常見流式細(xì)胞儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

常見流式細(xì)胞儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程××醫(yī)院檢驗科臨床免疫室作業(yè)指導(dǎo)書文件編號:XXX生效日期：共頁第頁1.目的規(guī)范流式細(xì)胞儀操作和維護程序，正確使用設(shè)備，保證檢驗質(zhì)量。2.儀器名稱及型號設(shè)備A：××(品牌)××(型號)流式細(xì)胞儀。設(shè)備B：××(品牌)××(型號)流式細(xì)胞儀。設(shè)備C：××(品牌)××(型號)流式細(xì)胞儀。3.應(yīng)用范圍適用于免疫組經(jīng)授權(quán)的檢驗技術(shù)人員。4.儀器簡介和測試原理多色流式細(xì)胞儀一般安裝有一根或多根激光器，采用鞘液聚焦原理，樣本流經(jīng)鞘液流體聚焦，形成單細(xì)胞液流依次通過流動室。激光器射出的光斑聚焦在流動室的中心處，在激光照射區(qū)域，細(xì)胞上標(biāo)記的熒光染料受到激光的激發(fā)，產(chǎn)生熒光信號。收光系統(tǒng)有效收集被分析樣本中單個細(xì)胞或粒子被激光照射時產(chǎn)生的前向散射光、側(cè)向散射光和熒光信號。根據(jù)細(xì)胞標(biāo)記的熒光素不同，在不同波長的激光激發(fā)下產(chǎn)生相應(yīng)熒光信號，經(jīng)光電倍增管放大和不同規(guī)格波長的濾光片過濾之后將特定波長的光信號輸入到光學(xué)探測器。光學(xué)探測器將光學(xué)信號轉(zhuǎn)換為電脈沖信號，再經(jīng)過數(shù)字化轉(zhuǎn)化被計算機儲存分析，得到單個細(xì)胞的物理和生物學(xué)特征。如前向散射光(FSC)反映細(xì)胞大小，側(cè)向散射光(SSC)反映細(xì)胞內(nèi)部復(fù)雜程度，熒光信號則反映標(biāo)記各種細(xì)胞功能和相關(guān)抗原的表達。部分流式細(xì)胞儀還可結(jié)合流量測定技術(shù)實現(xiàn)絕對值計數(shù)。5.開展項目6.工作環(huán)境好。散熱空間：良好。儀器主機與旁邊的物體(例如：墻體)至少間隔20cm以上。設(shè)備周圍電刷型電機、閃爍熒光燈和經(jīng)常開關(guān)的電接觸性設(shè)備；避免強光直接照射；避免置于熱源及風(fēng)放置在斜面上；室內(nèi)使用。7.操作規(guī)程廢液桶，可加入400ml次氯酸鈉原液。所有蓋子旋緊，保持管路連接無扭曲。7．1．1．4打開電源箱門，依次檢查：AirFilter和VacuumFilter必須干燥無水；WaterTrap液體不能超過1／3；VacuumTrap液體不超過1／4；SystemVacuum表應(yīng)在－17~－30檢測。7．1．2．3當(dāng)儀器采集到5000個微球時，自動停止上樣?？勺詣佑涗涃|(zhì)控圖(Levey相符。請聯(lián)系廠家工程師?？吹綑z測后的統(tǒng)計數(shù)值(如圖所示)，亦可建立FlowPage或PanelReport報告頁，打印報告。圖所示樣本編輯錄入圖所示樣本檢測結(jié)果此時機器會用CleanseTank中的清洗液沖洗整個管路3~5min。待軟件下方指示列出現(xiàn)“PressIdleModeButtontoInitialize”，清洗結(jié)束。此時若按“初始化”鍵，機器會自動將清洗液le會自動將清洗液排入廢液桶內(nèi)。注意：使用Cleaning液浸泡管路不可超過24h，否則會造成管路受損。關(guān)閉流式主機；依次關(guān)閉計算機主機、打印機開關(guān)。閉電源箱開關(guān)，切斷所有電源。