植物病原細(xì)菌病毒線蟲和寄生性種子植物形態(tài)觀察

實驗三、植物病原細(xì)菌、病毒、線蟲和寄生性種子植物形態(tài)觀察指導(dǎo)教師：段海明一、植物病原細(xì)菌（一）細(xì)菌的一般形態(tài)結(jié)構(gòu)細(xì)菌屬原核生物,它的典型特點是遺傳物質(zhì)分散在細(xì)胞質(zhì)中，沒有核膜包圍，沒有明顯的細(xì)胞核。細(xì)菌是單細(xì)胞的生物。1.細(xì)菌的形態(tài)細(xì)菌有球形、桿狀、螺旋狀三種基本形狀。植物病原細(xì)菌大多是桿狀，大小為（0.5-0.8）×（1-5）μm，少數(shù)是球狀;細(xì)菌一般要經(jīng)過染色后在光學(xué)顯微鏡下觀察。

2.細(xì)菌的細(xì)胞結(jié)構(gòu)

（1）細(xì)胞壁維持菌體形態(tài),并保護(hù)菌體;（2）細(xì)胞膜一種半滲透性的生物膜;（3）細(xì)胞質(zhì)含有蛋白質(zhì),無機(jī)鹽,

脂類.水等;

(4)核質(zhì)相當(dāng)于真核生物的細(xì)胞核.無核膜。（5）粘質(zhì)層由細(xì)胞分泌的多糖物質(zhì)組成;（6）莢膜厚而固定的粘質(zhì)層;植物病原細(xì)菌細(xì)胞外一般有厚薄不均的粘質(zhì)層，但很少有莢膜。（7）芽孢在菌體一端或中間產(chǎn)生,

無色透明,具有抵抗不良環(huán)境的作用;植物病原細(xì)菌通常不產(chǎn)生芽孢。芽孢抗逆性較強(qiáng)。（8）鞭毛細(xì)菌的運動器官,不同的細(xì)菌鞭毛著生不一樣,有極生鞭毛,周生鞭毛。大多數(shù)植物病原細(xì)菌都具有鞭毛。

革蘭氏染色反應(yīng)是細(xì)菌分類和鑒定的重要性狀。它是1884年由丹麥醫(yī)師Gram創(chuàng)立的。細(xì)菌先經(jīng)堿性染料結(jié)晶（草酸銨結(jié)晶紫）染色及碘液處理后，用酒精脫色，在一定條件下有的細(xì)菌此色不被脫去，有的可被脫去，因此可把細(xì)菌分為兩大類，前者叫做革蘭氏陽性菌（G+），后者為革蘭氏陰性菌（G-）。為觀察方便，脫色后再用一種紅色染料如堿性蕃紅等進(jìn)行復(fù)染。陽性菌仍是紫色，陰性菌則被染上紅色。

革蘭氏陽性菌和陰性菌的細(xì)胞壁的組成上有顯著的不同，陽性的細(xì)胞壁厚、堅硬而牢固，而陰性菌的壁薄而柔軟。再就是二者細(xì)胞壁的組成成份也不同。（二）植物病原細(xì)菌所致病害癥狀觀察1、薄壁菌門：有壁較薄。革蘭氏染色反應(yīng)陰性，包括大多數(shù)植物病原細(xì)菌。主要有以下十一個屬：土壤桿菌屬、歐文氏菌屬、泛菌屬、果膠桿菌屬、假單胞菌屬、布克氏菌屬、勞爾氏菌屬、噬酸菌薯、黃單胞菌屬、木質(zhì)部小菌屬和韌皮部桿菌屬。2、厚壁菌門：有壁較厚。革蘭氏染色反應(yīng)陽性，包括棒形桿菌屬、芽孢桿菌屬和鏈絲菌屬（放線菌）、節(jié)桿菌屬、短小桿菌屬、紅球菌屬。

