DNA重組及重組DNA技術(shù)培訓(xùn)教材

生物化學(xué)與分子生物學(xué)

DNA重組和重組DNA技術(shù)DNARecombinationandRecombinantDNAtechnology第二十一章DNA重組（DNArecombination）是指不同DNA分子斷裂和連接而產(chǎn)生DNA片段的交換并重新組合形成新DNA分子的過程。重組DNA技術(shù)（recombinantDNAtechnology）是指在體外將兩個或兩個以上DNA分子重新組合并在適當細胞中增殖形成新DNA分子的過程。第踏一耐節(jié)自際然蕩界D康N彼A重劍組外和們基專因真轉(zhuǎn)紙移D物N訂A末R忘e夠c鑒o寺m蠟b軟i煉n秩a油t腸i療o湯na爪n犬d粗G肆e垮n怒e片T示r賴a嬌n冬s掉f痰e派r禁i蝴n撐N殿a潮t買u幫r萍eD春N匙A重慢組同始源肅重貌組(味h率o捕m摸o絡(luò)l臥o任g如o毒u敞s倆r辟e召c驕o基m價b魄i羽n狐a凍t丹i怠o洗n拐)位隱點遇特喇異進的吧重小組(丈s富i背t副e準-防s連p端e股c板i佛f斃i火c墨r律e傳c躁o滋m位b健i趟n殿a央t釘i稼o極n喜)轉(zhuǎn)法座姐重搶組(般t詢r梨a賓n示s預(yù)p父o怕s水i裝t照i燒o蘆n覽r罰e夠c顛o旺m換b丑i見n規(guī)a窗t悠i多o廁n完)接偷合服作蒜用(懂c遍o新n請j與u著g死a遮t許i底o果n聯(lián))轉(zhuǎn)吉化掙作謙用(色t剖r鑄a叢n牧s造f賴o添r共m例a每t替i減o尺n挪)轉(zhuǎn)栗導(dǎo)蝴作既用(皮t絮r世a克n哈s攏d狠u辣c堪t溪i買o癢n劣)發(fā)押生運在角同底源云序沸列削間犬的告重鞭組鼠稱寬為同爛源溝重棟組(撿h唇o晝m緒o訂l料o巡壽g顯o扎u男s飯r勻e恒c銳o怖m(xù)魔b務(wù)i洽n辱a填t觀i拜o防n船)，又心稱基把本唇重捆組輛（g臨e臨n餅e釀r朱a借l角r羽e次c慮o字m無b貞i翠n啟a幻玉t慈i碑o堪n）。查是確最測基元本戚的D盜N徒A重需組性方惡式釣，蹈通涂過箱鏈另的槍斷版裂志和梳再纏連槽接積，悟在午兩弊個D右N蓋A分撥子朗同漂源尸序使列文間叉進圾行埋單繼鏈弟或棟雙輸鏈蝴片弱段是的蓄交腐換編。以E聚.濾c伐o騰l御i的遇同階源索重貢組殘為嫌例癥，悅了什解蘋同喝源隊重歲組鼓機雀制笨的H洲o庸l鄙l庫i助d吉a統(tǒng)y模鉆型一順、激同陷源下重辮組疏是再最詢基薦本衣的D環(huán)N猾A重射組獲方轟式H晚o溪l掀l晉i塌d鑰a譽y模潮型芝的4個棟關(guān)友鍵潑步光驟腫：兩浩個嫩同階源僑染專色異體D疏N列A排諸列餡整四齊交；片段重組體(patchrecombinant)拼接重組體(splicerecombinant)一料個D陰N菊A的脅一擊條建鏈飯斷構(gòu)裂洪、助并適與焰另紗一究個D培N峽A對徑應(yīng)蹦的爪鏈母連助接靠，栽形支成H解o駱l隔l結(jié)i架d乞a誰y中譯間閣體班；通刺過避分脫支由移貼動駛產(chǎn)孫生柔異培源飄雙漠鏈D孩N驅(qū)A；H答o我l盟l廢i糞d音a京y中釘間旅體吼切要開冒并傅修言復(fù)類，蹦形層成上兩伯個縫雙樸鏈炎重裂組字體D莫N賀A，罪分露別累為非：片當段噴重騰組石體切針開夠的狗鏈跟與街原瓣來凍斷宋裂櫻的稈是泉同捏一廢條憐鏈婦，勉重負組章體砌含旁有槽一巧段握異規(guī)源輸雙居鏈抽區(qū)渾，叫其霧兩京側(cè)魄來糾自碌同微一甘親追本D躺N栽A。拼證接被重免組愚體切尊開險的箏鏈躁并賠非燭原語來治斷無裂御的馬鏈晉，輩重慘組蕩體凱異魔源誕雙毛鏈主區(qū)饒的里兩標側(cè)赴來棗自案不附同足親賊本D上N訓(xùn)A。參岡與聚細洪菌D抖N游A同各源辨重鐮組會的佳酶協(xié)有導(dǎo)數(shù)束十巴種煙，秋其刻中唉最遲關(guān)紐奉鍵念的言是R也e鍵c繳A蛋蝴白、R變e堡c及B膠C譜D復(fù)異合喇物和R吼u屯v培C蛋福白。R汗e樹c敲B烘C津D復(fù)偵合衛(wèi)物具尼有求三招種呆酶扣活炎性罩，揚即的依疏賴追于A謹T股P的榆核純酸太外嫩切孝酶旁活渴性日、成可屈被A贈T章P增傷強見的班核識酸礎(chǔ)內(nèi)殿切翅酶達活停性黎以鉗及尋需忠要A膜T冤P的冊解膊螺淡旋煌酶違活騾性值。R叔e露c件A蛋教白可既結(jié)丈合蓄單艙鏈D熔N譽A（s荒s匠D喚N罵A）圖，畏形委成R懷e御c繞A律-弊s顯s撓D甜N弊A復(fù)膚合誼物但。R設(shè)u劈燕v確C有響內(nèi)左切蹄酶葉活巧性繡，乏能芹專死一叫性吉識鈴別H鵲o桑l勒l稍i腫d安a守y連胡接編點斑，順并癥有足選妙擇垮地恩切心開銜同進源供重佛組既體況的油中練間噴體殖。

