微生物學(xué)檢驗(第3版)臨床微生物標(biāo)本的檢驗

檢驗學(xué)院湯麗霞第十八章臨床常見標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗1臨床病原體檢查目的13掌握臨床標(biāo)本檢驗細(xì)菌學(xué)檢驗程序4密切監(jiān)視烈性傳染病與新的傳染病的發(fā)生，及時向行政主管部門報告。5配合相關(guān)機(jī)構(gòu)進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查。

明確感染是否發(fā)生以及病原體的類型。2掌握臨床標(biāo)本采集原則及送檢的意義2感染性疾病的現(xiàn)狀感染性疾病的病原體：細(xì)菌、病毒、支原體、衣原體、立克次體以及寄生蟲等。自從抗生素的發(fā)現(xiàn)和預(yù)防接種的實施，許多曾嚴(yán)重危害人體健康的病原體已消滅或基本消滅。新的傳染病陸續(xù)被發(fā)現(xiàn)，曾絕跡的老傳染病部分死灰復(fù)燃。條件致病菌感染比例增加。多重耐藥菌株不斷出現(xiàn)，真菌感染的幾率逐年增高。

3臨床病原體檢查的基本程序醫(yī)生、護(hù)士、病人、檢驗師：正確采集運(yùn)送標(biāo)本。檢驗科：直接鏡檢、免疫學(xué)和分子生物檢測、病原體分離培養(yǎng)鑒定、藥敏實驗——報告結(jié)果。醫(yī)生：明確診斷、合理用藥。

4臨床標(biāo)本的采集、送檢與處理原則5臨床感染性疾病的診斷和治療應(yīng)用良好的檢測技術(shù)和方法，提供準(zhǔn)確的結(jié)果或報告正確規(guī)范的采集和運(yùn)送標(biāo)本正確地選擇檢查目的和方法6

遵照醫(yī)囑充分準(zhǔn)備

嚴(yán)格查對

正確采集

及時送檢標(biāo)本采集的原則71、細(xì)菌學(xué)檢驗單醫(yī)生填寫檢驗申請單檢驗單應(yīng)標(biāo)明姓名、性別、住院號、床號、標(biāo)本種類、檢驗?zāi)康暮退蜋z日期等。8評估(充分準(zhǔn)備、嚴(yán)格查對)Ⅰ采集標(biāo)本前應(yīng)先評估患者的病情、心理反應(yīng)與合作程度。Ⅱ根據(jù)檢驗?zāi)康倪x擇相應(yīng)的標(biāo)本容器Ⅲ在容器外貼上檢驗單的副聯(lián)92、標(biāo)本容器103、采集時間和部位

為保證標(biāo)本的質(zhì)量，獲得陽性結(jié)果，應(yīng)掌握正確的標(biāo)本采集方法、采集部位、采集量和采集時間并應(yīng)及時送檢，特殊標(biāo)本還需注明采集時間。114、無菌操作12（二）、臨床標(biāo)本及時送檢①所有的標(biāo)本都必須立即送往實驗室，最好在2h內(nèi),保存時間不應(yīng)超過24h.②最佳的臨床標(biāo)本送檢首先取決于所獲取標(biāo)本的量.量少的標(biāo)本應(yīng)在采集后15-30min內(nèi)送檢.③對環(huán)境敏感的微生物如志賀菌、奈瑟氏菌和流感嗜血桿菌（對低溫敏感）應(yīng)立即處理，禁止冷藏脊髓液和生殖道、眼部、內(nèi)耳道標(biāo)本。13標(biāo)本的拒收原則無標(biāo)簽不檢測，并與送檢的醫(yī)生和護(hù)士聯(lián)系。送檢延誤

不接收，提醒送檢者，要求重新采集。送檢容器不當(dāng)或滲漏不接收，告知送檢者，要求重新采集。14標(biāo)本的拒收原則標(biāo)本不符合要求不接收，聯(lián)系送檢者，指出不符合要求之處，要求重新采集符合試驗要求的標(biāo)本.同一天內(nèi)收到同一檢測目的的相同標(biāo)本（血液標(biāo)本除外）不檢測，與送檢者聯(lián)系并說明標(biāo)本重復(fù)不予處理，并在報告單上注明15