(一)歐文氏菌屬主要引起植物軟腐（少數(shù)萎蔫和枝枯）。

大白菜軟腐病基腐型癥狀Symptoms：心腐型外腐型梨火疫病葉緣變黑梨火疫病營養(yǎng)枝受害呈“手仗狀”彎曲梨火疫病發(fā)病后期“火燒狀”（二）假單胞菌屬主要引起葉斑和葉枯。黃瓜細(xì)菌性角斑病水漬狀多角形斑點西瓜細(xì)菌性角斑病果實發(fā)病后期灰白色病斑。葉片發(fā)病淡褐色多角形黃褐色斑點。姜瘟病地上部變褐腐爛地下根部腐爛，黃褐色。（三）黃單胞菌屬主要引起葉斑和葉枯。柑橘潰瘍病近圓性、米黃色隆起病斑。黃色、半透明病斑油皰狀突起。桃細(xì)菌性穿孔病癥狀Symptoms：紫褐色至深褐色圓性或不規(guī)則性病斑，最后病斑干枯脫落，形成“穿孔狀”。（四）土壤桿菌屬主要引起植物的根、莖部瘤腫。桃根癌病根部發(fā)病形成根瘤，大而硬，木質(zhì)化。葡萄根癌病貼近地表，枝蔓基部形成瘤腫。（五）棒形桿菌屬主要引起萎蔫。番茄潰瘍病發(fā)病后期莖中空，開裂，可見褐色條斑。果實受害，“鳥眼”斑。馬鈴薯環(huán)腐病維管束呈乳白色或黃褐色環(huán)狀，重者病部變黑褐色。(六)勞爾氏菌屬主要引起植株青枯。

馬鈴薯青枯病馬鈴薯青枯病

地上部萎蔫死亡，葉片仍保持青綠色。番茄青枯病全株青枯萎蔫，維管束變褐。植物病害的診斷的一般程序診斷的程序和要求（1）對病植物全株的癥狀觀察與檢查，癥狀的識別與描述（有無病征、發(fā)生面積和時間，區(qū)分兩類病害）；（2）調(diào)查詢問有關(guān)病史與有關(guān)檔案，對病植物的生長環(huán)境和已有的管理措施的詢問調(diào)查；（3）采樣檢查（鏡檢、剖檢，網(wǎng)絡(luò)化遠(yuǎn)程診斷系統(tǒng)的應(yīng)用）；（4）專項檢測；（5）綜合分析比較，得出適當(dāng)結(jié)論，下結(jié)論要留有余地。不同層次的植保人員的知識和經(jīng)驗不同，因此，到最后確診所需要的時間也是不一樣的。田間癥狀（確診），鏡檢（確診），分離、培養(yǎng)、接種（驗證病原與癥狀的吻合，區(qū)別寄生菌與腐生菌）確診。對于一個新手或經(jīng)驗不多的植保人員來說，正確的診斷需作詳細(xì)和系統(tǒng)的檢查，而不僅根據(jù)外表癥狀。

植物病原細(xì)菌病害的診斷要點1、首先要田間觀察，區(qū)別侵染性病害和非侵染性病害。2、細(xì)菌病害的癥狀觀察細(xì)菌性病害，病植物表現(xiàn)的癥狀主要有壞死、萎蔫、腐爛和畸形等4類，褪色或變色的較少，多數(shù)細(xì)菌病害都有菌膿（Ooze）溢出?；蛘弑?、保濕培養(yǎng)后會有菌膿溢出。3、顯微鏡檢查由細(xì)菌侵染引起的病害，無論是維管束系統(tǒng)受害的，還是薄壁組織受害的，都可以在徒手切片中看到有很多細(xì)菌從病部噴出，這種現(xiàn)象稱為噴菌現(xiàn)象（Bacteriaexudation,BE）。噴菌現(xiàn)象為細(xì)菌病害所特有，是區(qū)分細(xì)菌病害或真菌、病毒病害最簡單的手段。4、分離培養(yǎng)與侵染性試驗按柯赫氏法則，從病部組織中分離病原細(xì)菌的純培養(yǎng)，無論是在普通培養(yǎng)基上，還是選擇性培養(yǎng)基上，挑選典型的單菌落，再接種到敏感植物或指示植物上，使表現(xiàn)出典型的或特有癥狀反應(yīng)是必不可少的。以上三個方面也只能區(qū)分是否是侵染性的細(xì)菌性病害，并未回答是何種病菌引起的病害。因此，也只是初步診斷。

二、植物病毒

一、病毒的形態(tài)和結(jié)構(gòu)

1、病毒形態(tài)：病毒是由粒體（particle）組成的，多數(shù)粒體為球狀、桿狀、線狀，少數(shù)為彈狀、桿狀、雙聯(lián)體狀：線狀：11-13nm×750nm，細(xì)長可彎曲；桿狀、彈狀：剛直不易彎曲，兩端為截面，稱桿狀；雙端鈍園，稱彈狀；球狀和雙聯(lián)體狀：球狀病毒也稱多面體病毒，直徑多為20-35nm，少數(shù)可達(dá)70-80nm；若病毒由兩個球狀病毒粒體聯(lián)合一起，稱雙聯(lián)病毒；2、病毒結(jié)構(gòu)絕大多數(shù)病毒粒體是由核酸和蛋白質(zhì)衣殼組成；植物彈狀病毒粒體外有囊膜包被；桿狀或線狀病毒粒體中間是螺旋體核酸鏈，外面是由許多蛋白質(zhì)亞基組成的衣殼；球狀病毒結(jié)構(gòu)復(fù)雜，表面由二十個正三角形組成，稱20面體，還有60面體等；（二）植物病毒所致病害癥狀觀察