內(nèi)切酶

(recBCD)DNA侵擾(recA)分支遷移

(recA)

內(nèi)切酶(recBCD)

DNA

連接酶5′3′5′3′5′3′5′3′5′3′5′3′5′3′5′3′5′3′5′3′5′3′5′3′5′3′5′3′3′3′5′3′5′3′3′5′5′3′5′3′5′3′H魄o互l攤l數(shù)i恢d雨a旁y中技間豬體5′3′5′3′5′3′5′3′Holliday中間體5′3′5′3′5′3′5′3′5杜′5′3′5′5′3′3′3′3′5′5′5′5′3′3′3′3′5′5′5′5′3′3′3′5′5′5′5′3′3′3′3′5′5′5′5′3′3′3′3′內(nèi)切酶(ruvC)內(nèi)切酶(ruvC)DNA連接酶DNA連接酶拼泳接重肅組廟體片宣段重爭組國體二巾、誰位廈點少特堂異疤重盾組千是陳發(fā)突生挪在惡特訪異物位血點差間愚的D天N媽A整槽合位墳點江特捕異葛重美組(柳s陡i咐t林e辮-章s賊p隊e思c嘉i防f非i青c孫r脂e輸c肝o供m優(yōu)b礎(chǔ)i技n促a祖t跑i溉o箱n協(xié))是匹由鍵整瓦合歌酶壓催靜化敏，暑在籠兩砍個D艙N坡A序幻玉列壁的識特暮異掌位僻點酬間埋發(fā)紗生罵的避整辮合貴。λ噬交菌禾體園的牢整帝合聽酶扛識圓別美噬昨菌歲體摟和獲宿織主班染騰色差體腳的弄特樹異污靶插位研點快發(fā)舍生計選評擇煙性煌整州合蹈；遞反麥轉(zhuǎn)臟錄障病沾毒漁整刊合夠酶喉可賤特那異露地糕識典別鵝、村整疏合叢反基轉(zhuǎn)況錄飲病倍毒c吃D專N賣A的長鹿末嬌端蹤蝶重敘復(fù)奴序霞列(榆l戀o堤n智g候t臥e寫r燥m芳i償n忽a翻l帶r張e姥p宇e逃a宣t案,瞞L子T送R傷)。（櫻一堡）λ噬汁菌鬼體D非N謊A的眼整柴合（照二繼）近細蛾菌晉的哄特雪異肯位只點戚重桂組沙州門去氏歲菌H片老段著倒抄位破決兄定路鞭經(jīng)毛覺相碰轉(zhuǎn)凳變斜。h燒i奔x為健反累向漸重雞復(fù)戀序鉛列摟，示它轎們布之禽間澆的H片刷段捏可滿在H顏i孟n控毫制競下痕進介行籮特登異治位獻點白重沈組(倒闖位)。H片裙段擊上暢有存兩阻個阻啟源動哀子P，吩其穴一艇驅(qū)忘動h派i題n基枯因桿表錦達黃，釘另涉一足正測向剝時攀驅(qū)霉動H止2和r草H腹1基滅因穴表衛(wèi)達胖，警反冷向(倒鋒位)時H威2和r愛H獲1不買表素達蘇。r致H辟1為H香1的雕阻淡遏伸蛋花白球基素因孕。H2鞭毛素

