培養(yǎng)基制備技術(shù)

培養(yǎng)基制備技術(shù)第1頁(yè)，課件共19頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月教學(xué)對(duì)象：高等醫(yī)學(xué)院校衛(wèi)生檢驗(yàn)專業(yè)學(xué)生實(shí)驗(yàn)課時(shí)：4學(xué)時(shí)課程類型：專業(yè)實(shí)驗(yàn)課課程要求：必修每組人數(shù)：2人第2頁(yè)，課件共19頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵笳莆粘Ｓ门囵B(yǎng)基制備的基本過(guò)程。熟悉常用培養(yǎng)基的種類及用途。熟悉高壓蒸汽滅菌的使用。第3頁(yè)，課件共19頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月實(shí)驗(yàn)內(nèi)容常用培養(yǎng)基（液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基及固體培養(yǎng)基）制備。高壓蒸汽滅菌器使用。第4頁(yè)，課件共19頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一、培養(yǎng)基的種類（按用途分類）基礎(chǔ)培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基增菌培養(yǎng)基厭氧培養(yǎng)基第5頁(yè)，課件共19頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月培養(yǎng)基的種類（按物理性狀分類）液體培養(yǎng)基：不含凝固劑，用于增菌和接種純種細(xì)菌。半固體培養(yǎng)基：含0.3％～0.5％瓊脂。用于觀察細(xì)菌動(dòng)力、保存菌種。固體培養(yǎng)基：平板、斜面。含2％～2.5％瓊脂。平板：用于細(xì)菌的分離培養(yǎng)。斜面：用于純培養(yǎng)、保存菌種。第6頁(yè)，課件共19頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、培養(yǎng)基制備的一般程序調(diào)配溶化矯正pH過(guò)濾澄清分裝滅菌檢定保存第7頁(yè)，課件共19頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、培養(yǎng)基制備的一般程序調(diào)配：按照培養(yǎng)基配方正確稱取各種原料放于搪瓷杯中。另用量筒量取所需蒸餾水量。溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒攪勻，加熱溶解。加瓊脂溶化：加熱過(guò)程中要不斷攪拌，可適當(dāng)補(bǔ)水。調(diào)pH值：用1NNaOH或1NHCl調(diào)至培養(yǎng)基規(guī)定的pH值，用pH試紙對(duì)照。第8頁(yè)，課件共19頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、培養(yǎng)基制備的一般程序分裝加塞：注意不要污染棉塞。塞好棉塞的試管和錐形瓶應(yīng)蓋上厚紙用繩捆札，準(zhǔn)備滅菌。滅菌：不同培養(yǎng)基采取不同滅菌方法。檢定：培養(yǎng)基滅菌后必須在37℃下恒溫培養(yǎng)24h，確定無(wú)菌生長(zhǎng)，方可使用。保存：一般至4℃保存?zhèn)溆?。?頁(yè)，課件共19頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月分裝量的要求液體培養(yǎng)基分裝量約為試管高度的1/4～1/3，加塞后滅菌直立；半固體培養(yǎng)基分裝量為試管高度的1/4～1/3，加塞后滅菌趁熱直立凝固；斜面培養(yǎng)基分裝量約為試管高度的1/4～1/3，加塞后滅菌，趁熱擺成斜面；第10頁(yè)，課件共19頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月滅菌后斜面擺放斜面長(zhǎng)度約為試管長(zhǎng)度的2/3，且下端有1cm柱高；第11頁(yè)，課件共19頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月分裝量的要求瓊脂平板：先將滅菌瓊脂融化后冷卻至50℃左右，以無(wú)菌操作傾注于滅菌平皿內(nèi)，水平旋轉(zhuǎn)平皿，待瓊脂凝固后將平皿翻轉(zhuǎn)，置4℃保存?zhèn)溆?。?2頁(yè)，課件共19頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月分裝包扎第13頁(yè)，課件共19頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月培養(yǎng)基滅菌耐熱培養(yǎng)基（如普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板）：常用高壓蒸汽滅菌，條件為103.43kPa，15-20min；含糖培養(yǎng)基以68.95kPa，10-15min；不耐熱培養(yǎng)基：如糖類、明膠和牛乳等。常用間歇蒸汽滅菌；富含蛋白質(zhì)的培養(yǎng)基：用血清凝固器滅菌；對(duì)含高營(yíng)養(yǎng)不耐熱培養(yǎng)基：如血清,細(xì)胞培養(yǎng)液等。用濾過(guò)除菌。

第14頁(yè)，課件共19頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第15頁(yè)，課件共19頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月三、高壓蒸汽滅菌器的使用滅菌器內(nèi)加入適量的水，將包扎好的擬滅菌物品放入其中。蓋好蓋子，接通電源，進(jìn)行加熱。排除高壓鍋內(nèi)的冷空氣：可將排氣閥打開(kāi)，待排出大氣后關(guān)閉排氣閥；或關(guān)閉排氣閥，待壓力上升到0.5kg/cm2時(shí)再打開(kāi)排氣閥，待壓力回復(fù)到0時(shí)再關(guān)閉排氣閥。第16頁(yè)，課件共19頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月三、高壓蒸汽滅菌器的使用當(dāng)壓力達(dá)1.05kg/cm2時(shí)，此時(shí)滅菌器內(nèi)的溫度為121℃，維持30min。對(duì)熱不穩(wěn)定的培養(yǎng)基如含有葡萄糖、氨基酸等物時(shí)，應(yīng)適當(dāng)降低壓力，延長(zhǎng)時(shí)間。滅菌時(shí)間一到，切斷電源，待壓力降至零時(shí)，才能打開(kāi)排氣閥，然后打開(kāi)滅菌器蓋，取出物品。第17頁(yè)，課件共19頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月高壓蒸汽滅菌器使用注意事項(xiàng)無(wú)菌包不宜過(guò)大，不宜過(guò)緊，各包裹間要有間隙，使蒸汽能對(duì)流易滲透到包裹中央。消毒前，打開(kāi)貯槽或盒的通氣孔，有利于蒸汽流通。而且排氣時(shí)使蒸汽能迅速排出，以保持物品干燥。消毒滅菌完畢，關(guān)閉貯槽或盒的通氣孔，以保持物品的無(wú)菌狀態(tài)。第18頁(yè)，課件共19頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月高壓蒸汽滅菌器使用注意事項(xiàng)布類物品應(yīng)放