高效液相色譜法

高效液相色譜法(highperformanceliquidchromatograph------HPLC)藥物分析教研室1本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第1頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分

HPLC法以經(jīng)典LC為基礎(chǔ)，引入GC的理論與技術(shù)，并加以改進(jìn)而發(fā)展起來(lái)的一種分離分析方法。是色譜法的一個(gè)重要分支，以液體為流動(dòng)相，用高壓輸液系統(tǒng)，將流動(dòng)相泵入色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分析。2本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第2頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分【示例10-1】現(xiàn)行《中國(guó)藥典》二部阿司匹林片劑的含量測(cè)定。色譜條件：用十八烷基鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-四氫呋喃-冰醋酸-水（20：5：5：70）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為276nm。取片劑20片用1%冰醋酸-甲醇溶液精密制成100mL，精密配制阿司匹林0.lg/L對(duì)照品溶液，分別精密取供試品與對(duì)照品溶液10μL，進(jìn)行測(cè)定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。3本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第3頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分HPLC與經(jīng)典LC的比較相同點(diǎn)：均有四種色譜機(jī)理液固吸附色譜(HPLSC)

液液分配色譜(HPLLC)

離子交換色譜(HPIEC)

凝膠色譜(HPGPC)4本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第4頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分不同點(diǎn):

LCHPLC

固定相

全多孔表面多孔型的無(wú)定型全多孔微粒

粒度不均勻不耐高壓均勻耐高壓

操作壓力常壓、低壓高壓

柱效

10-100/m104-106/m

柱長(zhǎng)

1-2m10-25cm

柱內(nèi)徑

2-5cm0.2-0.5cm

5本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第5頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分不同點(diǎn):

LCHPLC

樣品用量

1-10g10-6-10-2g分析時(shí)間長(zhǎng)1-20h10-幾十min

裝置間斷連續(xù)、自動(dòng)化非儀器儀器化精度低精度高6本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第6頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分

10.1高效液相色譜法類(lèi)型10.2常用固定相與流動(dòng)相10.3高效液相色譜儀10.4高效液相色譜條件選擇10.5應(yīng)用與實(shí)例7本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第7頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分

HPLC特點(diǎn)三高、兩廣、一少

高效化、高速化、高靈敏度分析范圍廣、流動(dòng)相選擇范圍廣樣品用量少色譜柱可反復(fù)使用、流出組分易收集、安全8本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第8頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分HPLC類(lèi)型按實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

分析型（?1～6：4.6、2.1mm）

制備型（?10～500mm）按分離機(jī)制9本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第9頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分按分離機(jī)制10本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第10頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分HPLC類(lèi)型反相鍵合相色譜法反相離子抑制色譜法反相離子對(duì)色譜法手性色譜法親和色譜法11本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第11頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分

液-固吸附色譜固定相

HPLC固定相主要用硅膠。（1)無(wú)定形全多孔硅膠：YWG(2)球形全多孔硅膠：YQG(3）堆積硅珠：YQG高分子多孔微球：YSG12本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第12頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分化學(xué)鍵合相色譜固定相將固定液的官能團(tuán)鍵合在載體的表面而構(gòu)成化學(xué)鍵合相。以化學(xué)鍵合相為固定相的色譜法稱(chēng)為化學(xué)鍵合相色譜法(BPC)，簡(jiǎn)稱(chēng)鍵合相色譜法。

13本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第13頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分化學(xué)鍵合相的形成14本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第14頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分性能指標(biāo)1）覆蓋率指參與反應(yīng)的硅醇基數(shù)目占硅膠表面硅醇基總數(shù)的比例。覆蓋率的大小決定鍵合相是分配還是吸附占主導(dǎo)。（2）含碳量(C%)表示鍵合相的鍵合量，與鍵合反應(yīng)及表面覆蓋率有關(guān)。高碳、中碳及低碳型15本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第15頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分

特點(diǎn)機(jī)理：吸附&分配化學(xué)鍵合相色譜法（BPC）化學(xué)鍵合相的優(yōu)點(diǎn)：使用過(guò)程不流失，耐溶劑沖洗化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，柱子不嬌

熱穩(wěn)定性好載樣量大適用于梯度洗脫16本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第16頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分