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DNA序列分析；④填補3末端Klenow片段又名DNA聚合酶I大片段，具有完整DNA聚合酶I的53聚合、35外切活性，而無53外切活性。常用于cDNA第二鏈合成，雙鏈DNA3末端標記等反轉(zhuǎn)錄酶①合成cDNA；②替代DNA聚合酶I進行填補，標記或DNA序列分析多聚核苷酸激酶催化多聚核苷酸5羥基末端磷酸化，或標記探針末端轉(zhuǎn)移酶在3羥基末端進行同質(zhì)多聚物加尾堿性磷酸酶切除末端磷酸基限立制聚性西核篩酸素內(nèi)涼切歸酶(r妨e憶s傅t收r斑i蠢c胞t驕i免o時n假e反n揚d壩o滋n拐u理c盈l佩e重a屯s江e切)限扣制專性多核隊酸鉆內(nèi)撿切訊酶(輔r礎(chǔ)e碗s默t行r到i菌c諒t爬i站o恩n厚e尿n經(jīng)d顆o忽n看u濤c舒l臣e蠢a教s甩e姜,隊R肚E爭)是韻一壯類溉核倘酸掩內(nèi)耗切逆酶追，籌能師識賺別至雙括鏈D信N障A分宰子岡內(nèi)支部爪的替特壯異享序纖列,并杏裂武解爛磷挨酸灰二鎖酯嫌鍵嗚。GGATCCCCTAGGGCCTAGGATCCG+B法a蒼mH號Ⅰ定喪義福：與墊甲供基烤化日酶枝共耽同醉構(gòu)芬成猛細炊菌掩的城限毒制基修株飾提系隊統(tǒng)倘，脹限典制鞋外擠源D皆N拋A，儉保摟護慚自框身D懼N久A。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ（企基樓因鞭工念程幼技邁術(shù)羨中厘常營用Ⅱ型肅）分因類題：作謊用頁：第賠一潑個轟字穿母勸取隱自潛產(chǎn)治生竿該仍酶財?shù)臅r細付菌叢屬師名惠，倉用松大亭寫標；第川二祥、化第葛三擴個亦字哭母凡是打該項細積菌踩的愉種覽名矮，鄰用著小顧寫受；第限四絮個由字與母列代丸表育株丸；用芒羅更馬蕉數(shù)盲字炊表的示箏發(fā)快現(xiàn)慈的挖先理后駕次踢序景。命悼名改：Hi羞ndⅢ

屬

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GATCTA同螞尾兄酶來雖源姐不集同推的境限椅制投酶贊，局但掘能巨識壁別覆和描切銷割絡(luò)同饑一弱位共點光，邊這竟些掀酶虛稱同誘裂辯酶剪或獸同母功鍛異謎源留酶。GGATCCCCTAGGGCCTAGGATCCG+B啟a樂mH且ⅠGGATCCCCTAGGGCCTAGGATCCG+B閘s堵tⅠ同凝裂冰酶敬：名稱識別序列及切割位點名稱識別序列及切割點切割后產(chǎn)生５’突出末端:BamHⅠ5’…G▼GATCC...3’BglⅡ

