任務(wù)二水中大腸菌群數(shù)的測(cè)定

綜合(zōnghé)實(shí)訓(xùn)三水中菌落總數(shù)及大腸菌群數(shù)的測(cè)定

任務(wù)二

水中大腸菌群數(shù)的測(cè)定

第一頁(yè)，共三十一頁(yè)。編輯課件水中總大腸菌群的測(cè)定(cèdìng)檢驗(yàn)(jiǎnyàn)依據(jù)：GB/T5750.12-2006方法：多管發(fā)酵法第二頁(yè)，共三十一頁(yè)。編輯課件總大腸菌群總大腸菌群37℃、發(fā)酵乳糖、需氧和兼性厭氧、革蘭氏陰性、無(wú)芽孢(yábāo)桿菌

糞大腸菌群（耐熱--）總大腸菌群

非糞大腸菌群EC肉湯44.5士0.5℃第三頁(yè)，共三十一頁(yè)。編輯課件總大腸菌群MPN（mostprobablenumber）最可能(kěnéng)數(shù)或最近似數(shù)總大腸菌群MPN100mL水樣中所含的總大腸菌群的最近似數(shù)或最可能數(shù)第四頁(yè)，共三十一頁(yè)。編輯課件指示菌（總大腸菌群）指示菌應(yīng)具有(jùyǒu)的條件和腸道致病菌的來(lái)源相同在外界環(huán)境中的生存時(shí)間長(zhǎng)檢驗(yàn)方法(fāngfǎ)比較簡(jiǎn)便第五頁(yè)，共三十一頁(yè)。編輯課件實(shí)驗(yàn)(shíyàn)目標(biāo)掌握生活(shēnghuó)飲用水總大腸菌群的測(cè)定方法掌握水源水總大腸菌群的測(cè)定方法判定水被腸道致病菌污染的程度和水的衛(wèi)生質(zhì)量第六頁(yè)，共三十一頁(yè)。編輯課件實(shí)驗(yàn)(shíyàn)內(nèi)容1乳糖(rǔtánɡ)發(fā)酵試驗(yàn)4證實(shí)(zhèngshí)試驗(yàn)5結(jié)果分析與報(bào)告1培養(yǎng)基制備2乳糖發(fā)酵試驗(yàn)3分離培養(yǎng)第七頁(yè)，共三十一頁(yè)。編輯課件實(shí)驗(yàn)(shíyàn)器材水樣生活飲用水、水源(shuǐyuán)水培養(yǎng)基乳糖蛋白胨培養(yǎng)液、伊紅美蘭培養(yǎng)基試劑革蘭氏染色液、稀釋劑等第八頁(yè)，共三十一頁(yè)。編輯課件實(shí)驗(yàn)(shíyàn)器材其他無(wú)菌工作臺(tái)、酒精燈、稀釋液、滅菌吸管、滅菌試管、小倒管、試管架、接種環(huán)、恒溫培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌器、載玻片、香柏油(bǎiyóu)、平皿、天平、電爐等第九頁(yè)，共三十一頁(yè)。編輯課件培養(yǎng)基制備(zhìbèi)乳糖(rǔtánɡ)發(fā)酵管雙料管單料管伊紅美蘭平板放置(fàngzhì)小倒管并排氣第十頁(yè)，共三十一頁(yè)。編輯課件檢驗(yàn)(jiǎnyàn)程序生活(shēnghuó)飲用水接種乳糖發(fā)酵(fājiào)試驗(yàn)分離培養(yǎng)證實(shí)試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告水源水稀釋與接種第十一頁(yè)，共三十一頁(yè)。編輯課件一、乳糖發(fā)酵(fājiào)（初發(fā)酵(fājiào)）試驗(yàn)自來(lái)水直接接種10mL水樣于雙料培養(yǎng)基，每個(gè)水樣共接種5管水源(shuǐyuán)水加大稀釋度，每個(gè)稀釋度接種5管，每個(gè)水樣共接種15管第十二頁(yè)，共三十一頁(yè)。編輯課件各10ml1ml各1ml水樣1:10稀釋(xīshì)水各1ml乳糖(rǔtánɡ)發(fā)酵試驗(yàn)第十三頁(yè)，共三十一頁(yè)。編輯課件一、乳糖(rǔtánɡ)發(fā)酵（初發(fā)酵）試驗(yàn)培養(yǎng)(péiyǎng)36℃士l℃24h士2h觀察產(chǎn)酸產(chǎn)氣情況不產(chǎn)酸產(chǎn)氣產(chǎn)酸產(chǎn)氣第十四頁(yè)，共三十一頁(yè)。編輯課件第二天第十五頁(yè)，共三十一頁(yè)。編輯課件二、分離(fēnlí)培養(yǎng)產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種EMB平板（分區(qū)(fēnqū)劃線）36℃士l℃24h士2h第十六頁(yè)，共三十一頁(yè)。編輯課件第三天第十七頁(yè)，共三十一頁(yè)。編輯課件三、證實(shí)試驗(yàn)(shìyàn)（復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)(shìyàn)）觀察EMB平板(píngbǎn)菌落形態(tài)深紫黑色、具有金屬光澤的菌落紫黑色、不帶或略帶金屬光澤的菌落淡紫紅色、中心較深的菌落第十八頁(yè)，共三十一頁(yè)。編輯課件一半(yībàn)進(jìn)行涂片、染色、鏡檢另一半進(jìn)行接種（證實(shí)(zhèngshí)試驗(yàn)用）第十九頁(yè)，共三十一頁(yè)。編輯課件三、證實(shí)(zhèngshí)試驗(yàn)（復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)）只有染色鏡檢為革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌才接種(jiēzhòng)乳糖蛋白胨管36℃士l℃24h士2h第二十頁(yè)，共三十一頁(yè)。編輯課件第四天第二十一頁(yè)，共三十一頁(yè)。編輯課件四、結(jié)果(jiēguǒ)報(bào)告觀察乳糖(rǔtánɡ)發(fā)酵管產(chǎn)氣情況產(chǎn)酸產(chǎn)氣者，即證實(shí)有總大腸菌群存在查MPN檢索表根據(jù)證實(shí)為總大腸菌群陽(yáng)性的管數(shù)報(bào)告每100ml水樣中的總大腸菌群最可能數(shù)（MPN）第二十二頁(yè)，共三十一頁(yè)。編輯課件四、結(jié)果(jiēguǒ)報(bào)告5管法結(jié)果(jiēguǒ)見(jiàn)表1，15管法結(jié)果見(jiàn)表2第二十三頁(yè)，共三十一頁(yè)。編輯課件四、結(jié)果(jiēguǒ)報(bào)告表1用5份10mL水樣時(shí)各種陽(yáng)性和陰性結(jié)果(jiēguǒ)組合時(shí)的最可能數(shù)（MPN)5個(gè)10mL管中陽(yáng)性管數(shù)最可能數(shù)（MPN）

