血液標(biāo)本采集與血涂片制備

血液標(biāo)本采集與血涂片制備第1頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

患者劉某，男，44歲，身高173cm，體重59kg，患糖尿病5年，入院前口服多種降糖藥，血糖控制很不理想，波動(dòng)較大，電解質(zhì)常規(guī)檢查結(jié)果如下：

鈉135.9mmol/L（135~145）

鉀6.5mmol/L（3.5~5.2）

氯105.2mmol/L（96~108）

鈣2.31mmol/L（2.20~2.75）臨床基礎(chǔ)檢驗(yàn)學(xué)作為檢驗(yàn)人員，你準(zhǔn)備如何處理這份檢驗(yàn)結(jié)果？第2頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第一章血液標(biāo)本采集與血涂片制備教學(xué)內(nèi)容血液標(biāo)本的采集一血液抗凝劑及使用二血涂片的制備技術(shù)三血液細(xì)胞染色技術(shù)四第3頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月血液學(xué)檢查：反應(yīng)造血系統(tǒng)本身、機(jī)體全身或局部病變一、血液標(biāo)本的采集第4頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月全血血漿血清wholeblood：靜脈全血、動(dòng)脈全血、毛細(xì)血管全血?！局馇办o脈、腕靜脈，小兒頸靜脈、股靜脈】Plasma：抗凝后去除血細(xì)胞后的血液成分。血漿化學(xué)成分分析、凝血試驗(yàn)等。serum：血液離體自然凝固后分離出來(lái)的液體成分。臨床化學(xué)和免疫學(xué)檢測(cè)。部分檢驗(yàn)項(xiàng)目有時(shí)選擇特定的血細(xì)胞作為標(biāo)本一、血液標(biāo)本的采集第5頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1.按采血部位分：皮膚采血、靜脈采血、動(dòng)脈采血2.按采血方式分：普通采血法、真空采血法一、血液標(biāo)本的采集第6頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一、血液標(biāo)本的采集第7頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一、血液標(biāo)本的采集第8頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一、血液標(biāo)本的采集第9頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一、血液標(biāo)本的采集第10頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一、血液標(biāo)本的采集第11頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一、血液標(biāo)本的采集第12頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一、血液標(biāo)本的采集第13頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一、血液標(biāo)本的采集第14頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月皮膚采血法skinpunctureforbloodcollection皮膚采血法主要用于微量用血的檢查；成人一般選擇中指或無(wú)名指指尖內(nèi)測(cè)采血；半歲以下嬰幼兒可選擇足跟進(jìn)行采血。一、血液標(biāo)本的采集第15頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一、血液標(biāo)本的采集第16頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月激光采血法：激光發(fā)射一束波長(zhǎng)為2940nm的單脈沖的激光。細(xì)微的光束打在采血者手指的滑囊處，其瞬間溫度可達(dá)1000℃，作用時(shí)間不超過(guò)萬(wàn)分之四秒，使得皮膚表皮組織溶解、揮發(fā)，出現(xiàn)一個(gè)0.4~0.8mm的小孔。

