動物細胞工程

動物細胞工程第1頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月動物細胞培養(yǎng)動物細胞融合單克隆抗體技術核移植動物細胞工程常用技術第2頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月一、動物細胞培養(yǎng)1.發(fā)展歷史:20世紀初，人們不知道神經(jīng)纖維是由神經(jīng)細胞的細胞質(zhì)向外突出形成的，還是由神經(jīng)細胞周圍的其他細胞融合而成的。生物學家們就這個問題展開了激烈的爭論。1907年，美國生物學家哈里森(Harrison)從蝌蚪的脊索中分離出神經(jīng)組織，把它放在青蛙的凝固的淋巴液中培養(yǎng)。蝌蚪的神經(jīng)組織存活了好幾周，并且從神經(jīng)細胞中長出了神經(jīng)纖維。哈里森的實驗不僅解決了神經(jīng)纖維的起源問題，而且開創(chuàng)了動物組織培養(yǎng)的先河。此后，在許多科學家的不懈努力下，動物組織培養(yǎng)不斷改進并逐漸發(fā)展成為動物細胞培養(yǎng)。第3頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月1.動物細胞培養(yǎng)的概念：動物細胞培養(yǎng)就是從動物有機體中取出相關的組織,將它分散成單個細胞,然后,放在適宜的培養(yǎng)基中,讓這些細胞生長和增殖.一、動物細胞培養(yǎng)第4頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月動物胚胎或幼齡動物的組織、器官胰蛋白酶剪碎單個細胞加培養(yǎng)液制成細胞懸浮液10代細胞部分細胞“癌變”，無限傳代動物細胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成動物體50代細胞原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細胞貼壁剝離、分瓶細胞2.動物細胞培養(yǎng)過程：第5頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月思考討論：在動物細胞培養(yǎng)過程中，為什么要用胰蛋白酶對取出的動物組織進行處理？胰蛋白酶處理動物組織，可以使動物組織細胞間的膠原纖維和細胞外的其他成分酶解，獲得單個細胞。第6頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月有關概念:原代培養(yǎng)：從機體取出后立即培養(yǎng)的細胞為原代細胞。培養(yǎng)的第1代細胞與傳10代以內(nèi)的細胞稱為原代培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)：將原代細胞從培養(yǎng)瓶中取出，配制成細胞懸浮液，分裝到兩個或兩個以上的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，稱為傳代培養(yǎng)。第7頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月4、動物細胞培養(yǎng)的條件無菌、無毒的環(huán)境：無菌處理、加抗生素、定期更換培養(yǎng)液營養(yǎng)：特別加入血清或血漿溫度和PH：36.5度左右\PH為7.2~7.4氣體環(huán)境：O2—細胞呼吸必需；C2O—維持PH值第8頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月4.動物細胞培養(yǎng)技術的應用:1.蛋白質(zhì)生物制品的生產(chǎn)如病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體2.健康細胞培養(yǎng)培養(yǎng)健康細胞用于燒傷病人皮膚移植3.細胞的生理、藥理、病理研究

第9頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月植物組織培養(yǎng)和動物細胞培養(yǎng)的比較比較項目原理培養(yǎng)基結(jié)果培養(yǎng)目的植物組織培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)植物細胞全能性細胞增殖固體營養(yǎng)物質(zhì)植物激素液體營養(yǎng)物質(zhì)動物血清培養(yǎng)成植株培養(yǎng)成細胞群快速繁殖培養(yǎng)無病毒植株獲得細胞或細胞產(chǎn)物第10頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月思考：2、為什么選用動物胚胎或幼齡個體的器官或組織做動物細胞培養(yǎng)材料？1、動物細胞培養(yǎng)液的主要成分是什么？較植物組培培養(yǎng)基有何獨特之處？3、為什么培養(yǎng)前要將組織細胞分散成單個細胞？4、動物細胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個體？主要成分：葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和動物血清等。獨特之處有：1、液體培養(yǎng)基2、成分中有動物血清等因為這些組織或器官上的細胞生命力旺盛，分裂能力強成塊組織不利培養(yǎng)，分散了做成細胞懸浮液利于培養(yǎng)不能，動物細胞培養(yǎng)只能使細胞數(shù)目增多，不能發(fā)育成新的動物個體第11頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月四、核移植技術

動物核移植是將動物的一個細胞的細胞核,移如入一個已經(jīng)去掉細胞核的卵母細胞中.使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎,這個新的胚胎最終發(fā)育為動物個體.第12頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月黑面綿羊去核卵細胞白面綿羊乳腺細胞核細胞核移植重組細胞電脈沖刺激早期胚胎胚胎移植另一頭綿羊的子宮妊娠、出生克隆羊多利1.克隆羊培育過程第13頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月2.體細胞核移植技術的應用前景第14頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月思考下列問題：1、什么叫動物細胞融合？2、動物細胞在結(jié)構(gòu)上有何區(qū)別？這與它們雜交或融合過程有什么影響？3、動物細胞融合與植物原生質(zhì)體融合的基本原理是否相同？第15頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月一、動物細胞融合