化學(xué)鍵合相的類(lèi)型全多孔硅膠為基體鍵合相的表面結(jié)構(gòu)：?jiǎn)畏肿渔I合Si-O-C，Si-O-Si-C

聚合鍵合Si-O-Si-C結(jié)合的化學(xué)鍵類(lèi)型：

Si-O-C、Si-N、Si-C、Si-O-Si-C極性：非極性、中等極性、極性

17本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第17頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分

1)非極性鍵合相：表面基團(tuán)為非極性烴基，C18、C8、甲基、苯基等，用作反相色譜的固定相。最常用的非極性鍵合相是十八烷基鍵合相（ODS鍵合相），洗脫劑多為強(qiáng)極性溶劑，如水、醇、乙腈或無(wú)機(jī)鹽緩沖液。常用CH3OH—H2O作流動(dòng)相，極性大先出峰，極性小后出峰。18本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第18頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分反相色譜常用的微粒鍵合相

官能團(tuán)

載體

顆粒直徑十八烷基

Zorbax3~10um辛烷基

Nucleosil100A3~10um苯基

mporasil~7um二甲硅烷

Lichrosorb3~10um19本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第19頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分

2)中等極性鍵合相常用的有醚基鍵合相，既可作正相又可作反相色譜的固定相，視流動(dòng)相的極性而定。20本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第20頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分

3)極性鍵合相常用氨基、氰基鍵合相?？捎米髡嗌V的固定相，洗脫劑常用非極性或弱極性溶劑，加入適量的極性溶劑，以調(diào)節(jié)洗脫強(qiáng)度。極性小的先出峰，極性大的后出峰。21本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第21頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分正相色譜常用固定相結(jié)構(gòu)氰基

-(CH2)3C=N氨基

-(CH2)nNH2(n=3or4)二醇

-(CH2)3OCH(OH)CH2OH二甲氨基

-(CH2)3N(CH3)2二氨基

-(CH2)3NH(CH2)2NH2本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第22頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分常用流動(dòng)相及其選擇選擇流動(dòng)相：（1）化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定。（2）粘度小。（3）溶劑的純度要高。（4）沸點(diǎn)低（制備型）。（5）與色譜系統(tǒng)的適應(yīng)性好。23本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第23頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分液固色譜流動(dòng)相選擇原則極性大的試樣用極性強(qiáng)的洗脫劑極性小的試樣用極性弱的洗脫劑洗脫劑的極性強(qiáng)弱可用溶劑強(qiáng)度(ε0)參數(shù)來(lái)衡量；分離復(fù)雜試樣，采用梯度洗脫。24本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第24頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分液固色譜中流動(dòng)相的選擇(1)強(qiáng)溶劑

與硅膠表面活性位置結(jié)合能力強(qiáng)的溶劑，洗脫溶質(zhì)分子的能力也強(qiáng)。(2)弱溶劑

與硅膠表面活性位置結(jié)合能力弱的溶劑，洗脫溶質(zhì)分子的能力也弱。(3)結(jié)合能eoeo值越大，溶劑為強(qiáng)溶劑。常用：正已烷、異辛烷、氯仿、異丙醇、乙腈等。(4)eo的特點(diǎn)

溶劑強(qiáng)度與溶劑的體積百分比不成線性關(guān)系。(5)含水量的控制

通過(guò)有機(jī)修飾劑的調(diào)節(jié)，控制硅膠的含水量。25本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第25頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分反相色譜流動(dòng)相注意：A緩沖離子不能產(chǎn)生沉淀。B溶劑的紫外切點(diǎn)必須小于所使用的檢測(cè)波長(zhǎng)。C避免使用鹵族離子。DpH調(diào)節(jié)在2~7.5之間。不能超過(guò)7.5，否則硅膠將被溶解！26本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第26頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分反相色譜的流動(dòng)相最常用：水、甲醇、乙腈、丙酮、異丙醇、四氫呋喃等。主要組成是水，極性和表面張力最高，最弱的流動(dòng)相，以此洗脫非極性組分時(shí)，表現(xiàn)出的滯留時(shí)間最長(zhǎng)。甲醇和乙腈，是最常用的調(diào)節(jié)劑。（因?yàn)榧状己鸵译娴淖贤馇悬c(diǎn)相對(duì)較低，且粘度較小，及易于提純。）規(guī)律：水量越高，保留時(shí)間越長(zhǎng)。27本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第27頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分規(guī)律①組分分子結(jié)構(gòu)對(duì)保留值的影響：組分的保留值與其分子中非極性部分的總表面積越大，保留值也越大。②烷基鍵合相的特性對(duì)保留值的影響：隨碳鏈的加長(zhǎng)，組分的保留值增加，對(duì)組分分離的選擇性也增加。③流動(dòng)相性質(zhì)對(duì)保留值的影響：流動(dòng)相的表面張力越大、介電常數(shù)越大，其極性越強(qiáng)，流動(dòng)相的洗脫強(qiáng)度越弱，組分的保留值越大。28本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第28頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分正相色譜的流動(dòng)相