1、煙草花葉病毒屬及TMV2、黃瓜花葉病毒屬及CMV3、馬鈴薯Y病毒屬及PVY番茄花葉病毒病

花葉

植株矮化煙草花葉病毒（TMV）番茄曲頂病毒病

葉柄下彎主要由番茄曲頂病毒引起。番茄蕨葉病毒病苗期矮化，葉片細(xì)長，不擴(kuò)展。黃瓜花葉病毒（CMV）?；ㄒ瞬《静∪~片畸形，皺縮，葉脈壞死。黃瓜花葉病毒（CMV）、蕪菁花葉病毒（TuMV）等引起。萵苣病毒病萵苣花葉病毒（LMV）和黃瓜花葉病毒（CMV）等引起。葉片皺縮，葉片下卷成筒狀。芹菜病毒病蕪菁花葉病毒（TuMV）和黃瓜花葉病毒（CMV）、馬鈴薯Y病毒（PVY）等引起。葉片畸形，植株矮化。菠菜病毒病

花葉、矮化、壞死黃瓜花葉病毒（CMV）和蕪菁花葉病毒（TuMV）等。蕹菜病毒病煙草花葉病毒（TMV）、黃瓜花葉病毒（CMV）和甜菜曲頂病毒（BCTV）

病株矮縮，葉片畸形、皺縮，葉質(zhì)粗厚。黃瓜病毒病黃瓜花葉病毒（CMV）、煙草花葉病毒（CMV）和黃瓜綠斑花葉病毒（CGMMV）引起。

葉尖細(xì)長，呈“鼠尾狀”。茄子病毒病

皺葉主要由煙草花葉病毒（TMV），黃瓜花葉病毒（ＣＭＶ）和蠶豆萎蔫病毒（ＢＢＷＶ）等引起?；ㄈ~辣椒病毒病

凹凸不平的花斑主要由黃瓜花葉病毒（CMV）、煙草花葉病毒（TMV）、馬鈴薯Y病毒（PVY）、煙草蝕紋病毒（TEV）和馬鈴薯X病毒（PVX）等引起。

葉片變形扭曲南瓜病毒病

花葉型主要由黃瓜花葉病毒等多種病毒引起。

病瓜絲瓜病毒病

主要由黃瓜花葉病毒引起。

花葉西瓜病毒病鄒縮矮化主要由西瓜花葉病毒（WMV）、黃瓜花葉病毒（CMV）和煙草花葉病毒（TMV）引起。蘋果花葉病

花葉蘋果花葉病毒引起。環(huán)斑、斑駁型。植物病毒病害的診斷要點植物病毒的識別、診斷及病原鑒定往往比真菌和細(xì)菌性病害復(fù)雜得多。因為非侵染性病害、遺傳性病害、藥害及植原體引起的病害都與病毒病癥狀相似。一、病害初步識別首先要區(qū)分非侵染性病害和侵染性病害。要點是（1）病毒病有發(fā)病中心或中心病株，早期點片分布，而非侵染性病害大多同時大面積發(fā)生；（2）發(fā)生病毒病的植株多為系統(tǒng)性感染，癥狀分布不均一，新葉新梢上癥狀最明顯，而生理性病害大多比較均一；（3）病毒病有傳染性，非傳染性病害沒有傳染擴(kuò)散的過程；（4）病毒病害癥狀往往表現(xiàn)為花葉、黃化、矮縮、叢生等，少數(shù)脈帶、環(huán)斑、耳突、斑駁、蝕紋等特征性癥狀。此外，隨著氣溫的變化，植物病毒病時常發(fā)生隱癥現(xiàn)象。

病毒病與其他病原生物引起的侵染性病害的主要區(qū)別是（1）病毒病在植物表面絕對沒有病征，而區(qū)別于線蟲蟲體、細(xì)菌的菌膿、真菌的子實體等病征的出現(xiàn)；（2）系統(tǒng)侵染性病毒病的癥狀在新展的幼葉上更重，而其它病害在老葉上癥狀更為明顯。二、實驗室診斷1、鑒別寄主診斷2、傳染試驗3、顯微鏡檢查4、血清學(xué)技術(shù)5、核酸雜交及PCR技術(shù)6、物理化學(xué)特性三、植物病原線蟲（一）植物病原線蟲的形態(tài)與結(jié)構(gòu)

