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ReadingCreationofBacterialCellControlledbyaChemicallySynthesizedGenome1990年人類組計(jì)劃剛剛起步的時(shí)候,科學(xué)家們可能尚沒有這么大的野心。十年過去,2001年,人類組計(jì)劃提前完成,科學(xué)家們可能再也坐不住了。技術(shù)的造物的傳統(tǒng)理論,這確實(shí)是一個(gè)具有十足力的嘗試。Ventor的團(tuán)隊(duì)正是在這樣的背景Ventor團(tuán)隊(duì)計(jì)劃這一方案已有相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間。他們構(gòu)想著把人工合成的蕈狀體的組替換掉體細(xì)胞的遺傳物質(zhì),從而使后者具有蕈狀體的遺傳性狀。要達(dá)數(shù)字化組技術(shù)等飛速發(fā)展,讓實(shí)驗(yàn)團(tuán)隊(duì)擁有了基于計(jì)算機(jī)設(shè)備和人工實(shí)驗(yàn)的樣本。也就是說,Ventor盡管是一個(gè)嶄新的具有十足性的嘗試,Ventor的策略卻十分簡(jiǎn)約。概括來說,主要分四個(gè)個(gè)階段:拆—合—替—篩(1)拆:選取Mycosmamycoides,,重排DNA(2)合:這是該實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵步驟。完全利用人工拼接出一個(gè)較長(zhǎng)的顯然技術(shù)上還達(dá)不到,Ventor采用了十分取巧的方法:利用酵母菌的自組裝功能,將基人工合成好的轉(zhuǎn)入野生型的M.capricolumsubspeciescapricolum。隨著細(xì)菌,原有的與人工合成的可能會(huì)分離從而使一些細(xì)胞只含有人工合成的(4篩:利用選擇培養(yǎng)的方法淘汰野生型細(xì)菌,最后剩下含人工合成的并能正常表達(dá)蕈狀體性狀的細(xì)菌。總的來說,沒有涉及人工地搭建生物載體,也沒有復(fù)雜的拼接方法,Ventor簡(jiǎn)明的實(shí)驗(yàn)得到同樣十分精煉的結(jié)果:產(chǎn)生的新細(xì)胞不但具有蕈狀體的性狀, 拆:測(cè)出Mycosmamycoides的組序列,以此為藍(lán)本,人工合成該序列:這并不是完整長(zhǎng)度的,而是1078條平均長(zhǎng)度為1780bp的片段。這些片段與天然組序列存在一些差異:去除了一些不重要的,添加阻斷的序列,有27處單核苷酸多肽性和用于區(qū)分天然序列的Watermark。DNA,1010kb(109。間體由于片段過大,不能像10kb一樣在大腸桿菌中穩(wěn)定傳代,因此(1010=10kb③全的合成為了最合成出效的序,要將100kb進(jìn)行純化,該步較為雜,分為個(gè)階段:首要裂解母得到微克級(jí)的100kb,用核酸切酶處理并通過陰子交換層,獲得初步純化;為了消除酵線性DNA干擾將初純化的物與融化瓊脂糖合,使凝固的脂糖纖穿過環(huán)質(zhì)粒,后該線DNA可被泳除去。純化完成后采用FIGE法分純化并將三次導(dǎo)入母原生中進(jìn)行拼接同樣采多重PCR的行篩選最得到11個(gè)增子。這11個(gè)擴(kuò)增最后拼成了 kb度的完的序列。④甲基化修飾。由于天然的供體組被甲基化修飾,因此,合成的也替:合成的導(dǎo)入受體細(xì)胞中,受體細(xì)胞不斷增殖,原可逐漸被分離,即可用人工完全替換掉原 在該過程中,Ventor團(tuán)隊(duì)構(gòu)建的半合成組發(fā)揮了重要作用。一旦存在嚴(yán)重突變錯(cuò)篩:可以觀察到,在一些受體細(xì)胞中出現(xiàn)了Mycosmamycoides的性狀。為了在多重PCR擴(kuò)增中,如果4個(gè)Watermark都被擴(kuò)增出來,證明是合成的新“體。是人造細(xì)胞成功反映了Mycosmamycoides的生命體征。就已經(jīng)為組技術(shù)貢獻(xiàn)了大量寶貴的經(jīng)驗(yàn),比人類組計(jì)劃要超前。Ventor和他的團(tuán)隊(duì)同樣為后人的轉(zhuǎn)染與拼接人工合成等技術(shù)革新提供了指導(dǎo)如果說當(dāng)年克隆羊的技術(shù)是一場(chǎng)科學(xué)的話顯然該實(shí)驗(yàn)又將掀起一次研究的軒然大波。人類不僅可以測(cè)出的序列,知道它們的功能,甚至還能夠從它們的功能出發(fā)來合成目的,創(chuàng)造的產(chǎn)物現(xiàn)在相當(dāng)于動(dòng)物體整個(gè)都由人工合成人們可以在上面獲得任何想要的性狀,可以人工合成生物的組,來讓它們地球……人們可以在這上面有無數(shù)的構(gòu)想,主義者認(rèn)為這是違背了神世界上的有信仰的人十分多這樣會(huì)不會(huì)在他們之中引涉及到相當(dāng)多的問題。Nature和Science更傾向于把Ventor合成的這一細(xì)胞稱為“人造細(xì)胞”而造生命,對(duì)已知的人工,尚未涉及對(duì)的人工設(shè)計(jì)。也就是說,合成的
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