正相色譜的流動(dòng)相最常用的是烷烴溶劑。如：正戊烷、正己烷、正庚烷、環(huán)已烷等。

流動(dòng)相的極性越強(qiáng)洗脫能力越強(qiáng)，也就是強(qiáng)溶劑。反之為弱溶液劑。本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第29頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分

本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第30頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分液-固色譜的應(yīng)用(1)主要用于脂溶性化合物的分離：如磷脂、甾體化合物、脂溶性維生素、前列腺素等。(2)分離幾何異構(gòu)體：

如維生素A的幾何異構(gòu)體。(3)分類(lèi)分離（族的分離）：從非極性很強(qiáng)的甾醇化合物到極性很強(qiáng)的磷脂酸。一般來(lái)講，溶解于有機(jī)溶劑的樣品可得到最佳分離，而強(qiáng)極性或離子型樣品常常得不到令人滿(mǎn)意的結(jié)果。31本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第31頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分反相色譜的應(yīng)用可分離極性到非極性的各種化合物。A氨基酸、多肽和蛋白質(zhì)的分離。B堿基、核苷和核苷酸的分離。C甾體化合物的分離。D其它：兒茶酚胺、組胺、糖類(lèi)、維生素、酶等。

32本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第32頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分反相色譜的特點(diǎn)A適于分離帶有不同疏水基團(tuán)的化合物。B可通過(guò)改變?nèi)軇┙M成和pH，來(lái)分離不同極性的化合物。C可分離從極性到非極性的寬范圍的化合物。33本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第33頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分正相色譜的應(yīng)用正相色譜適用于分離極性化合物。如：酚類(lèi)、胺類(lèi)、多環(huán)化合物、染料、炸藥、羥基化合物、氨基酸和藥物等。這些樣品在正己烷或其它烷烴溶劑中的溶解度很小，在極性溶劑中的溶解度良好。用正相色譜分離可得到較好的效果。

在使用正相色譜時(shí)一個(gè)值得注意的問(wèn)題是在用氨基作固定相分離糖時(shí)，一些還原糖容易與固定相的氨基發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生席夫堿（Schiffsbase)。本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第34頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分10.3

HPLC色譜儀HPLC儀組成主要部件及功能35本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第35頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分

HPLC儀組成高壓輸液系統(tǒng)進(jìn)樣系統(tǒng)分離系統(tǒng)檢測(cè)系統(tǒng)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)36本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第36頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分HPLC的組成及工作流程1螺旋注射泵

2往復(fù)柱塞泵

3往復(fù)隔膜泵

4氣動(dòng)放大泵1自動(dòng)進(jìn)樣器

2手動(dòng)進(jìn)樣器1液固

2液液

3離子交換

4空間排阻1紫外檢測(cè)器

2熒光檢測(cè)器

3示差折光檢測(cè)器

4電化學(xué)檢測(cè)器

5電導(dǎo)檢測(cè)器

6放射性檢測(cè)器色譜柱“心臟”37本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第37頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分38本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第38頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分

主要部件

(一)輸液泵

(二)進(jìn)樣器

(三)色譜柱

(四)檢測(cè)器39本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第39頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分

(一)輸液泵高壓輸液系統(tǒng)泵的類(lèi)別對(duì)泵的要求泵的保養(yǎng)40本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第40頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分1.高壓輸液系統(tǒng)

