任務(wù)二水中大腸菌群數(shù)的測定

綜合(zōnghé)實訓(xùn)三水中菌落總數(shù)及大腸菌群數(shù)的測定

任務(wù)二

水中大腸菌群數(shù)的測定

第一頁，共三十一頁。編輯課件水中總大腸菌群的測定(cèdìng)檢驗(jiǎnyàn)依據(jù)：GB/T5750.12-2006方法：多管發(fā)酵法第二頁，共三十一頁。編輯課件總大腸菌群總大腸菌群37℃、發(fā)酵乳糖、需氧和兼性厭氧、革蘭氏陰性、無芽孢(yábāo)桿菌

糞大腸菌群（耐熱--）總大腸菌群

非糞大腸菌群EC肉湯44.5士0.5℃第三頁，共三十一頁。編輯課件總大腸菌群MPN（mostprobablenumber）最可能(kěnéng)數(shù)或最近似數(shù)總大腸菌群MPN100mL水樣中所含的總大腸菌群的最近似數(shù)或最可能數(shù)第四頁，共三十一頁。編輯課件指示菌（總大腸菌群）指示菌應(yīng)具有(jùyǒu)的條件和腸道致病菌的來源相同在外界環(huán)境中的生存時間長檢驗方法(fāngfǎ)比較簡便第五頁，共三十一頁。編輯課件實驗(shíyàn)目標(biāo)掌握生活(shēnghuó)飲用水總大腸菌群的測定方法掌握水源水總大腸菌群的測定方法判定水被腸道致病菌污染的程度和水的衛(wèi)生質(zhì)量第六頁，共三十一頁。編輯課件實驗(shíyàn)內(nèi)容1乳糖(rǔtánɡ)發(fā)酵試驗4證實(zhèngshí)試驗5結(jié)果分析與報告1培養(yǎng)基制備2乳糖發(fā)酵試驗3分離培養(yǎng)第七頁，共三十一頁。編輯課件實驗(shíyàn)器材水樣生活飲用水、水源(shuǐyuán)水培養(yǎng)基乳糖蛋白胨培養(yǎng)液、伊紅美蘭培養(yǎng)基試劑革蘭氏染色液、稀釋劑等第八頁，共三十一頁。編輯課件實驗(shíyàn)器材其他無菌工作臺、酒精燈、稀釋液、滅菌吸管、滅菌試管、小倒管、試管架、接種環(huán)、恒溫培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌器、載玻片、香柏油(bǎiyóu)、平皿、天平、電爐等第九頁，共三十一頁。編輯課件培養(yǎng)基制備(zhìbèi)乳糖(rǔtánɡ)發(fā)酵管雙料管單料管伊紅美蘭平板放置(fàngzhì)小倒管并排氣第十頁，共三十一頁。編輯課件檢驗(jiǎnyàn)程序生活(shēnghuó)飲用水接種乳糖發(fā)酵(fājiào)試驗分離培養(yǎng)證實試驗結(jié)果報告水源水稀釋與接種第十一頁，共三十一頁。編輯課件一、乳糖發(fā)酵(fājiào)（初發(fā)酵(fājiào)）試驗自來水直接接種10mL水樣于雙料培養(yǎng)基，每個水樣共接種5管水源(shuǐyuán)水加大稀釋度，每個稀釋度接種5管，每個水樣共接種15管第十二頁，共三十一頁。編輯課件各10ml1ml各1ml水樣1:10稀釋(xīshì)水各1ml乳糖(rǔtánɡ)發(fā)酵試驗第十三頁，共三十一頁。編輯課件一、乳糖(rǔtánɡ)發(fā)酵（初發(fā)酵）試驗培養(yǎng)(péiyǎng)36℃士l℃24h士2h觀察產(chǎn)酸產(chǎn)氣情況不產(chǎn)酸產(chǎn)氣產(chǎn)酸產(chǎn)氣第十四頁，共三十一頁。編輯課件第二天第十五頁，共三十一頁。編輯課件二、分離(fēnlí)培養(yǎng)產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種EMB平板（分區(qū)(fēnqū)劃線）36℃士l℃24h士2h第十六頁，共三十一頁。編輯課件第三天第十七頁，共三十一頁。編輯課件三、證實試驗(shìyàn)（復(fù)發(fā)酵試驗(shìyàn)）觀察EMB平板(píngbǎn)菌落形態(tài)深紫黑色、具有金屬光澤的菌落紫黑色、不帶或略帶金屬光澤的菌落淡紫紅色、中心較深的菌落第十八頁，共三十一頁。編輯課件一半(yībàn)進行涂片、染色、鏡檢另一半進行接種（證實(zhèngshí)試驗用）第十九頁，共三十一頁。編輯課件三、證實(zhèngshí)試驗（復(fù)發(fā)酵試驗）只有染色鏡檢為革蘭氏陰性無芽孢桿菌才接種(jiēzhòng)乳糖蛋白胨管36℃士l℃24h士2h第二十頁，共三十一頁。編輯課件第四天第二十一頁，共三十一頁。編輯課件四、結(jié)果(jiēguǒ)報告觀察乳糖(rǔtánɡ)發(fā)酵管產(chǎn)氣情況產(chǎn)酸產(chǎn)氣者，即證實有總大腸菌群存在查MPN檢索表根據(jù)證實為總大腸菌群陽性的管數(shù)報告每100ml水樣中的總大腸菌群最可能數(shù)（MPN）第二十二頁，共三十一頁。編輯課件四、結(jié)果(jiēguǒ)報告5管法結(jié)果(jiēguǒ)見表1，15管法結(jié)果見表2第二十三頁，共三十一頁。編輯課件四、結(jié)果(jiēguǒ)報告表1用5份10mL水樣時各種陽性和陰性結(jié)果(jiēguǒ)組合時的最可能數(shù)（MPN)5個10mL管中陽性管數(shù)最可能數(shù)（MPN）