臨床常見標(biāo)本血液（生化、免疫及微生物檢驗）尿液糞便痰及上呼吸道標(biāo)本穿刺液標(biāo)本（腦脊液、膽汁、胸腹水等）膿液及創(chuàng)傷感染分泌物標(biāo)本生殖道標(biāo)本組織標(biāo)本16臨床標(biāo)本常規(guī)細(xì)菌學(xué)檢驗程序標(biāo)本選擇標(biāo)本采集與運(yùn)送觀察標(biāo)本、前處理直接涂片快速檢驗分離培養(yǎng)增菌培養(yǎng)可疑菌落血清學(xué)鑒定藥物敏感試驗生化反應(yīng)形態(tài)觀察17細(xì)菌學(xué)鑒定方法1、形態(tài)學(xué)檢查2、菌落的特點3、生化試驗4、血清學(xué)試驗5、細(xì)菌抑菌試驗6、分子生物學(xué)檢測7、噬菌體分型試驗8、動物試驗18細(xì)菌學(xué)檢驗報告原則分級報告藥物敏感報告19一、血液標(biāo)本20常見病原菌種類病原菌G+球菌金黃色葡萄球菌、凝固酶陰性葡萄球菌、肺炎鏈球菌、化膿鏈球菌、草綠色鏈球菌、腸球菌G+桿菌結(jié)核分枝桿菌、產(chǎn)單核李斯特菌、陰道加特納菌G-球菌腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌，卡他布蘭漢菌G-桿菌大腸埃希菌、銅綠假單胞苗、克雷伯桿菌、腸桿菌、變形桿菌、沙雷菌、沙門菌、不動桿菌、嗜肺軍團(tuán)菌、嗜血桿菌真菌念珠菌、曲霉菌、隱球菌、球孢子菌厭氧菌擬桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌21血液標(biāo)本中常見的病原體2223

血標(biāo)本的采集：

采血量血液量每增加1ml，

陽性率就增加3%～5%血量2ml增加到20ml時，血培養(yǎng)的陽性率就增加30%～50%兒童抽血量為1～3ml，成人抽血量3-5ml。血液和肉湯的比例一般推薦為1：5～1：10

標(biāo)本量大于1ml，細(xì)菌量也增加，對于感染的兒童每毫升血液比成人有更多的微生物。

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血標(biāo)本的采集

3、亞急性心內(nèi)膜炎：24h內(nèi)在三個不同部位采集3次血標(biāo)本，兩次間隔不少于15分鐘，如培養(yǎng)陰性，就再采3次血標(biāo)本。

4、急性膿毒血癥：在10分鐘內(nèi)在不同部位采2～3次血標(biāo)本。

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血標(biāo)本的采集

5、不明原因的發(fā)燒：從不同部位采血2～3次，2次間隔至少1小時。如培養(yǎng)陰性，就再采2～3次。

6、患者已使用抗生素：可適當(dāng)停藥，并用含中和抗生素的血培養(yǎng)瓶。

7、無菌采取血液和骨髓液用不含防腐劑的肝素抗凝，然后用Hanks液作適當(dāng)稀釋。培養(yǎng)基：血液增菌液。

26血液標(biāo)本的病原菌的檢驗27血液細(xì)菌學(xué)檢查

血或骨髓培養(yǎng)應(yīng)孵育7天，此期間如發(fā)現(xiàn)細(xì)菌生長，經(jīng)涂片革蘭染色鏡檢后立即口頭報告“疑有革蘭x性菌生長“，此后約6～8h應(yīng)報告藥敏試驗初步結(jié)果，次日發(fā)出正式細(xì)菌鑒定及藥敏報告。培養(yǎng)3天無菌生長通知醫(yī)生，7天無菌生長正式發(fā)出陰性報告。

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二、腦脊液標(biāo)本

1、腰穿法采集腦脊液3—5ml打入血培養(yǎng)瓶中或放入無菌試管中，立即送檢；

2、注意保溫，不可置冰箱保存，因為會使病原菌死亡，尤其是腦膜炎奈瑟氏菌、肺炎鏈球菌及流感嗜血桿菌；

3、腦膿腫吸出物尚須檢測厭氧菌和寄生蟲培養(yǎng)基選擇：普通血培養(yǎng)瓶、厭氧血培養(yǎng)瓶、血平皿、中國藍(lán)平皿、流感嗜血桿菌平皿。

