血清載脂蛋白BAPOB測(cè)定

血清載脂蛋白BAPOB測(cè)定1檢驗(yàn)?zāi)康闹笇?dǎo)本室工作人員規(guī)范操作本檢測(cè)項(xiàng)目，確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確。2實(shí)驗(yàn)原理血清中的ApoB與試劑中特異性的ApoB抗體結(jié)合，形成抗原抗體復(fù)合物而產(chǎn)生濁度，其濁度高低與血清中ApoB成正比。通過測(cè)定特定波長(zhǎng)的吸光度值，參照校準(zhǔn)曲線即可計(jì)算出血清中ApoB的含量。3標(biāo)本： 3.1病人準(zhǔn)備:應(yīng)禁食12小時(shí)抽血.3.2類型：血清3.3標(biāo)本存放留取標(biāo)本后請(qǐng)盡快分離血清。在冰箱保存的條件下（2～8℃）穩(wěn)定3天，-20℃保存至少可以穩(wěn)定3個(gè)月。3.4標(biāo)本運(yùn)輸室溫條件下運(yùn)輸3.5標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)細(xì)菌污染的不能做測(cè)定。4實(shí)驗(yàn)材料4.1試劑：寧波美康生物科技股份有限公司APOB測(cè)定試劑盒（浙械注準(zhǔn)20142400106）4.1.1試劑組成試劑1（R1）：磷酸鹽緩沖液（）0.05mol/L聚乙二醇（PEG）表面活性劑，穩(wěn)定劑40g/LTritonX-1000.1ml/L試劑2（R2）：羊抗人APOB血清（效價(jià)大于1:64）20～30ml/L4.1.2試劑準(zhǔn)備：試劑為即用式。4.1.3試劑穩(wěn)定性與貯存：試劑保存于2～8℃，若無污染，可穩(wěn)定至失效期。試劑不可冰凍。緩沖液（R1）和抗體試劑（R2）可避光密封保存可穩(wěn)定一年。打開后抗體試劑（R2）穩(wěn)定2個(gè)月4.1.4變質(zhì)指示：當(dāng)試劑有看得見的微生物生長(zhǎng)，有濁度，或者未開蓋的液體有沉淀時(shí)，表明試劑已變質(zhì)，不能繼續(xù)使用。4.1.5注意事項(xiàng)：試劑中含疊氮鈉（0.95g/L）為防腐劑。不可入口！避免接觸皮膚及粘膜。應(yīng)采取必要的預(yù)防措施使用試劑4.2校準(zhǔn)品：使用寧波美康生物科技有限公司提供的載脂蛋白A-1/B標(biāo)準(zhǔn)品血清進(jìn)行全點(diǎn)校準(zhǔn)操作。4.3質(zhì)控品：使用正常值、病理值復(fù)合控制品。5儀器AU2700生化分析儀，羅氏P800生化分析儀,西門子ADVIA-2400生化分析儀，東芝TBA-120生化分析儀。6操作步驟6.1樣品的準(zhǔn)備：將標(biāo)好號(hào)的樣品離心后放到儀器規(guī)定的位置。6.2試劑的檢測(cè)：儀器開機(jī)后，檢查各種試劑的位置，體積等確認(rèn)無誤后方可進(jìn)行測(cè)定。6.3項(xiàng)目基本參數(shù)：參見生化檢驗(yàn)AU2700生化分析儀，羅氏P800生化分析儀，西門子ADVIA-2400生化分析儀，東芝TBA-120生化分析儀項(xiàng)目測(cè)定參數(shù)。6.4儀器操作步驟：參見生化檢驗(yàn)AU2700生化分析儀，羅氏P800生化分析儀，西門子ADVIA-2400生化分析儀，東芝TBA-120生化分析儀操作規(guī)程。7質(zhì)量控制在每一批標(biāo)本中都應(yīng)把非定值血清水平I與II質(zhì)控做為未知標(biāo)本進(jìn)行分析，以2S為質(zhì)控警告限，3S為失控限，繪制質(zhì)控圖，判斷是否在控。