線蟲(nematdes)又稱蠕蟲(helminthes)，是一類低等的無脊椎動物，危害植物的稱為植物病原線蟲或植物寄生線蟲，或簡稱植物線蟲。植物受線蟲危害后所表現(xiàn)的癥狀，與一般的病害癥狀相似，因此常稱線蟲病。習(xí)慣上都把寄生線蟲作為病原物來研究，所以它是植物病理學(xué)內(nèi)容的一部分。線蟲形態(tài)：差異很大，寄生人和動物的線蟲有的很大，如蛔蟲；寄生植物的一般較小，長約0.3~1mm，也有長達(dá)4mm左右的，寬為0.015~0.135mm。肉眼不易看見。線蟲細(xì)長，有的呈紡錘形，橫斷面呈圓形有些線蟲的雌蟲成熟后膨大成檸檬形或梨形。線蟲結(jié)構(gòu)：較簡單，蟲體有體壁和體腔，體腔內(nèi)有消化系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)等器官。線蟲的體壁幾乎是透明的，所以能看到它的內(nèi)部結(jié)構(gòu)。體腔是很原始的，其中充滿了一種液體，即體腔液。體腔液濕潤各個器官，并供給所需要的營養(yǎng)物質(zhì)和氧，可算是一種原始的血液，起著呼吸和循環(huán)系統(tǒng)的作用。線蟲缺乏真正的呼吸系統(tǒng)和循環(huán)系統(tǒng)。植物寄生線蟲的口腔內(nèi)有一個針刺狀的器官稱作口針(spear或stylet)，口針能穿刺植物的細(xì)胞和組織，并且向植物組織內(nèi)分泌消化酶，消化寄主細(xì)胞中的物質(zhì)，然后吸入食道。植物病原線蟲的主要類群1、粒線蟲屬2、莖線蟲屬3、異皮線蟲屬4、根結(jié)線蟲屬5、擬滑刃線蟲屬6、傘滑刃線蟲屬二、植物病原線蟲所致病害癥狀觀察番茄根結(jié)線蟲病瘤狀根結(jié)，植株干旱枯死。南方根結(jié)線蟲引起。黃瓜根結(jié)線蟲病大豆胞囊線蟲引起。根部有白色球狀物，后期形成胞囊。松材線蟲病松材線蟲病又稱松枯萎病，是由傘滑刃線蟲屬，是一種毀滅性病害。它是通過松墨天牛（Monochamusalternatus）等媒介昆蟲傳播于松樹體內(nèi)，從而引發(fā)松樹病害。被松材線蟲感染后的松樹，針葉黃褐色或紅褐色，萎蔫下垂，樹脂分泌停止，樹干可觀察到天牛侵入孔或產(chǎn)卵痕跡，病樹整株干枯死亡，最終腐爛。植物病原線蟲病害的診斷要點（一）田間分布與癥狀觀察植物病原線蟲在田間的分布一般是不均勻的。植物線蟲病害的癥狀往往表現(xiàn)為植株矮小、葉片黃化、局部畸形和根部腐爛等。（二）線蟲的分離與鑒定；（三）接種實驗；（四）分子診斷和鑒定（同屬不同的種）。四、寄生性種子植物寄生性種子植物是指一些高等植物和少數(shù)低等植物由于根系或葉片退化或缺乏足夠的葉綠素而營寄生生活，它們寄生于不同種類的高等植物上，稱為寄生性種子植物。1、菟絲子：是菟絲子科菟絲子屬植物的統(tǒng)稱2、列當(dāng)：是一類在草本（或木本）植物根部營全寄生生活的列當(dāng)科植物的總稱。3、桑寄生和槲寄生：是指在木本樹枝梢上營半寄生生活的種子植物。4、獨腳金：為玄參科營寄生生活的一年生草本植物。寄生性種子植物主要的種類的寄主1、菟絲子：主要寄生豆科、菊科、蓼科、楊柳科、薔薇科、茄科、百科科和傘形科等木本和草本植物上。2、列當(dāng)：寄主多為草本，以豆科、菊科、葫蘆科為主。3、桑寄生：寄主多為一些闊葉喬木和灌木，包括29科闊葉植物，寄主以山茶科和山毛櫸科為多。槲寄生：寄主范圍很廣，栗、薔薇、楊柳、樺木、白楊、胡桃、槭等科屬植物。4、獨腳金：