29細(xì)菌學(xué)檢查

1．涂片檢查：革蘭染色：查找一般細(xì)菌，尤其腦膜炎奈瑟菌、肺炎鏈球菌和鏈球菌多見?？顾崛旧翰檎医Y(jié)核分枝桿菌。墨汁染色：查找新型隱球菌。

2．細(xì)菌培養(yǎng)：腦脊髓液培養(yǎng)多數(shù)需3～4天，在此期間如有細(xì)菌生長，需經(jīng)鑒定報告“××菌“，同時報告藥敏試驗結(jié)果。

30三、尿液標(biāo)本無菌采集中段尿如考慮厭氧菌感染，采取膀胱穿刺法采集標(biāo)本。

排尿困難者考慮導(dǎo)尿采集標(biāo)本。31

尿液標(biāo)本的采集

1、一般原則

通常應(yīng)采集早晨起床后第一次尿液送檢。原則上應(yīng)選擇在抗菌藥物應(yīng)用之前采集尿液；

2、沙門氏菌感染

一般在病后2周左右采集尿液培養(yǎng)；

3、鉤端螺旋體感染

一般在病后2周左右采集尿液培養(yǎng)；

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尿液標(biāo)本的采集

4、結(jié)核分枝桿菌感染

患者應(yīng)停藥1—2天后，留取晨尿或24h尿的沉渣部分10—15ml培養(yǎng)；

5、女性宜用肥皂水清洗外陰周圍，用濕紗布清潔周圍，排尿棄去前段尿，留取中段尿10ml左右于無菌容器內(nèi)；

6、男性用肥皂水清洗陰莖頭，用濕紗布清潔周圍，排尿棄去前段尿，取中段尿10ml左右于無菌容器內(nèi)；

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尿液標(biāo)本的采集

7、留取尿液標(biāo)本應(yīng)立即送檢，否則尿中細(xì)菌迅速繁殖，使菌落計數(shù)不可靠而影響診斷；

8、無菌導(dǎo)尿管采集尿液，應(yīng)在排出15ml尿液后收集標(biāo)本，但導(dǎo)尿有潛在引入尿道菌的危險。

9、留置導(dǎo)尿管采尿，應(yīng)先以75%酒精消毒導(dǎo)管口，用無菌注射器收集5—10ml尿，長期留置導(dǎo)尿管患者，應(yīng)在更換新尿管時留取尿標(biāo)本；34

尿液標(biāo)本的采集

10、尿液應(yīng)在收集后1h內(nèi)接種，陰性桿菌菌落計數(shù)≥105CFU/ml、陽性球菌菌落計數(shù)≥104CFU/ml有意義；

11、念珠菌尿是異常的，不需定量；

培養(yǎng)基選擇：血平皿、中國藍(lán)平皿、流感嗜血桿菌平皿、沙保羅氏真菌平皿、L型培養(yǎng)基。

3536尿液標(biāo)本的采集.注意事項：

1、尿液標(biāo)本的采集和培養(yǎng)中最大的問題是污染雜菌，故應(yīng)嚴(yán)格進(jìn)行無菌操作；

2、尿液標(biāo)本采集后應(yīng)盡快送檢，否則會影響細(xì)菌檢查的正確性；

3、通常應(yīng)取晨起后第一次尿液送檢；

4、多數(shù)藥物均通過尿液排泄，因此，無論用何種方法采集尿液均宜在用藥之前進(jìn)行；

5、尿液中不得加防腐劑或消毒劑。

37尿液細(xì)菌學(xué)檢查

1．涂片檢查：革蘭染色：查革蘭陽性菌、陰性菌或假絲酵母菌?？顾崛旧翰榻Y(jié)核分枝桿菌。淋球菌涂片：用革蘭染色和呂氏美藍(lán)染色，如發(fā)現(xiàn)革蘭陰性成雙排列的圓形或橢圓形球菌，應(yīng)進(jìn)一步培養(yǎng)證實。