進行了必要的消毒。保證鞘液、廢液的管路無彎折，連接可靠。保證儀器的電源插頭安全插入電源插座。保證計算機電纜與儀器連接就緒。登錄，進入操作軟件界面。系統(tǒng)自動進行初始化、開機倒計時及溫控。初始化及溫控過程結(jié)細(xì)胞亞群檢測為例)：①單擊“”按鈕新增樣本；②輸樣本T試管的“位置”框，彈出樣本盤示意圖，單擊盤號兩側(cè)的左／右箭頭按鈕，切換到欲選擇的盤號，單擊孔位選擇T試管在樣本盤上的位置；⑤雙擊待測樣本BNK試管的“位置”框，彈出樣本盤示意圖，單擊孔位選擇BNK試管在樣本盤上的位置(樣本下的所有試管的盤號自動保持一致，更換任何試管的盤號，該樣本下其他試管會自動更改為與其一致的盤號)；⑥在“樣本”界面“樣本信息”區(qū)中可錄入樣本及患者信息；將準(zhǔn)備好的樣本放入與工作單一致的樣本盤及試管位，正確安裝樣本盤；⑦選中工作單列表中待測樣本的起始試管T試管；⑧單擊“儀器控制”中的“”啟動自動進樣按鈕，儀器自動從設(shè)定的起始位置處開始依次執(zhí)行樣本測定。參見圖所示。所有試管測定完成后，自動進樣停止，儀器狀態(tài)指示燈恢復(fù)為綠色長亮，此時可安全打開倉門，取出試管或卸下樣本盤。兩管樣本都測試完成后，軟件自動分析測試結(jié)果，并可在報告預(yù)覽中出具檢測報告。同時也可根據(jù)需要，調(diào)整圖形中的設(shè)門位置，統(tǒng)計結(jié)果隨之更新。設(shè)備B檢測報告參見圖所示。圖所示設(shè)備B樣本編輯界面T上，單勻后置于試管托架上，單擊“儀器控制”中的“”啟動測試；兩管樣本都測試完成后，軟件自動分析測試結(jié)果，并可在報告預(yù)覽中出具檢測報告。同時也可根據(jù)需要調(diào)整圖形中隨之更新。圖所示檢測報告圖線都連接良好。觀察鞘液瓶、沖洗液瓶和清洗液瓶中的液面情況高于容器容量的1／3高度；排空廢液容器，并向廢液容器中加入50ml的專用清洗液。色，儀器自動對液體管路進行清洗。用戶名登錄。：儀器提供部分項目的預(yù)設(shè)檢測方案模板，可直接選擇相應(yīng)測試，儀器自動完成分析和報告。圖所示T淋巴細(xì)胞亞群模板標(biāo)本1節(jié)點下面的空白管，箭頭所指表示即將要采集檢測的樣本，見圖所示。充分混勻各管樣本，進行樣本采集。調(diào)淋巴細(xì)胞門，十字門以及其他各門的位置以適應(yīng)于淋巴細(xì)胞群以及各群圈門，關(guān)注TimeCount圖所示按鈕保存數(shù)據(jù)。圖所示待測樣本指示圖所示淋巴細(xì)胞亞群數(shù)據(jù)分析圖所示絕對值計數(shù)設(shè)置檢查每個標(biāo)本的報告，確認(rèn)報告無誤后，在軟件界打印，見圖所示；也可以在報告界面直接打印報告。計數(shù)，根據(jù)實際的上樣體積和稀釋總體積設(shè)置計算。圖所示淋巴細(xì)胞亞群報告查看圖所示淋巴細(xì)胞亞群批量打印報告結(jié)果文件導(dǎo)出和導(dǎo)入源”按鈕。系統(tǒng)進入關(guān)機流程，電源按鈕燈變成閃爍的綠色指示燈，儀器自動執(zhí)行關(guān)機清洗流程。關(guān)機流程結(jié)束后，電源自動切斷，指示燈熄滅。8.質(zhì)量控制8．1．2．2制備ImmunoTrol質(zhì)控血樣本：制備方法與外周血淋巴細(xì)胞檢測的制備方法一致，取100μl的質(zhì)控血和質(zhì)控血低值，根據(jù)說明書加入相應(yīng)體積抗體，孵育15min后，加入溶血素溶血，然后上機檢測。如需進行絕對計數(shù)，請反向加樣法加入質(zhì)控血，并在上機前，在樣本管內(nèi)反向加樣法加入100μlFlowCount微球。加入微球后2h內(nèi)必須上機檢測。Products(編輯產(chǎn)品)”對話框中已正確地輸入了QC產(chǎn)品信息。