農(nóng)藥殘留檢測(cè)剖析技術(shù)進(jìn)展

農(nóng)藥殘留檢測(cè)剖析技術(shù)進(jìn)展農(nóng)藥殘留檢測(cè)分析技術(shù)進(jìn)展Developmentofthetechnologyforanalysisofpesticideresidues農(nóng)藥殘留樣品采集樣品制備農(nóng)藥殘留測(cè)定農(nóng)藥殘留分析的質(zhì)量控制國(guó)內(nèi)外現(xiàn)狀農(nóng)藥殘留樣品的采集

樣品種類取樣方法樣品包裝、記錄和貯存樣品預(yù)處理樣品種類主觀樣品為研究農(nóng)藥殘留量與各種因素的關(guān)系，從設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)區(qū)域內(nèi)采集的樣品?？陀^樣品監(jiān)測(cè)樣品和執(zhí)法樣品，測(cè)定的農(nóng)藥殘留種類是未知的或施藥背景不清楚的樣品。

實(shí)驗(yàn)室樣品從群體采集的送到殘留分析實(shí)驗(yàn)室的樣品；

檢測(cè)樣品實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過(guò)縮分減量或經(jīng)過(guò)精制后的樣品；

檢測(cè)樣份從檢測(cè)樣品中稱取的用于分析的樣品；

檢測(cè)溶液經(jīng)過(guò)提取、凈化后進(jìn)入待測(cè)狀態(tài)。取樣原則

①代表性②方法與目的保持一致③精度要求④防止化學(xué)變化或丟失⑤防止污染取樣方法取樣方法

①靜態(tài)群體中取樣②靜態(tài)群體中取樣農(nóng)藥殘留田間試驗(yàn)及取樣

①農(nóng)藥殘留田間試驗(yàn)的目的和要求②農(nóng)藥殘留田間試驗(yàn)的內(nèi)容a、農(nóng)藥殘留動(dòng)態(tài)試驗(yàn)b、施藥因素與最終殘留量水平相關(guān)性c、農(nóng)藥殘留田間試驗(yàn)樣品的采集商品取樣分類

①監(jiān)測(cè)調(diào)查取樣：隨機(jī)、概率、分布水平②執(zhí)法取樣：強(qiáng)制性、超標(biāo)與否商品取樣量要求

①小的或輕的產(chǎn)品→1.0~1.5Kg②中等大小產(chǎn)品→2.0~2.5Kg③大的產(chǎn)品→4.0~5.0Kg④肉、禽、魚→1.0~1.5Kg⑤谷物和制品→0.5~1.0Kg

不同樣品的采集要求

①根莖類蔬菜→采集整個(gè)果實(shí)②葉類蔬菜→除去腐爛和枯萎部分③豆類→整個(gè)果實(shí)④果類蔬菜→去除莖部⑤谷物→整個(gè)籽粒⑥肉類→整體

樣品制備

第一節(jié)溶劑萃取技術(shù)第二節(jié)固相萃取技術(shù)第三節(jié)蒸餾及濃縮技術(shù)第四節(jié)微波；衍生化；超臨界萃取技術(shù)樣品制備

①制備過(guò)程中避免組分發(fā)生化學(xué)變化；②要防止和避免欲測(cè)定組分的沾污；③盡可能減少無(wú)關(guān)化合物引入制備過(guò)程；④盡可能簡(jiǎn)單易行。樣品處理的原則三、樣品制備原理利用殘留農(nóng)藥與樣品基質(zhì)的物理化學(xué)差異，使其從檢測(cè)系統(tǒng)有干擾作用的樣品基質(zhì)中提取分離出來(lái)（相似相溶）。

極性-溶解度、分配系數(shù)；揮發(fā)性-蒸汽壓。極性溶劑強(qiáng)度溶劑溶解度（20～25℃）溶劑在水中（%）水在溶劑中（%）非極性強(qiáng)反相弱正相正己烷0.000950.0111異辛烷微溶微溶四鹵化碳0.0770.010三鹵甲烷0.8150.072二鹵甲烷2-四氫呋喃任意混溶任意混溶乙醚6.041.468乙酸乙酯8.082.94丙酮任意混溶任意混溶乙腈任意混溶任意混溶異丙醇任意混溶任意混溶甲醇任意混溶任意混溶水任意混溶任意混溶極性弱反相強(qiáng)正相醋酸任意混溶任意混溶常用樣品制備技術(shù)溶劑萃取蒸餾技術(shù)固相萃取微波萃取衍生化超臨界萃取樣品制備第一節(jié)溶劑萃取技術(shù)樣品制備