2．中段尿細(xì)菌計數(shù)：用來助診尿路感染。

3．細(xì)菌培養(yǎng)：48h無細(xì)菌生長，報告陰性。此間有細(xì)菌生長，需進(jìn)行鑒定相做藥敏試驗。

38尿液檢驗臨床意義

1．正常人膀胱尿液通常無菌，尿液細(xì)菌學(xué)檢查有助于泌尿生殖道的診療。

2．中段尿細(xì)菌計數(shù)，如為球菌感染，＞104／m1；如為桿菌感染＞105／m1，常為診斷泌尿系感染的依據(jù)。

3．10％的尿路感染者可能在同份尿標(biāo)本中分離到兩種細(xì)菌，并都是病原菌。39七、穿刺液（胸水、腹水、心包液、關(guān)節(jié)液、鞘膜液）標(biāo)本

1、胸（腹）水的標(biāo)本量為5—10ml，心包液為1—5ml；

2、抽取后，以無菌操作注入血培養(yǎng)瓶；

3、涂片檢查，這類標(biāo)本因原部位是無菌的，只要檢出細(xì)菌即可診斷感染的類型，故直接涂片很重要。培養(yǎng)基選擇：普通血培養(yǎng)瓶、厭氧血培養(yǎng)瓶、血平皿、中國藍(lán)平皿、流感嗜血桿菌平皿、沙保羅氏真菌平皿、羅—琴氏雞蛋培養(yǎng)基。

56細(xì)菌學(xué)檢查

1．涂片檢查：革蘭染色：查找一般細(xì)菌?？顾崛旧翰檎医Y(jié)核分枝桿菌。

2．細(xì)菌培養(yǎng)：一般培養(yǎng)2～3天，培養(yǎng)2天無細(xì)菌生長可報告之，此間如有細(xì)菌生長，需進(jìn)一步鑒定和藥敏試驗后報告。

57臨床意義

正常胸腹腔僅有極少量無菌液體。漏出液無細(xì)菌，滲出液多可找到病原菌(腫瘤性除外)。如有細(xì)菌，則源于原發(fā)性或繼發(fā)性(鄰近器官的炎癥性病變)胸、腹膜炎。

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眼、耳、鼻、咽拭子標(biāo)本【標(biāo)本采集】

1．采集眼分泌物：先用無菌生理鹽水沖洗眼部，然后用棉拭子拭干，再用無菌棉拭子采集分泌物。

2．采集咽分泌物：先用清水撤口，用壓舌板將舌向下向外壓，將咽拭子在咽后壁或懸雍垂后側(cè)涂抹數(shù)次，切勿接觸口腔和舌粘膜。

3．采集耳、鼻或鼻咽分泌物：直接用拭子涂抹病灶部位，切勿接觸周圍粘膜或皮膚。以上標(biāo)本均需立即送檢。59細(xì)菌學(xué)檢查

1．涂片檢查：革蘭染色：可查出一般細(xì)菌，尤其應(yīng)注意白喉桿菌、假絲酵菌、奮森螺旋體和梭形桿菌?？顾崛旧嚎刹槌鼋Y(jié)核分枝桿菌和麻風(fēng)分枝桿菌。

2．細(xì)菌培養(yǎng)：一般細(xì)菌培養(yǎng)2～3天，百日咳桿菌培養(yǎng)需7天，此間如無菌生長可報告之，如有細(xì)菌生長則需進(jìn)行種類鑒定和藥敏試驗。培養(yǎng)基選擇：血平皿、中國藍(lán)平皿、流感嗜血桿菌平皿、沙保羅氏真菌平皿60臨床意義

正常人眼、中耳、鼻竇內(nèi)無菌，鼻、咽部有口腔常在菌叢，耳、鼻、咽部感染的病原菌多源于口腔，正常菌群常干擾對病原菌的判斷急性細(xì)菌性鼻炎、鼻腔癤腫、鼻中隔膿腫多由金黃色葡萄球菌引起；猩紅熱、風(fēng)濕熱、急性腎炎患者咽拭子常可檢出化膿性鏈球菌；百日咳患者初期可檢出百日咳桿菌，咽喉部特別是扁桃體的細(xì)菌學(xué)檢查對白喉具有診斷價值；急性咽喉炎以鏈球菌感染多見，潰瘍性咽峽炎可由奮森螺旋體和桿菌引起。

61生殖道標(biāo)本要求尿道及尿道口標(biāo)本