zhì)含量標(biāo)準操作規(guī)程編號SOP-QC-007-01標(biāo)儀的使用及設(shè)置參見《酶標(biāo)儀使用標(biāo)準操作規(guī)程》剩余樣品處理若為發(fā)酵樣品或蛋白樣品，稀釋后的樣品應(yīng)保存于4°冰箱一天反應(yīng)后的樣品測完后可以直接丟棄。結(jié)果計算與分析：7.1.結(jié)果判定標(biāo)準標(biāo)準曲線的相關(guān)系數(shù)均r值（詐0.99）；若是rV0.99的話，實驗需要重新做；同一樣品，同一稀釋度，若是三個不同的反應(yīng)體系得出結(jié)果RSDN10的話，也需要重新檢測。若是樣品分不同稀釋度得出的結(jié)果RSDN10的話，也需要重新檢測。數(shù)據(jù)的取舍標(biāo)準。選擇所測蛋白濃