索氏萃取裝置和K-D濃縮器產(chǎn)生乳化的原因由于液-液萃取過(guò)程中劇烈振動(dòng)，經(jīng)常發(fā)生乳化現(xiàn)象，特別是那些含脂肪的樣品。原因：體系的性質(zhì)、離子濃度、有機(jī)相粘度、萃取溫度、pH等。溫度越低，有機(jī)相粘度越大，離子濃度越高越易產(chǎn)生乳化。破乳的常用方法通過(guò)改變KD;改變?nèi)軇┗蚧瘜W(xué)平衡作用的添加劑;緩沖劑調(diào)節(jié)pH;鹽調(diào)節(jié)離子強(qiáng)度等。①離心法破乳。2000r／min，2min；②無(wú)水硫酸鈉研磨法破乳；③蒸干法，蒸干后，再用有機(jī)溶劑萃取。不適用揮發(fā)性物質(zhì)的萃取。A、高度乳化（即全部乳化）B、中度乳化（乳化率達(dá)50％）①電解質(zhì)破乳。加入無(wú)機(jī)鹽，通過(guò)提高體系中水相的比重使兩相分層；破乳率與加入電解質(zhì)的量成正比。②lmol／L的鹽酸；③無(wú)水乙醇溶解兩相液滴；④無(wú)水硫酸鈉漏斗過(guò)濾。C、輕度乳化（兩相間形成一薄乳化層）①玻璃棒攪動(dòng)，削弱吸附作用；②靜置一定的時(shí)間后，可自然分層。

因?yàn)槿闈嵋菏且后w雜質(zhì)以微小珠滴散布在液體溶劑中一種分散體系，熱力學(xué)不穩(wěn)定體系。固相萃取技術(shù)樣品制備

SPE：SolidPhaseExtraction利用固體吸附劑將液體樣品中的目標(biāo)化合物與干擾化合物分離，達(dá)到分離和富集目標(biāo)化合物的目的。慢中等快淋洗液固相萃取的模式及原理反相固相萃取正相固相萃取離子交換固相萃取①陰離子交換②陽(yáng)離子交換（一）、反相固相萃取流動(dòng)相：極性（水溶液）或中等極性固定相：非極性。分離對(duì)象：中等到非極性物質(zhì)。分析物CH鍵+硅膠表面官能團(tuán)→吸附→極性溶液中的有機(jī)分析物→保留在SPE。用非極性溶劑解吸吸附在固定相中的目標(biāo)物質(zhì)。1、反相固相萃取原理2、常用反相固相萃取柱LC-18、LC-8：標(biāo)準(zhǔn)的單鍵合硅膠ENVI-18、ENVI-8：聚合鍵合類填料ENVI-ChromP：苯乙烯：疏水ENVI-Carb：含碳（二）、正相固相萃取流動(dòng)相：非極性、中等極性固定相：極性。分析物質(zhì)：極性、中等極性、非極性①極性官能團(tuán)鍵合硅膠LC-CN，LC-NH2，

