哈薩克藥材別克參多糖分離純化、抗炎免疫活性及藥材質(zhì)量標準研究

哈薩克藥材別克參多糖分離純化、抗炎免疫活性及藥材質(zhì)量標準研究目的:通過提取、分離、純化獲得別克參均一多糖,對均一多糖理化性質(zhì)及一級結(jié)構(gòu)進行初步表征,為別克參藥材物質(zhì)基礎(chǔ)研究奠定基礎(chǔ);考察別克參多糖體內(nèi)、體外免疫調(diào)節(jié)及抗炎活性,為該藥材生物活性研究提供理論支持;建立別克參藥材質(zhì)量控制方法,保證該藥材臨床用藥的安全、有效、可控、穩(wěn)定。方法:（運用響應(yīng)曲面法及四因素三水平的 中心組合實驗設(shè)計方法優(yōu)化別克參多糖成分的熱水提取工藝通過 和對提取后的粗多糖進行分離純化,采用高效凝膠色譜法分析純化后均一多糖的純度及相對分子質(zhì)量 運用苯酚硫酸法、間羥聯(lián)苯法、碘顯色法、柱前衍生法測定別克參均一多糖中總糖含量、糖醛酸、淀粉含量及單糖組成;結(jié)合紅外、降解、甲基化實驗、部分酸水解及 分析初步鑒別均一多糖的結(jié)構(gòu)通過小鼠體內(nèi)碳粒廓清實驗考察別克參粗多糖對免疫低下小鼠非特異性免疫調(diào)節(jié)功能;通過二甲苯致小鼠耳腫脹、小鼠棉球肉芽腫及冰醋酸致小鼠扭體實驗考察別克參粗多糖抗炎鎮(zhèn)痛功效通過測定別克參多糖組分對 細胞活性、吞噬能力、分泌細胞因子及介質(zhì)能力的影響,考察體外免疫調(diào)節(jié)能力;通過測定別克參多糖組分對 誘導(dǎo)的 炎癥細胞分泌炎癥因子及介質(zhì)的影響考察體外抗炎能力;（藥4材）質(zhì)量標準研究:分析10批別克參藥材中水分、灰分;建立微波消解 法測定別克參中微量元素、重金屬含量的方法建立乙腈超聲萃取、 法分析別克參藥材中農(nóng)藥殘留的方法建立別克參藥材中氨基酸成分、多糖成分的薄層鑒別方法建立柱前衍生 法測定藥材中多糖含量的方法。結(jié)果:（響1應(yīng)）曲面法優(yōu)化后的別克參粗多糖提取工藝為:提取時間

提取溫度0料液比0.17與%回）歸模型預(yù)測值提取溫度0料液比0.17與%回）歸模型預(yù)測值37.4吻6合5。別克參粗多糖經(jīng)個均一多糖 、 、子量分別為 X0X0X果表明 、 、 、、 間羥聯(lián)苯法結(jié)果表明1.9%,E、SEBS、淀粉分別為0.、5果表明 、拉伯糖組成（摩爾比提取次數(shù)次。驗證試驗所得產(chǎn)率 土和 分離純化后得高效凝膠色譜法表明分、X a苯酚硫酸法結(jié)、總3糖-含1量分別為97.、89%8.、糖醛酸含量分別為 、中不含糖醛酸碘顯色法結(jié)果表明 、 含、 中未檢出淀粉柱前衍生 法結(jié)均由葡萄糖組成 主要由葡萄糖、半乳糖、阿主要由葡萄糖和半乳糖組成摩爾比：紅外、 降解、甲基化實驗、部分酸水解及 分析結(jié)果表明別克參種均一多糖的結(jié)構(gòu)具有共性種均一多糖主鏈均由-a構(gòu)成均從 位上分支出側(cè)鏈種均一多糖側(cè)鏈結(jié)構(gòu)存在不同。（3小）鼠體內(nèi)碳粒廓清實驗表明別克參粗多糖具有提高免疫抑制小鼠臟器指數(shù)及單核巨噬細胞廓清指數(shù)的能力,提示別克參多糖具有一定非特異性免疫調(diào)節(jié)功能;二甲苯致小鼠耳腫脹、小鼠棉球肉芽腫及冰醋酸致小鼠扭體實驗表明別克參粗多糖具有明顯抑制耳腫脹、降低肉芽質(zhì)量,減少扭體次數(shù)的能力,提示別克參多糖具有明顯抗炎鎮(zhèn)痛功效體外細胞實驗表明別克參粗多糖及均一多糖、、及能促進細胞增殖提高其吞噬活力上調(diào)、0及a的釋放顯現(xiàn)免疫增強作用誘導(dǎo)的細胞炎癥反應(yīng)實驗表明別克參多糖可抑制由 誘導(dǎo)的過度免疫而產(chǎn)生的-、a的分泌顯現(xiàn)抗炎效果。質(zhì)量控制方法研究建立了別克參藥材中微量金屬元素、農(nóng)藥殘留的檢查方法,建立了別克參藥材中氨基酸成分、多糖成分的薄層鑒別方法,建立了藥材中多糖成分的含量測定方法,完成藥材質(zhì)量標準草案及起草說明的撰寫。結(jié)論:（1運）用響應(yīng)曲面法提取別克參多糖,建立的模型準確可靠,可以用于別克參多糖的提取工藝 運用 和 分離純化別克參粗多糖,方法可行;純化出4種均一多糖,4種均一多糖主鏈結(jié)構(gòu)具有共性;（別3用克參多糖組分具有增強免疫力的功效,可能與別克參多糖可促進細胞增殖、增強吞噬能力及上調(diào)細胞因子及介質(zhì)有關(guān);同時,別克參多糖具有抗炎活性可能與別克參多糖可抑制由過度免疫引起的炎性因子及介質(zhì)的分泌有關(guān)。綜合分析別克參多糖的這兩種表現(xiàn),說明別克參多糖具