質(zhì)控血樣本程序選擇“ManualAbsoluteCountCalibrationValue”中“Enable”，并輸入絕對計數(shù)微球校準(zhǔn)系數(shù)(如：RejectAll需要排除系統(tǒng)故障后重新進行QC。PMT電壓情況，其差異應(yīng)在均值±5％之間，表示儀器處于穩(wěn)定狀態(tài)，并記錄結(jié)果。s旋混勻儀上充分震蕩，在流式試管中滴加1滴微球，用0．5ml的流式鞘液稀釋，使用前充分混勻。選擇一個預(yù)先保存的質(zhì)控物批號，如圖所示所示。該批號對應(yīng)的質(zhì)控物信息自動顯示在當(dāng)前頁面。存儲介質(zhì)中讀取、手動錄入等方式進行質(zhì)控物信息的設(shè)置，具體方法如下：●從質(zhì)控物包裝中找到廠家提供的二維碼(碼制：QRCode)，如圖所示所示?！袷褂脳l碼掃描儀，逐個掃描二維碼，識別成功的二維碼顯示為綠色，不成功的二維碼顯質(zhì)控二維碼信息確認(rèn)●三個二維碼全部掃描成功后，軟件自動解析質(zhì)控物信息。解析完成后，質(zhì)控物信息被錄入當(dāng)前界面。項目各通道之間補償值。錄入完整后，內(nèi)容被實時保存。輸入框中單擊，即可出現(xiàn)樣本盤位置圖，在該圖上選擇質(zhì)控試管放置的盤號和位置號。單擊“”按鈕，啟動測試。儀器自動完成系統(tǒng)校準(zhǔn)和電壓標(biāo)定。測試。。可以執(zhí)行QC測試功能，通過主菜單“儀器”一“QC測試報告”可以查看QC測試報告，如圖所示9.維護保養(yǎng)用70％乙醇清洗樣本臺周圍，特別要注意樣本臺和樣本針探頭。數(shù)據(jù)穩(wěn)定。關(guān)閉主機電源，小心取出過濾網(wǎng)以免損壞，清洗并擰干過濾網(wǎng)，至少干燥30min，圖所示設(shè)備C的QC測試報告并用吸水紙徹底吸干水分，將濾網(wǎng)放回，蓋上濾網(wǎng)蓋板?；吻逑矗沟綦p蒸水，如此反復(fù)3次。分別向鞘液盒和清潔液盒注入鞘液和清潔液，擰緊蓋子，反復(fù)搖晃清洗后棄掉液體；重新放回試劑盒。做flowcheck檢測重復(fù)性，儀器除塵等。維護。為了儀器在最佳狀態(tài)運行，推薦按照表所示定期維護儀器。表所示設(shè)備C定期維護頻率維護內(nèi)容推薦頻率開機維護關(guān)機維護排空廢液預(yù)防性維護：清潔樣本針、清潔拭子、儲液瓶除菌等更換液路系統(tǒng)耗材每次開機、開機過程中儀器自動沖洗管路完成維護每次關(guān)機、關(guān)機過程中儀器自動清洗和沖洗管路完成維護每次實驗前檢查儲液瓶中鞘液、清洗液、沖洗液液體，需要時及時添加每次實驗前檢查廢液液面，如有需要及時排空廢液每月耗材更換達2個月或系統(tǒng)提示需更換時在必要的時候，儀器的元器件需要不定期地清潔與維護。維護的頻率取決于流式細(xì)胞儀的使用頻率和儀器性能狀態(tài)。參見表所示設(shè)備C不定期維護頻率。表所示設(shè)備C不定期維護頻率不定期維護推薦使用排氣泡清除樣本針堵塞清潔儀器外表面清潔樣本針長期停用時液路系統(tǒng)維護運輸前管路排空儲液臺校準(zhǔn)清潔濾光鏡片數(shù)據(jù)的變異系數(shù)偏大QC測試不通過測試中，每秒事件數(shù)過低當(dāng)天測試量較大儀器表面較臟樣本針表面有明顯樣本殘留停用2個星期以上儀器搬運前儲液瓶中液體量誤報警拔插濾光片或更換濾光片等操作后10.校正由相關(guān)設(shè)備公司技術(shù)支持人員對儀器進行校正。11.報警及處理器相關(guān)報警指示燈閃爍，儀器會發(fā)出報警音。點擊軟件界面狀態(tài)欄，關(guān)閉報警音，可查看故障對話框提供的故障名稱及故障詳細(xì)信息。選中故障的幫助信息。操作者可根據(jù)故障幫助的內(nèi)容進行故障處