感染機(jī)會(huì)少、痛感輕、工作強(qiáng)度低皮膚采血法skinpunctureforbloodcollection一、血液標(biāo)本的采集第17頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一、血液標(biāo)本的采集第18頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月靜脈采血法venipunctureforbloodcollection一、血液標(biāo)本的采集第19頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月負(fù)壓采血法預(yù)先添加各種添加劑，滿足臨床多種實(shí)驗(yàn)需要。無(wú)菌程度高，血液污染概率小，對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的干擾小。帶有分離膠的真空采血管可直接快速分離血清。在實(shí)驗(yàn)室間傳送方便，能避免對(duì)醫(yī)護(hù)人員的感染和患者血標(biāo)本間的交叉污染。靜脈采血法venipunctureforbloodcollection一、血液標(biāo)本的采集第20頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第21頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月真空采血負(fù)壓管頭蓋的顏色及適用范圍顏色添加成分用途藍(lán)、黑3.2%枸櫞酸鈉緩沖劑用于凝血四項(xiàng)及血沉檢查綠肝素鋰用于生物化學(xué)檢查紅無(wú)添加劑用于血清學(xué)檢驗(yàn)紫乙二胺四乙酸用于白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板等常規(guī)檢查黃無(wú)添加劑消毒容器用于血培養(yǎng)一、血液標(biāo)本的采集第22頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一、血液標(biāo)本的采集第23頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月靜脈采血法venipunctureforbloodcollection一、血液標(biāo)本的采集第24頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月兩種采血方法的優(yōu)缺點(diǎn)比較毛細(xì)血管采血靜脈采血缺點(diǎn)標(biāo)本量少，不能進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)和補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)；組織液可混入，局部炎癥可得假性結(jié)果。不同抗凝劑的使用，可能改變血液性質(zhì)，影響有形成分的形態(tài)。優(yōu)點(diǎn)價(jià)廉、快速、操作簡(jiǎn)便，標(biāo)本可直接測(cè)定標(biāo)本代表性強(qiáng)，無(wú)組織液影響，適于臨床研究，可重復(fù)實(shí)驗(yàn)和追加其他實(shí)驗(yàn)一、血液標(biāo)本的采集第25頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月適用于動(dòng)脈血血?dú)夥治?氧含量，二氧化碳含量，動(dòng)脈血酸堿平衡等)；穿刺部位：橈動(dòng)脈、股動(dòng)脈、肱動(dòng)脈；注意事項(xiàng)：隔絕空氣、立即送檢。動(dòng)脈采血法Arterialpunctureforbloodcollection一、血液標(biāo)本的采集第26頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月血液標(biāo)本的處理、運(yùn)送與保存視每一份標(biāo)本為無(wú)法重復(fù)獲得、唯一的標(biāo)本；標(biāo)本信息的完整性------唯一標(biāo)識(shí)原則；視所有的標(biāo)本都有傳染性------生物安全原則；對(duì)標(biāo)本進(jìn)行及時(shí)處理；不合格血液標(biāo)本拒收------溶血、凝血標(biāo)本；血液采集容器不當(dāng)；采血量不足；標(biāo)本污染、容器破損。一、血液標(biāo)本的采集第27頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月患者情況采血時(shí)間采血部位溶血情況標(biāo)本處理結(jié)果分析血液采集的質(zhì)量控制一、血液標(biāo)本的采集第28頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月檢驗(yàn)項(xiàng)目紅細(xì)胞內(nèi)濃度與血清的比值1%紅細(xì)胞溶血引起血清濃度的變化（%）LD160:1+272.5AST40:1+220.0鉀23:1+24.4ALT6.7:1+55.0溶血引起血液成分濃度或活性變化一、血液標(biāo)本的采集第29頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、血液抗凝劑及使用血液凝固機(jī)制第30頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月抗凝原理：螯合鈣離子使用方法：EDTAK2·2H2O1.5~2.2mg/ml血液適用范圍：對(duì)血細(xì)胞形態(tài)和血小板計(jì)數(shù)影響小---適合于多項(xiàng)血液學(xué)檢查；影響血小板聚集---不宜用做凝血象檢驗(yàn)及血小板功能檢驗(yàn)。乙二胺四乙酸（EDTA）鹽二、血液抗凝劑及使用第31頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月常用的有草酸鈉、草酸鉀和草酸銨?？鼓恚候镶}離子，草酸鈣沉淀使用方法：0.1mol/L與血液1：9混合

適用范圍：止凝血檢驗(yàn),不適合作細(xì)胞形態(tài)分析的抗凝劑草酸鹽二、血液抗凝劑及使用第32頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月抗凝原理：草酸鈣沉淀使用方法：草酸鉀0.8g＋草酸銨1.2g（100ml）與血液1：10混合（80℃以下烘干）。適用范圍：紅細(xì)胞檢驗(yàn)（紅細(xì)胞比積、計(jì)數(shù)），不適于血小板計(jì)數(shù)和白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)雙草酸鹽二、血液抗凝劑及使用第33頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月肝素為一種含硫酸基團(tuán)的粘多糖；抗凝原理：抑制因子Ⅸa、Ⅷ和PF3之間的作用，加強(qiáng)抗凝血酶Ⅲ滅活絲氨酸蛋白酶，從而阻止凝血酶形成，還能抑制凝血酶的自我催化及抑制因子Ⅹ的作用。使用方法：每毫升血液（15±2.5）U肝素二、血液抗凝劑及使用第34頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月優(yōu)點(diǎn)：抗凝能力強(qiáng)、不影響血細(xì)胞體積、不易溶血、能耐高溫。適用范圍：紅細(xì)胞檢驗(yàn)（紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白測(cè)定、紅細(xì)胞比積）和多種生化分析。肝素二、血液抗凝劑及使用第35頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月抗凝原理：螯合鈣離子使用方法：109mmol/L濃度與血液1：9混合適用范圍：止凝血檢驗(yàn)、血沉、輸血保養(yǎng)液（毒性弱）枸櫞酸鈉二、血液抗凝劑及使用第36頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月常用抗凝劑的抗凝原理及優(yōu)缺點(diǎn)抗凝劑種類(lèi)抗凝原理優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)EDTA與鈣離子螯合對(duì)血細(xì)胞形態(tài)和血小板計(jì)數(shù)影響很少。EDTAK2適合于全血細(xì)胞分析和血細(xì)胞比容測(cè)定不適合于做凝血象檢查和血小板功能實(shí)驗(yàn)雙草酸鹽與鈣離子螯合草酸銨和草酸鉀(鈉)適當(dāng)比例混合后，不影響紅細(xì)胞形態(tài)和大小干擾血漿中的離子和酶的測(cè)定肝素阻止凝血酶形成抗凝能力強(qiáng)，適用于紅細(xì)胞檢驗(yàn)和多種生化分析引起白細(xì)胞聚集染色時(shí)產(chǎn)生藍(lán)色背景枸櫞酸鹽與鈣離子螯合用于紅細(xì)胞沉降率和凝血功能測(cè)定，也可以作為輸血保養(yǎng)液成分抗凝力較弱，溶解度較低二、血液抗凝劑及使用第37頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月脫纖維蛋白法：血液注入有玻璃珠的器皿中，轉(zhuǎn)動(dòng)，纖維蛋白纏繞凝固于玻璃球，從而阻止血凝塊形成。適用于免疫學(xué)檢驗(yàn)和紅斑狼瘡細(xì)胞檢查。物理方法抗凝二、血液抗凝劑及使用第38頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月血涂片制備主要用于血液細(xì)胞學(xué)檢查、網(wǎng)織紅細(xì)胞檢查和寄生蟲(chóng)學(xué)檢查。三、血涂片的制備技術(shù)第39頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月三、血涂片的制備三、血涂片的制備技術(shù)手工法制備第40頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月儀器法制備三、血涂片的制備技術(shù)第41頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月厚薄適宜頭體尾分明細(xì)胞完整邊緣整齊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)三、血涂片的制備技術(shù)第42頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月血涂片質(zhì)量評(píng)價(jià)頭體尾