儲(chǔ)液罐脫氣裝置過(guò)濾器高壓輸液泵梯度洗脫裝置壓力脈動(dòng)阻滯器關(guān)鍵41本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第41頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分

2.泵的類(lèi)別螺旋注射泵往復(fù)柱塞泵往復(fù)隔膜泵氣動(dòng)放大泵42本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第42頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分

3.對(duì)泵的要求流量恒定，精密度高±1%輸出壓力高，平穩(wěn)流量范圍寬0.01-10ml/min

制備液相流速較高耐高壓耐腐蝕泵體易于清洗43本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第43頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分

4.泵的保養(yǎng)如果流動(dòng)相有酸、堿、鹽等緩沖體系，必須用水沖洗。如果壓力過(guò)大，混合器可用6mol/LHNO3超聲，再用水超聲。對(duì)儀器的拆卸應(yīng)在儀器負(fù)責(zé)人或廠家工程師的指導(dǎo)下進(jìn)行。觀察有無(wú)漏液44本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第44頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分(二)進(jìn)樣針

手動(dòng)

高壓進(jìn)樣閥注射器進(jìn)樣自動(dòng)

自動(dòng)進(jìn)樣器

圓盤(pán)式自動(dòng)進(jìn)樣器

鏈?zhǔn)阶詣?dòng)進(jìn)樣器45本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第45頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分六通閥手動(dòng)進(jìn)樣器

46本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第46頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分

（Load）

（Inject）

47本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第47頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分48本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第48頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分

(三)色譜柱色譜柱由柱管和固定相組成。對(duì)柱的要求:

承受高壓、對(duì)流動(dòng)相呈化學(xué)惰性、對(duì)樣品的Rs大柱容量大、分析速度快49本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第49頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分

1.色譜柱尺寸2.色譜柱的裝填3.色譜柱柱效的評(píng)價(jià)4.色譜柱的保養(yǎng)5.柱溫箱50本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第50頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分1.色譜柱尺寸分析型：?5mm或4.6mm制備型：?＞5mm以上微徑柱：?<2mm柱長(zhǎng)：10～25cm，30cm很少見(jiàn)柱體：直型優(yōu)質(zhì)不銹鋼柱管51本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第51頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分2.色譜柱的裝填1)方法干法裝柱、勻漿法裝柱2)裝柱要求均勻緊密、不破壞顆粒、不形成裂縫、顆粒粗細(xì)不可分級(jí)52本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第52頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分3.色譜柱柱效的評(píng)價(jià)最小理論塔板數(shù)n＞104分離度R≥1.5拖尾因子相對(duì)保留值的再現(xiàn)性53本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第53頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分4.色譜柱的保養(yǎng)注意流動(dòng)相的純化防止堵塞和污染柱的操作壓力＜裝填柱的壓力應(yīng)該用進(jìn)樣閥進(jìn)樣防止柱的反沖貯存色譜柱時(shí)應(yīng)防止干涸使用保護(hù)（預(yù)）柱54本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第54頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分5.柱溫箱采用循環(huán)空氣浴周?chē)h(huán)境要保持恒定55本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第55頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分(四)檢測(cè)器對(duì)檢測(cè)器的要求檢測(cè)器分類(lèi)56本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第56頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分

1.對(duì)檢測(cè)器的要求靈敏度高噪音低線性范圍寬重復(fù)性好適用化合物的種類(lèi)廣57本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第57頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分2.檢測(cè)器分類(lèi)選擇性檢測(cè)器

——組分性質(zhì)檢測(cè)器通用型檢測(cè)器

——總體性檢測(cè)器58本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第58頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分

紫外(UVD)

選擇性檢測(cè)器

熒光(FD)

電化學(xué)(ECD)

59本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第59頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分

通用型檢測(cè)器蒸發(fā)激光散射檢測(cè)器(ELSD)示差折光檢測(cè)器(RID)質(zhì)譜檢測(cè)器(MS)60本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第60頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分

(1)紫外檢測(cè)器(UVD)1)原理：被測(cè)組分對(duì)指定波長(zhǎng)的紫外光的選擇性吸收固定波長(zhǎng)型2)類(lèi)型可變波長(zhǎng)型

掃描型

光電二極管陣列(DAD)61本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第61頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分