8計(jì)算方法以APO-B復(fù)合校準(zhǔn)品校準(zhǔn)儀器后，在病人結(jié)果可報(bào)告范圍內(nèi)，儀器直接報(bào)告可靠的檢測(cè)結(jié)果，以g/L報(bào)告。9參考值范圍0.60～1.20g/L參考值因性別、年齡、飲食和地域的不同而有所差別。根據(jù)好的實(shí)驗(yàn)室經(jīng)驗(yàn)，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立自己的參考值。我室參考值0.60～1.20g/L10臨床意義載脂蛋白B(ApoB)是低密度脂蛋白(LDL)的主要結(jié)構(gòu)蛋白，它輸送膽固醇至細(xì)胞中，因此與動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成有關(guān)。因?yàn)锳poB濃度水平與動(dòng)脈粥樣硬化程度密切相關(guān)，因此ApoB濃度水平的上升和冠心病(CHD)緊密有關(guān)。在使用總膽固醇和甘油三酯來過篩冠心病危險(xiǎn)時(shí)，除檢測(cè)脂蛋白(a)與載脂蛋白A1之外，同時(shí)檢測(cè)載脂蛋白B能對(duì)各種脂蛋白代謝失調(diào)提供更多的信息，也可替代低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)檢測(cè)。檢測(cè)載脂蛋B在監(jiān)視降脂藥物治療時(shí)非常有用。一些研究表明，當(dāng)ApoB濃度上升(女性ApoB>1.50g/L，男性ApoB>1.55g/L)，而ApoA1濃度下降(女性ApoA1<1.20g/L，男性ApoA1<1.10g/L)，對(duì)于預(yù)測(cè)CHD危險(xiǎn)非常有用。11操作性能11.1線性范圍：0.30～2.0g/L(r2≥0.995)；11.2精密度：精密度的評(píng)估是根據(jù)NCCLS推薦的標(biāo)準(zhǔn)方法，AU1000、ADVIA-2400批內(nèi)精密度小于3%，總精密度小于3%。用于分析的質(zhì)控血清和數(shù)據(jù)處理符合以上的NCCLS的規(guī)則。11.3方法學(xué)比較：本公司的試劑盒(y)與某商品化試劑盒(x)，同時(shí)對(duì)63個(gè)樣品進(jìn)行ApoB檢測(cè)，將檢測(cè)結(jié)果作方法學(xué)比較，其統(tǒng)計(jì)結(jié)果如下：y=1.08x-0.0512g/L；r=0.990。11.4靈敏度：本試劑的檢測(cè)限為0.003g/L。11.5病人結(jié)果可報(bào)告范圍：0.30～2.0g/L(r2≥0.995)12超出范圍結(jié)果處理本法的檢測(cè)范圍為0.30～2.0g/L(r2≥0.995)對(duì)超出可報(bào)告范圍的結(jié)果的處理：取0.1ml樣品加0.5ml生理鹽水，再測(cè)定，結(jié)果乘以6。13病危報(bào)警值的處理無。14方法局限性14.1干擾物質(zhì)：寧波美康公司的ApoB試劑中抗體特異地只與人ApoB發(fā)生免疫反應(yīng)。當(dāng)樣品中抗壞血酸濃度≤1704mol/L，膽紅素濃度≤598mol/L，血紅蛋白濃度≤5.00g/L，甘油三酯濃度≤22.6mmol/L時(shí)沒有觀察到干擾。試劑與ApoA1和ApoA2沒有交叉反應(yīng)。14.2前帶限制：血清ApoB值≤10.00g/L時(shí)，沒有觀察到前帶效應(yīng)。14.3溶血標(biāo)本可影響結(jié)果。15補(bǔ)救措施當(dāng)儀器發(fā)生故障時(shí)，迅速聯(lián)系儀器廠家進(jìn)行維修。16參考文獻(xiàn)16.1葉應(yīng)嫵，王毓山，申子瑜主編·全國(guó)