LC-Diol②極性吸附物質(zhì)LC-Si，LC-Florisil，ENVI-Florisil，LC-Alumina常用正相固相萃取柱（三）、離子交換固相萃取適用于帶有電荷的化合物（水溶液、有機(jī)溶液）原理：靜電吸引，化合物上的帶電荷基團(tuán)與鍵合硅膠上的帶電荷基團(tuán)之間的吸引分為：陰離子交換和陽(yáng)離子交換1、陰離子（負(fù)電荷）交換LC-SAX、LC-NH2：脂肪族季銨類鹽+硅膠2、陽(yáng)離子交換LC-SCX：磺酸基；LC-WCX：羧酸基團(tuán)SPE分離機(jī)制與溶劑的選擇分離機(jī)制典型的弱溶劑（保留條件）典型的強(qiáng)溶劑（洗脫條件）反相SPE緩沖液或低濃度的甲醇或乙腈乙腈、甲醇或溶劑與水的混合物正相SPE正己烷、甲苯等二氯甲烷、甲醇等陽(yáng)離子交換SPE低離子強(qiáng)度緩沖液(<0.1mol/L)高離子強(qiáng)度緩沖液（＞0.1mol/L)低反離子強(qiáng)度高反離子強(qiáng)度陰性離子交換SPE低離子強(qiáng)度緩沖液（<0.1mol/L)高離子強(qiáng)度緩沖液(>0.1mol/L)固相微萃取裝置使用方法氣體萃?。斂占夹g(shù)）取樣品基質(zhì)（液體和固體）上方的氣相部分進(jìn)行色譜分析。用途：痕量高揮發(fā)性物質(zhì)的分析測(cè)定，氣體是揮發(fā)性物質(zhì)的最理想的溶劑。靜態(tài)頂空：在一個(gè)密閉的容器中，樣品與樣品上方氣體（1/2）達(dá)到平衡。動(dòng)態(tài)頂空：“連續(xù)氣體萃取”方法，不必兩相達(dá)到平衡。經(jīng)捕集濃縮后進(jìn)行測(cè)定。靜態(tài)頂空過(guò)程動(dòng)態(tài)頂空過(guò)程捕集阱中捕集濃縮?！昂婵尽保狠d氣的流動(dòng)方向與熱解吸時(shí)的流動(dòng)方向相反。超臨界萃取技術(shù)超聲波輔助萃取能量→外部向內(nèi)部→傳遞。超聲波使溶液形成氣泡（空化效應(yīng)）→爆裂→溫度和壓力↑，→增強(qiáng)化學(xué)反應(yīng)能力。生物大分子的細(xì)胞破碎與蛋白質(zhì)的去除細(xì)胞的破碎方法物理法（物理作用）①反復(fù)凍融法：－15~－20℃。②冷熱交替法：90℃（數(shù)分鐘）→冷卻。③超聲波處理法：用于微生物。④加壓破碎法：化學(xué)及生物化學(xué)法①自溶法：在一定條件（pH、溫度），利用自身的酶系將細(xì)胞破壞。②溶菌酶處理：具有專一地破壞細(xì)菌細(xì)胞壁的功能。Antifungalactivity例：溶菌酶處理蛋白質(zhì)的去除目的：蛋白質(zhì)的存在，常常嚴(yán)重干擾分析1、加熱法2、鹽析法3、膜分離法4、高速離心5、有機(jī)溶劑沉淀法加熱法90℃→離心或過(guò)濾→除去熱變性蛋白。鹽析法原理：利用不同蛋白質(zhì)在高濃度的鹽溶液中溶解度不同程度的降低來(lái)沉淀除去蛋白質(zhì)。鹽濃度蛋白質(zhì)溶解度鹽溶作用鹽析作用膜分離法超濾：靠薄膜兩側(cè)壓力差分離小分子化合物大分子蛋白質(zhì)高速離心靠物質(zhì)沉降系數(shù)、質(zhì)量、浮力因子等不同進(jìn)行分離小中大凈化（純化）樣品經(jīng)萃取→被測(cè)成分→萃取液→含有雜質(zhì)→干擾測(cè)定。※萃取液→適當(dāng)處理→除去雜質(zhì)→純化。濃縮和富集方法（1）減壓蒸餾：旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（2）氣流吹蒸：空氣或氮?dú)猓?）K-D濃縮器濃縮（4）真空離心濃縮法空氣、氮?dú)?、濃縮、蒸汽壓氮吹儀①不能用于燃點(diǎn)低于100℃的物質(zhì)②氮?dú)?、氧氣純度高?9%③不能用于酸、堿物質(zhì)的濃縮④酸性用碳酸氫鈉溶解中和農(nóng)藥殘留測(cè)定方法薄層色譜法（TLC）TLC始于1938年，方法的基本原理首先由Izmailou等發(fā)表，到1959年才由Stshl等發(fā)展成近似于現(xiàn)在的薄層色譜法，但由于靈敏度不高，近年來(lái)較少使用。氣相色譜法（GC）GC是目前用于農(nóng)藥殘留檢測(cè)最為普遍，最成熟的技術(shù)。易汽化，且汽化后不易發(fā)生分解的農(nóng)藥均可采用氣相色譜法檢測(cè)。多達(dá)70%農(nóng)藥殘留可用氣相色譜法來(lái)檢測(cè).氫火焰離子化檢測(cè)器（FID）電子捕獲檢測(cè)器（ECD）氮磷檢測(cè)器（NPD）火焰光度檢測(cè)器（FPD）色—質(zhì)聯(lián)用技術(shù)是將色譜儀和質(zhì)譜儀串聯(lián)起來(lái)，成為一個(gè)整體使用的檢測(cè)技術(shù)。色—質(zhì)聯(lián)用包括氣質(zhì)聯(lián)用（GC-MS）和液質(zhì)聯(lián)用（LC-MS）。GC-MS聯(lián)用有GC的高分離性能，又有MS準(zhǔn)確鑒定化合物結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)，既可用于定性，又可用于定量，特別是對(duì)農(nóng)藥代謝物、降解物和多殘留檢測(cè)等具有突出的優(yōu)點(diǎn).色—質(zhì)譜聯(lián)用SFC是以超臨界流體為流動(dòng)相的色譜分離檢測(cè)技術(shù)，它彌補(bǔ)了GC和HPLC各自的不足。超臨界流體具有氣體和液體的雙重性質(zhì)，其粘度小、傳質(zhì)阻力小、擴(kuò)散速度快，分離能力和速度可與GC相比。超臨界流體色譜（SFC）IA是一種基于抗原抗體特異性識(shí)別和結(jié)合反應(yīng)的分析方法。該技術(shù)開發(fā)的檢測(cè)試劑盒，具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、分析容量大、方便快捷、成本低廉等優(yōu)點(diǎn)，可廣泛應(yīng)用于現(xiàn)場(chǎng)樣品和大量樣品的快速檢測(cè).免疫分析法（IA）酶抑制法是研究最多且相對(duì)成熟的一種對(duì)部分農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)技術(shù)，國(guó)內(nèi)外已開發(fā)出速測(cè)箱、速測(cè)卡、快速測(cè)定儀、生物傳感器等多種類型的產(chǎn)品用來(lái)檢測(cè)食品中有機(jī)磷與氨基甲酸酯類農(nóng)藥的殘留。酶抑制法農(nóng)藥殘留分析的質(zhì)量控制