0<2.212.225.139.2416.05>16.0第二十四頁(yè)，共三十一頁(yè)。編輯課件四、結(jié)果(jiēguǒ)報(bào)告表2總大腸菌群MPN檢索(jiǎnsuǒ)表(部分）（總接種量55.5mL，其中5份10mL水樣，5份1mL水樣，5份0.1mL水樣）接種量/mL總大腸菌群/(MPN/100mL)接種量/mL總大腸菌群/(MPN/100mL)10ml管1ml管0.1ml管10ml管1ml管0.1ml管000<21002001210140024102600351038004710410005910512第二十五頁(yè)，共三十一頁(yè)。編輯課件四、結(jié)果(jiēguǒ)報(bào)告稀釋樣品查表后所得(suǒdé)結(jié)果應(yīng)乘稀釋倍數(shù)表2采用3個(gè)稀釋度（10mL、1mL和0.1mL),每個(gè)稀釋度5管表2內(nèi)所列接種量如改用100mL、10mL和1mL時(shí)，表內(nèi)數(shù)字應(yīng)相應(yīng)降低10倍；如改為1mL、0.1mL和0.01mL時(shí),則表內(nèi)數(shù)字應(yīng)相應(yīng)增加10倍。其余可類推。第二十六頁(yè)，共三十一頁(yè)。編輯課件四、結(jié)果(jiēguǒ)報(bào)告所有乳糖發(fā)酵管均陰性(yīnxìng)，可報(bào)告總大腸菌群未檢出。第二十七頁(yè)，共三十一頁(yè)。編輯課件注意事項(xiàng)1.無(wú)菌操作。2.每遞增稀釋一次，即換一支1mL滅菌吸管。3.培養(yǎng)基使用(shǐyòng)前應(yīng)先檢查培養(yǎng)基內(nèi)小倒管中有無(wú)氣泡。4.接種量在1ml及以下時(shí)用單料培養(yǎng)基，接種量超過(guò)1ml時(shí)用雙料培養(yǎng)基。5.檢樣從開(kāi)始稀釋到接種所用時(shí)間不宜超過(guò)15min。第二十八頁(yè)，共三十一頁(yè)。編輯課件習(xí)題(xítí)作業(yè)

1.判斷食品是否被腸道致病菌所污染及其污染程度時(shí)，常用總大腸菌群作為指示菌來(lái)表示，該指示菌應(yīng)具備的條件有哪些。

2.總大腸菌群和糞大腸菌群有什么(shénme)區(qū)別？如何區(qū)分糞大腸菌群和非糞大腸菌群。第二十九頁(yè)，共三十一頁(yè)。編輯課件習(xí)題(xítí)作業(yè)

3.檢樣從開(kāi)始稀釋到接種所用時(shí)間不宜超過(guò)(chāoguò)15min，為什么？

4.單料和雙料培養(yǎng)基有什么區(qū)別？什么時(shí)候使用雙料培養(yǎng)基？

5.生活飲用水的菌落總數(shù)、總大腸菌群標(biāo)準(zhǔn)是多少？畜禽飲用水總大腸菌群標(biāo)準(zhǔn)是多少？第三十頁(yè)，共三十一頁(yè)。編輯課件內(nèi)容(nèiróng)總結(jié)綜合實(shí)訓(xùn)三水中菌落總數(shù)及大腸菌群數(shù)的測(cè)定

任務(wù)二水中大腸菌群數(shù)的測(cè)定。最可能數(shù)或最近似數(shù)。判定水被