分明厚

薄

均

勻長(zhǎng)

度

適

中三、血涂片的制備技術(shù)第43頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月血涂片觀察區(qū)域選擇三、血涂片的制備技術(shù)第44頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月四、血液細(xì)胞染色技術(shù)經(jīng)過(guò)染色后,血液細(xì)胞及其主要結(jié)構(gòu)染上不同的顏色，便于顯微鏡下觀察細(xì)胞的內(nèi)部結(jié)構(gòu)，正確識(shí)別各種細(xì)胞及其異常變化。第45頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月普通染色細(xì)胞化學(xué)染色免疫組化染色熒光染色四、血液細(xì)胞染色技術(shù)第46頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月堿性染料：為陽(yáng)離子染料，能接受質(zhì)子,與細(xì)胞內(nèi)酸性成分結(jié)合,是染胞核的染料。如亞甲藍(lán)、天青。酸性染料：為陰離子染料，能釋放質(zhì)子。主要有熒烷-氧雜蒽染料和偶氮染料兩類(lèi)，能結(jié)合細(xì)胞的堿性成分并染色，如血紅蛋白、嗜酸性顆粒成分等。復(fù)合染料：同時(shí)具有陰、陽(yáng)離子型的染料如瑞氏染料。染料分類(lèi)四、血液細(xì)胞染色技術(shù)第47頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月瑞氏染色瑞氏染液由酸性染料伊紅和堿性染料亞甲藍(lán)溶解于甲醇而成。酸性染料伊紅與血細(xì)胞中的堿性物質(zhì)結(jié)合染成紅色，如紅細(xì)胞中的血紅蛋白及嗜酸性粒細(xì)胞的嗜酸性顆粒。堿性染料亞甲藍(lán)與血細(xì)胞中的酸性物質(zhì)結(jié)合染成藍(lán)色，如淋巴細(xì)胞及嗜堿性粒細(xì)胞的嗜堿性顆粒等。四、血液細(xì)胞染色技術(shù)第48頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月Wright染液：瑞氏染粉0.1g，甲醇60.0ml；甲醇有強(qiáng)大的脫水力，可將細(xì)胞形態(tài)固定，并使蛋白質(zhì)沉淀為顆粒狀、網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)等，增加細(xì)胞與染料接觸表面積，提高對(duì)染料的吸附作用，增強(qiáng)染色效果。磷酸鹽緩沖液（pH6.4～6.8）：維持染色過(guò)程的pH值。瑞氏染色四、血液細(xì)胞染色技術(shù)第49頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月用蠟筆在血膜兩頭劃線，平放于染色架上。加瑞氏染液覆蓋血膜，固定1min。滴加等量或稍多的緩沖液，混勻，染色5-10mins。用清水沖洗，待干后鏡檢。瑞氏染色四、血液細(xì)胞染色技術(shù)第50頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月影響瑞氏染色效果的一些因素:染料放置時(shí)間；溶液的酸堿度；染色時(shí)間與染液濃度、室溫及細(xì)胞多少有關(guān)。

瑞氏染色四、血液細(xì)胞染色技術(shù)第51頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月四、血液細(xì)胞染色技術(shù)第52頁(yè)，課件共55頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月基本