熒光熒光第三部分

熒光熒光第三部分第1頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月八、熒光標記物和標記反應和氨基反應的和巰基反應的和其他基團反應的第2頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月1.和氨基反應的第3頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月fluorescein-5-isothiocyanate(FITC'IsomerI')

MolecularFormula:C21H11NO5S

MolecularWeight:389.38CASNumber/Name:3326-32-7/Spiro(isobenzofuran-1(3H),9'-(9H)xanthen)-3-one,3',6'-dihydroxy-5-isothiocyanato-第4頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月fluorescein-6-isothiocyanate(FITC'IsomerII')

MolecularFormula:C21H11NO5SMolecularWeight:389.38CASNumber/Name:18861-78-4/Spiro(isobenzofuran-1(3H),9'-(9H)xanthen)-3-one,3',6'-dihydroxy-6-isothiocyanato-第5頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月4-dimethylaminoazobenzene-4'-sulfonylchloride(dabsylchloride)

MolecularFormula:C14H14ClN3O2SMolecularWeight:323.80CASNumber/Name:56512-49-3/Benzenesulfonylchloride,4-((4-(dimethylamino)phenyl)azo)第6頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月RhodamineRed?-X,succinimidylester

MolecularFormula:C37H44N4O10S2MolecularWeight:768.90CASNumber/Name:N/A第7頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月TexasRed?sulfonylchloride

MolecularFormular:C31H29ClN2O6S2MolecularWeight:625.15CASNumber/Name:82354-19-6/1H,5H,11H,15H-Xantheno[2,3,4-ij:5,6,7-i'j']diquinolizin-18-ium,9-[2(or4)-(chlorosulfonyl)-4(or2)-sulfophenyl]-2,3,6,7,12,13,16,17-octahydro-,innersalt第8頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月Spectra—TexasRed-BSAconjugate

AbsorptionandfluorescenceemissionspectraoftheTexasRedconjugateofbovineserumalbumin(A-23017)inpH7.0buffer.第9頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月牛肺動脈內(nèi)皮細胞微絲成像用AlexaFluor430標記抗體實現(xiàn)微絲染色第10頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月斑馬魚視網(wǎng)膜綠色：AlexaFluor488標記藍色：Hoechst33258染核第11頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月2.和巰基反應第12頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月AlexaFluor488C5maleimine第13頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月5-(bromomethyl)fluorescein第14頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月Tetramethylrhodamine-5-maleimide第15頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月AlexaFluor350,488,568：核、微管、特殊蛋白第16頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月3.標記其他基團羥基：蛋白質中絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸殘基；糖類第17頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月NBD-Cl第18頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月第19頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月第20頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月肼和芳香胺用來標記醛、酮第21頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月APTSFluorescein-5-thiosemicarbazide第22頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月九、熒光分析方法常規(guī)熒光分析法三維熒光分析法時間分辨熒光分析法能量轉移熒光分析法熒光免疫分析超靈敏技術（信號放大）第23頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月1、常規(guī)熒光分析法熒光生成/增敏法熒光猝滅法同步熒光分析法第24頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月（1）、熒光生成/增敏法

1.待測物本身有熒光，可以直接進行測定

2.待測物沒有熒光或熒光較弱，則反應產(chǎn)生熒光衍生物進行測定第25頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月熒光強度與物質濃度的關系

It=AI0e-kcldI=AI0e-kcx－AI0e-kc(x+dx)

=AI0e-kcx(1－e-kcx)因dxkc很小dI=AI0kce-kcx.dxdF=KdI=KAI0kce-kcxdx液槽中溶液熒光強度

F=KAI0kc∫0le-kcxdx=KAI0[1－e-kcl]=AKI0[kcl－(kcl)2/2!+(kcl)3/3!－…]=AKI0kcl[1－kcl/2+(kcl)2/6－…]第26頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月當kcl≤0.05則括號內(nèi)第二項開始可忽略不計F=AKI0kcl對1cm2吸光截面F=2.3φI0εclA不超過0.05第27頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月（2）、熒光猝滅法待測物沒有熒光，但它可以通過動態(tài)猝滅或靜態(tài)猝滅的過程使一熒光物的熒光猝滅進行測定。

如：O2猝滅芘丁二酸的熒光，用于測定血液中的氧

S2-猝滅熒光素汞的熒光用于測定環(huán)境中石油及天然氣中的痕量硫

第28頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月（3）、同步熒光分析法同步熒光是在同時掃描兩個單色器波長的情況下測繪的熒光光譜，根據(jù)激發(fā)和發(fā)射兩個單色器在同時掃描過程中彼此間所應保持的關系，同步熒光測定可分為三個類型：1．

固定波長同步熒光，在同時掃描過程中使激發(fā)波長和發(fā)射波長彼此保持固定的波長間隔，即λem-λex=常數(shù)。2．

固定能量同步熒光，在同時掃描過程中使激發(fā)波長和發(fā)射波長之間保持一個固定的能量差（1/λex-1/λem）X107=△v=常數(shù)△v表示能量差（cm-1）即激發(fā)和發(fā)射兩個單色器之間保持固定波數(shù)差進行掃描可變角（或可變波長）同步熒光：在同時掃描過程中使激發(fā)和發(fā)射兩個單色器以不同的速率同時進行掃描，第29頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月第30頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月同步熒光法優(yōu)點光譜簡化譜帶窄化減小光譜重疊減小散射光的影響第31頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月2、三維熒光分析法第32頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月3、時間分辨熒光分析法第33頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月4、能量轉移熒光分析法第34頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月茶葉堿的測定第35頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月HIV的測定HIVprotease檢測原理第36頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月5、熒光免疫分析

(FluorescenceImmunoassay)

BersonandYalowRIA1959

Antigen,AgAntibody,Ab

RIAELIAFIACLIA第37頁，課件共43頁，創(chuàng)作