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雙鏈cDNA重組DNA分子cDNA文庫

反轉(zhuǎn)錄酶載體受體菌復(fù)制從c滴D支N役A文賽庫劉獲考取有目乞的泰基磨因逆轉(zhuǎn)錄酶AAAA

TTTTAAAASI核酸酶

DNA聚合酶Ⅰ堿水解

TTTT（虎二投）獻載驅(qū)體繩的求選鞋擇佛與謀構(gòu)原建—輕—選目霧的固不煤同巴，張操劫作失基銜因載的怕性受質(zhì)機不虹同妹，瞞載壯體盟的基選萍擇趙和血改抗建譯方胃法費也搶不壤同插。目腫的保：①悼獲守得雪某曠一閃目庫的料基朗因謹或D政N脫A片筍段②杠獲封得艷目泥的D完N減A片詢段因所株編狡碼宇的宇蛋酬白氏質(zhì)載體插入DNA片段宿主細胞質(zhì)粒<5~10kb細菌，酵母λ噬菌體載體~20kb細菌黏粒~50kb細菌BAC~400kb細菌YAC~3Mb酵母不讓同朗載再體害的如克鍵隆錘容宮量標及基適際宜拒宿臉主鄉(xiāng)豐細話胞（咬三標）編目辮的D卻N貞A與豎載割體袋連煙接—版—接方守式肚：輸（1）單憂一趁相緣瑞同套黏愉端醉連欺接（2）不煌同鬼黏鄉(xiāng)豐端稀連眠接（3）通膚過幟其腿他聽措震施姑產(chǎn)求生濾黏聚端挺進盾行川連倘接黏回端薦連既接B褲a竟mH俗Ⅰ切殘割尋反肯應(yīng)

GGATCCCCTAGGT洋4D蕉N剪A連聚接牛酶1逗5o裁CGATCCGGCCTAG+目的基因用BamHⅠ切割載體DNA用BamHⅠ切割重組體載體自連目的基因自連單孫一盈相縣同鉆黏刃端樣連喜接不把同乞黏非端歉連倆接仰（吩定紐奉向村克留隆謝）EcoRⅠ切割位點Bg

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T(T)nT3′5′5′

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A(A)nA3′5′λ-核酸外切酶λ-核酸外切酶末端轉(zhuǎn)移酶+dATP末端轉(zhuǎn)移酶+dTTPT(T)nTA(A)nAA(A)nAT(T)nTT4

DNA連接酶15oC重組體5′P鞏C桃R法針造對染目戰(zhàn)的D澇N色A的5-和3-端礦，竄設(shè)愿計杠一播對等特晉異嶺引錦物綿，猶在濫每自條枯引泳物像的5-端止分喚別顧加忘上終不櫻同草的R悄E位豎點等，問然銷后斗以貿(mào)目土的D魚N烘A為練模診板糟，帳經(jīng)P閘C漸R擴子增竿便恥可少得是到磚帶首有聾引展物強序潤列匹的筑目茫的D熄N棄A，騙再拉用螞相坑應(yīng)R牌E切釘割P夸C賣R產(chǎn)朱物愿，請產(chǎn)額生敞黏姑端四，臥隨型后匯便晌可砍與蕉帶領(lǐng)有竭相俯同釋黏銳端絮的淺線鴉性榴化活載累體擴進層行球有異效蠅連都接蝴。平切端鮮連艘接限湯制焦性青內(nèi)鐘切申酶煉切婚割給產(chǎn)桐生啊的命平門端粘項端音補貫齊金或掉切眼平柴形屋成涌的還平耍端適斯用煩于抹：目的基因載體限制性內(nèi)切酶限制性內(nèi)切酶T4DNA連接酶15oC重組體載體自連目的基因自連3郊.粘-平僚末乏端康連誕接黏-平揮末由端節(jié)連罵接論是奸指奏目悄的D定N優(yōu)A和區(qū)載句體觀之證間憂通構(gòu)過更一央端臟為常黏嫁端掩、渾另室一公端開為喪平心端拾的榮方罷式浩進小行沒連例接瓦。屬花于友定燭向掘克票隆受慮體糧菌謀條懇件丟：安蘭全釋宿袍主殃菌限鄭制療酶蹲和抓重烘組終酶聯(lián)缺那陷處慎于揭感鴉受市態(tài)(吧c尊o觸m址p旦e終t口e痛n寨t損)導(dǎo)拔入過方略式障：轉(zhuǎn)除化(揮t情r窯a攔n釣s外f脹o京r建m奴a堂t勺i卸o茅n仗)轉(zhuǎn)匪染(齊t醒r伶a宅n房誠s沾f耐e令c合t嚇i編o峰n貝)感祝染(運i薪n預(yù)f谷e樂c做t比i龜o堅n殺)（享四醒）妖重兇組D擊N洞A轉(zhuǎn)刮入妖受序體請細滑胞—劫—轉(zhuǎn)1粉.借賊助虧載替體展上鴿的色遺奶傳番標類志駛進渴行受篩嶺選(殺1冊)利獲用費抗竹生乎素斤抗顛性可標膽志講篩階選(發(fā)2禍)利氧用苦基翁因偉的和插翅入離失逢活/插搶入黑表朱達特牙性認篩極選(除3暢)利現(xiàn)用任標撓志侄補渴救嘩篩印選(型4茶)利近用