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分子生物學(xué)技術(shù)基因工程的定義本義：根據(jù)人們的意愿，利用工程設(shè)計(jì)的方法，在體外將克隆獲得的目的基因與適當(dāng)?shù)妮d體進(jìn)行切割和連接，構(gòu)建成正確的重組表達(dá)載體，再應(yīng)用物理的、化學(xué)的或生物學(xué)的方法將該表達(dá)載體導(dǎo)入到細(xì)菌、動(dòng)植物細(xì)胞或受精卵中，使目的基因在宿主體內(nèi)以瞬時(shí)方式或穩(wěn)定方式進(jìn)行表達(dá)，借此研究目的基因的結(jié)構(gòu)與功能，或獲得該基因的表達(dá)產(chǎn)物。這一過(guò)程就是基因工程。廣義：轉(zhuǎn)基因動(dòng)物；克?。换虼虬?；基因組計(jì)劃等均屬于基因工程的范疇。5￠Primer

15￠

Primer

2Cycle

25￠5￠5￠5￠5￠5￠Cycle

15￠5￠5￠5￠5￠5￠5￠5￠一、PCR基本工作原理Template

DNA目錄

Cycle

35￠5￠5￠5￠5￠5￠5￠5￠5￠5￠5￠5￠5￠5￠5￠5￠25～30次循環(huán)后，模板DNA的含量可以擴(kuò)大100萬(wàn)倍以上。目錄

模板DNA特異性引物耐熱DNA聚合酶dNTPsMg2+二、PCR體系基本組成成分三、PCR的基本反應(yīng)步驟變性95?C延伸72?C退火Tm-5?C體內(nèi)復(fù)制和PCR的異同：相同點(diǎn)：1堿基互補(bǔ)配對(duì)原則2半保留復(fù)制3模板

4合成方向

5底物

6引物

7

Mg2+

8聚合酶不同點(diǎn)：體內(nèi)體溫下反應(yīng)引物RNA聚合酶連接酶等多復(fù)制起點(diǎn)，雙向一旦合成必須完成修復(fù)不連續(xù)復(fù)制體內(nèi)調(diào)控體外人為控制

DNATaq酶

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