細胞融合是正常的生命活動兩個細胞正在融合受精作用第16頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月動物細胞融合第17頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月細胞融合與誘導細胞融合物質(zhì)：誘導劑：仙臺病毒、聚乙二醇

誘導細胞融合的仙臺病毒必須滅活。

思考討論：為什么細胞融合過程中使用的病毒需要滅活？不滅活行嗎？因為滅活的病毒能使細胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細胞膜打開，細胞發(fā)生融合，不滅活的話會感染細胞，而不能誘導細胞融合。細胞融合技術應用于哪些方面？細胞學、遺傳學、免疫學及制備單克隆抗體。第18頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月植物體細胞雜交和動物細胞融合的比較比較項目植物體細胞雜交動物細胞融合細胞融合原理細胞膜的流動性、細胞膜的流動性細胞融合的方法去除細胞壁后誘導原生質(zhì)體融合使細胞分散后誘導細胞融合誘導方法物理（離心、振蕩、電刺激）化學（聚乙二醇）物理、化學方法（同左）滅活的病毒用途獲得雜種植株制備單克隆抗體第19頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月二、單克隆抗體什么是抗體？抗體是機體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。B淋巴細胞產(chǎn)生抗體。第20頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月B淋巴細胞與抗體的關系：

１．B淋巴細胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生抗體。２．動物體內(nèi)的B淋巴細胞可以產(chǎn)生百萬種以上的抗體，每種抗體對特定的抗原具有特異性免疫作用。３．每一個淋巴細胞只能產(chǎn)生一種特異性的抗體。所以傳統(tǒng)的抗體的生產(chǎn)方法及缺陷是什么？怎樣解決這個問題？第21頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月單克隆抗體由單個B淋巴細胞經(jīng)過無性繁殖（克?。?，形成基因型相同的細胞群，這一細胞群所產(chǎn)生的化學性質(zhì)單一、特異性強的抗體稱為單克隆抗體。

特點：特異性強、靈敏度高

第22頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？利用淋巴細胞產(chǎn)生抗體的功能利用腫瘤細胞無限增殖的特性利用細胞融合的技術將兩種細胞融合獲得具有淋巴細胞和腫瘤細胞特性的雜交瘤細胞利用動物細胞培養(yǎng)技術大量培養(yǎng)雜交瘤細胞如何篩選？融合方式？第23頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月第24頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月思考：1、本過程利用了哪些原理？免疫原理，細胞融合原理和動物細胞培養(yǎng)原理2、為什么選用小鼠骨髓瘤細胞與B細胞融合？細胞同源越近,越容易融合.第25頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月單克隆抗體的應用與常規(guī)抗體相比，單克隆抗體產(chǎn)量高，特異性強，靈敏度高，優(yōu)越性十分明顯。應用主要有：1、臨床診斷2、作為載體，運載抗癌藥物，形成“生物導彈”治療腫瘤

資料：目前世界各國已經(jīng)研制出數(shù)以百計的單克隆抗體。許多缺乏良好診斷手段的傳染病、免疫性疾病、血液病、內(nèi)分泌疾病和遺傳病，用單克隆抗體作為診斷手段，是一個必然趨勢。另外，用單克隆抗體做體內(nèi)診斷，借以鑒別和定位體內(nèi)“病灶”也引起人們的注意，目前，主要用于腫瘤追蹤及心肌梗塞的診斷。第26頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月小結(jié)兩個過程動物細胞培養(yǎng)過程單克隆抗體制備過程三個“一”一個誘導細胞融合的新方法－－滅活病毒一個新細胞－－雜交瘤細胞一個優(yōu)勢－－單克隆抗體特異性強、靈敏度高的優(yōu)勢第27頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月

下圖為某同學根據(jù)雜交瘤技術的方法，設計的生產(chǎn)破傷風桿菌的實驗方案2、該方案能達到預期效果嗎？為什么？4、圖中B為________過程，常用_________作為誘導劑，該細胞繼承___________的遺傳特性，既能__________,又能___________。1、該實驗方案的目的是__________3、A是從小鼠的脾臟中取得_______,該細胞能夠產(chǎn)生______5、C過程指細胞培養(yǎng)，該過程包括_____培養(yǎng)和_____培養(yǎng)兩個階段，其中_____代以內(nèi)的的細胞屬于細胞株。制備單克隆抗體B細胞抗體細胞融合滅活病毒雙親細胞分泌抗體無限增殖原代傳代50B體外培養(yǎng)骨髓瘤細胞雜交瘤細胞足夠數(shù)量的細胞群注射到小鼠腹腔AC第28頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月1.動物細胞工程技術的基礎是：（）A．動物細胞融合 B．胚胎移植C．動物細胞培養(yǎng)D．核移植Ｃ第29頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月２．在動物細胞融合和植物體細胞雜交的比較中，正確的是（）A．結(jié)果是相同的

B．雜種細胞的形成過程基本相同C．操作過程中酶的作用相同D．誘導融合的手段相同Ｂ第30頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月３.單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細胞和B淋巴細胞誘導融合后，要用特