哈薩克藥材別克參多糖分離純化、抗炎免疫活性及藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

哈薩克藥材別克參多糖分離純化、抗炎免疫活性及藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究目的:通過(guò)提取、分離、純化獲得別克參均一多糖,對(duì)均一多糖理化性質(zhì)及一級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行初步表征,為別克參藥材物質(zhì)基礎(chǔ)研究奠定基礎(chǔ);考察別克參多糖體內(nèi)、體外免疫調(diào)節(jié)及抗炎活性,為該藥材生物活性研究提供理論支持;建立別克參藥材質(zhì)量控制方法,保證該藥材臨床用藥的安全、有效、可控、穩(wěn)定。方法:（運(yùn)用響應(yīng)曲面法及四因素三水平的 中心組合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方法優(yōu)化別克參多糖成分的熱水提取工藝通過(guò) 和對(duì)提取后的粗多糖進(jìn)行分離純化,采用高效凝膠色譜法分析純化后均一多糖的純度及相對(duì)分子質(zhì)量 運(yùn)用苯酚硫酸法、間羥聯(lián)苯法、碘顯色法、柱前衍生法測(cè)定別克參均一多糖中總糖含量、糖醛酸、淀粉含量及單糖組成;結(jié)合紅外、降解、甲基化實(shí)驗(yàn)、部分酸水解及 分析初步鑒別均一多糖的結(jié)構(gòu)通過(guò)小鼠體內(nèi)碳粒廓清實(shí)驗(yàn)考察別克參粗多糖對(duì)免疫低下小鼠非特異性免疫調(diào)節(jié)功能;通過(guò)二甲苯致小鼠耳腫脹、小鼠棉球肉芽腫及冰醋酸致小鼠扭體實(shí)驗(yàn)考察別克參粗多糖抗炎鎮(zhèn)痛功效通過(guò)測(cè)定別克參多糖組分對(duì) 細(xì)胞活性、吞噬能力、分泌細(xì)胞因子及介質(zhì)能力的影響,考察體外免疫調(diào)節(jié)能力;通過(guò)測(cè)定別克參多糖組分對(duì) 誘導(dǎo)的 炎癥細(xì)胞分泌炎癥因子及介質(zhì)的影響考察體外抗炎能力;（藥4材）質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究:分析10批別克參藥材中水分、灰分;建立微波消解 法測(cè)定別克參中微量元素、重金屬含量的方法建立乙腈超聲萃取、 法分析別克參藥材中農(nóng)藥殘留的方法建立別克參藥材中氨基酸成分、多糖成分的薄層鑒別方法建立柱前衍生 法測(cè)定藥材中多糖含量的方法。結(jié)果:（響1應(yīng)）曲面法優(yōu)化后的別克參粗多糖提取工藝為:提取時(shí)間

提取溫度0料液比0.17與%回）歸模型預(yù)測(cè)值提取溫度0料液比0.17與%回）歸模型預(yù)測(cè)值37.4吻6合5。別克參粗多糖經(jīng)個(gè)均一多糖 、 、子量分別為 X0X0X果表明 、 、 、、 間羥聯(lián)苯法結(jié)果表明1.9%,E、SEBS、淀粉分別為0.、5果表明 、拉伯糖組成（摩爾比提取次數(shù)次。驗(yàn)證試驗(yàn)所得產(chǎn)率 土和 分離純化后得高效凝膠色譜法表明分、X a苯酚硫酸法結(jié)、總3糖-含1量分別為97.、89%8.、糖醛酸含量分別為 、中不含糖醛酸碘顯色法結(jié)果表明 、 含、 中未檢出淀粉柱前衍生 法結(jié)均由葡萄糖組成 主要由葡萄糖、半乳糖、阿主要由葡萄糖和半乳糖組成摩爾比：紅外、 降解、甲基化實(shí)驗(yàn)、部分酸水解及 分析結(jié)果表明別克參種均一多糖的結(jié)構(gòu)具有共性種均一多糖主鏈均由-a構(gòu)成均從 位上分支出側(cè)鏈種均一多糖側(cè)鏈結(jié)構(gòu)存在不同。（3小）鼠體內(nèi)碳粒廓清實(shí)驗(yàn)表明別克參粗多糖具有提高免疫抑制小鼠臟器指數(shù)及單核巨噬細(xì)胞廓清指數(shù)的能力,提示別克參多糖具有一定非特異性免疫調(diào)節(jié)功能;二甲苯致小鼠耳腫脹、小鼠棉球肉芽腫及冰醋酸致小鼠扭體實(shí)驗(yàn)表明別克參粗多糖具有明顯抑制耳腫脹、降低肉芽質(zhì)量,減少扭體次數(shù)的能力,提示別克參多糖具有明顯抗炎鎮(zhèn)痛功效體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明別克參粗多糖及均一多糖、、及能促進(jìn)細(xì)胞增殖提高其吞噬活力上調(diào)、0及a的釋放顯現(xiàn)免疫增強(qiáng)作用誘導(dǎo)的細(xì)胞炎癥反應(yīng)實(shí)驗(yàn)表明別克參多糖可抑制由 誘導(dǎo)的過(guò)度免疫而產(chǎn)生的-、a的分泌顯現(xiàn)抗炎效果。質(zhì)量控制方法研究建立了別克參藥材中微量金屬元素、農(nóng)藥殘留的檢查方法,建立了別克參藥材中氨基酸成分、多糖成分的薄層鑒別方法,建立了藥材中多糖成分的含量測(cè)定方法,完成藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案及起草說(shuō)明的撰寫。結(jié)論:（1運(yùn)）用響應(yīng)曲面法提取別克參多糖,建立的模型準(zhǔn)確可靠,可以用于別克參多糖的提取工藝 運(yùn)用 和 分離純化別克參粗多糖,方法可行;純化出4種均一多糖,4種均一多糖主鏈結(jié)構(gòu)具有共性;（別3用克參多糖組分具有增強(qiáng)免疫力的功效,可能與別克參多糖可促進(jìn)細(xì)胞增殖、增強(qiáng)吞噬能力及上調(diào)細(xì)胞因子及介質(zhì)有關(guān);同時(shí),別克參多糖具有抗炎活性可能與別克參多糖可抑制由過(guò)度免疫引起的炎性因子及介質(zhì)的分泌有關(guān)。綜合分析別克參多糖的這兩種表現(xiàn),說(shuō)明別克參多糖具