0<2.212.225.139.2416.05>16.0第二十四頁，共三十一頁。編輯課件四、結(jié)果(jiēguǒ)報告表2總大腸菌群MPN檢索(jiǎnsuǒ)表(部分）（總接種量55.5mL，其中5份10mL水樣，5份1mL水樣，5份0.1mL水樣）接種量/mL總大腸菌群/(MPN/100mL)接種量/mL總大腸菌群/(MPN/100mL)10ml管1ml管0.1ml管10ml管1ml管0.1ml管000<21002001210140024102600351038004710410005910512第二十五頁，共三十一頁。編輯課件四、結(jié)果(jiēguǒ)報告稀釋樣品查表后所得(suǒdé)結(jié)果應(yīng)乘稀釋倍數(shù)表2采用3個稀釋度（10mL、1mL和0.1mL),每個稀釋度5管表2內(nèi)所列接種量如改用100mL、10mL和1mL時，表內(nèi)數(shù)字應(yīng)相應(yīng)降低10倍；如改為1mL、0.1mL和0.01mL時,則表內(nèi)數(shù)字應(yīng)相應(yīng)增加10倍。其余可類推。第二十六頁，共三十一頁。編輯課件四、結(jié)果(jiēguǒ)報告所有乳糖發(fā)酵管均陰性(yīnxìng)，可報告總大腸菌群未檢出。第二十七頁，共三十一頁。編輯課件注意事項1.無菌操作。2.每遞增稀釋一次，即換一支1mL滅菌吸管。3.培養(yǎng)基使用(shǐyòng)前應(yīng)先檢查培養(yǎng)基內(nèi)小倒管中有無氣泡。4.接種量在1ml及以下時用單料培養(yǎng)基，接種量超過1ml時用雙料培養(yǎng)基。5.檢樣從開始稀釋到接種所用時間不宜超過15min。第二十八頁，共三十一頁。編輯課件習(xí)題(xítí)作業(yè)

1.判斷食品是否被腸道致病菌所污染及其污染程度時，常用總大腸菌群作為指示菌來表示，該指示菌應(yīng)具備的條件有哪些。

2.總大腸菌群和糞大腸菌群有什么(shénme)區(qū)別？如何區(qū)分糞大腸菌群和非糞大腸菌群。第二十九頁，共三十一頁。編輯課件習(xí)題(xítí)作業(yè)

3.檢樣從開始稀釋到接種所用時間不宜超過(chāoguò)15min，為什么？

4.單料和雙料培養(yǎng)基有什么區(qū)別？什么時候使用雙料培養(yǎng)基？

5.生活飲用水的菌落總數(shù)、總大腸菌群標(biāo)準(zhǔn)是多少？畜禽飲用水總大腸菌群標(biāo)準(zhǔn)是多少？第三十頁，共三十一頁。編輯課件內(nèi)容(nèiróng)總結(jié)綜合實訓(xùn)三水中菌落總數(shù)及大腸菌群數(shù)的測定

任務(wù)二水中大腸菌群數(shù)的測定。最可能數(shù)或最近似數(shù)。判定水被