實(shí)驗(yàn)室的基礎(chǔ)條件特純水＞1.8x10799.99999水的種類電阻率Ω·cm用途普通純水5x105，常量分析優(yōu)質(zhì)純水＞1x106AA特級(jí)光（色）譜純S.P白色級(jí)別名稱代號(hào)標(biāo)志一級(jí)優(yōu)級(jí)純GuarantteReagent綠色二級(jí)分析純AnalysisReagent紅色三級(jí)化學(xué)純ChemicalReagent藍(lán)色人員要求管理制度農(nóng)殘分析質(zhì)量控制1、接受日期和有效日期2、污染和干擾3、前處理過(guò)程中的損失4、回收率測(cè)定和校準(zhǔn)國(guó)內(nèi)外現(xiàn)狀微波萃取(MAE)、超臨界提取(SFE)、固相萃取(SPE)、固相微萃取(SPME)、加熱溶劑萃取(ASE)等技術(shù)與設(shè)備已進(jìn)入我國(guó)的農(nóng)殘檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室.方法所得的提取液中的雜質(zhì)較少、分離效率好、提取對(duì)象的得率高、試劑消耗量少、操作較快捷等優(yōu)點(diǎn)，對(duì)保證檢測(cè)工作質(zhì)量有至關(guān)重要的作用.樣品中農(nóng)殘的提取技術(shù)提取液的凈化技術(shù)較常用的微型柱填料有C18、硅膠、氟羅里硅土、氧化鋁及活性炭等，根據(jù)實(shí)際情況可以選擇不同的填料裝載量，以適合不同的測(cè)定要求濃縮技術(shù)K-D濃縮器法，簡(jiǎn)便，但耗時(shí)，且體系溫度要升到相當(dāng)?shù)母叨龋瑢?duì)一些易分解的農(nóng)藥的回收率有不良影響。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)法，簡(jiǎn)便，但存在二次轉(zhuǎn)移再濃縮、定容的缺陷。干熱式樣品制備儀(氮吹儀)，用于樣品濃縮、高效氮?dú)獯蹈珊脱苌磻?yīng)等，可以提供較好的樣品回收率。分離與檢測(cè)技術(shù)超臨界流體色譜(SPC)是上個(gè)世紀(jì)80年代的新技術(shù)，以超臨界流體作為色譜流動(dòng)相，綜合利用了氣相色譜和液相色譜的優(yōu)點(diǎn)，可與氣相和液相的檢測(cè)器相匹配，可與紅外、質(zhì)譜聯(lián)用，成為一種強(qiáng)有力的分離和檢測(cè)手段。離子色譜法現(xiàn)也有報(bào)道用于農(nóng)藥殘留量的檢測(cè)，對(duì)于一些既無(wú)紫外吸收又不易揮發(fā)，且易以離子形式存在的農(nóng)藥，用此法檢測(cè)，操作簡(jiǎn)便，靈敏度高