3)特點(diǎn):靈敏度高、噪音低；不破壞樣品、能與其他DET串聯(lián)，可用于制備；對(duì)溫度及流動(dòng)相流速波動(dòng)不敏感，可用于梯度淋洗4)弱點(diǎn):只能檢測(cè)有UV吸收的樣品；流動(dòng)相的選擇有一定的限制62本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第62頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分(2)蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(ELSD)

1)原理：粒子對(duì)光的散射2)組成：噴嘴、漂移管、光電管3)定量依據(jù)：E=Kmn63本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第63頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分(3)熒光檢測(cè)器1)原理：物質(zhì)分子的熒光吸收2)優(yōu)點(diǎn)：固有的靈敏度和選擇性3)缺點(diǎn)：應(yīng)用不廣泛64本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第64頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分(4)其他檢測(cè)器示差折光檢測(cè)器(RID)電化學(xué)檢測(cè)器(ECD)紅外檢測(cè)器介電常數(shù)檢測(cè)器放射性檢測(cè)器

MS檢測(cè)器

NHM檢測(cè)器65本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第65頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分高效液相色譜條件選擇1、柱內(nèi)展寬

渦流擴(kuò)散項(xiàng)A縱向擴(kuò)散項(xiàng)B/u

提高柱效方法流動(dòng)的流動(dòng)相的傳質(zhì)阻力項(xiàng)Csmu靜態(tài)流動(dòng)相的傳質(zhì)阻力項(xiàng)Csmu

固定相的傳質(zhì)阻力項(xiàng)Csu

2.柱外展寬提高柱效方法66本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第66頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分選擇流動(dòng)相溶劑的原則k2的大小主要取決于流動(dòng)相溶劑的極性

α主要取決于流動(dòng)相溶劑的選擇性改善分離度的方法

67本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第67頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分實(shí)驗(yàn)條件對(duì)分離的影響A溫度：反相色譜流動(dòng)相當(dāng)為含有機(jī)溶劑的水溶液時(shí)，粘度較高，最好在較高柱溫下操作，以減少粘度，柱溫一般在30~400C。最高可達(dá)800C。BpH值：對(duì)于可溶解的組分，改變流動(dòng)相

pH值，可以改變分離的選擇性，采用一定pH值的緩沖溶液作流動(dòng)相，可以抑制組分的離解。減少峰的拖尾。68本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第68頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分

注意流動(dòng)相：物理性質(zhì)極性選擇性使用前處理69本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第69頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分

物理性質(zhì)（1）對(duì)檢測(cè)器的適應(yīng)性（2）溶劑的粘度和沸點(diǎn)（3）溶解特性70本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第70頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分

流動(dòng)相的物理性質(zhì)（1）對(duì)檢測(cè)器的適應(yīng)性：

示差折光檢測(cè)器：流動(dòng)相的折射率與樣品折射率有差別。折射率差別越大檢測(cè)器的靈敏度越高。

紫外檢測(cè)器：必須選擇紫外切點(diǎn)小于檢測(cè)器波長(zhǎng)的溶劑作流動(dòng)相。

熒光檢測(cè)器：流動(dòng)相的紫外切點(diǎn)必須小于檢測(cè)器所使用的激發(fā)光波長(zhǎng)，流動(dòng)相不能引起熒光淬滅。71本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第71頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分流動(dòng)相的物理性質(zhì)（2）溶劑的粘度和沸點(diǎn)：溶劑的粘度影響色譜分析的分辨率：在色譜分析中盡量選擇粘度小的溶劑，提高分辨率。但溶劑的粘度小往往沸點(diǎn)也低，容易揮發(fā)，在色譜過(guò)程中容易產(chǎn)生氣泡，干擾檢測(cè)器的工作；在使用兩種不同溶劑的混合物做流動(dòng)相時(shí)，還容易改變不同溶劑的比例，降低分析結(jié)果的重現(xiàn)性。因此沸點(diǎn)過(guò)低的溶劑不適宜做流動(dòng)相，流動(dòng)相的沸點(diǎn)至少應(yīng)比色譜分析的溫度高30度。72本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第72頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分

如：

乙醇的價(jià)格雖低，但粘度較大沸點(diǎn)略高；

甲醇的粘度較小沸點(diǎn)最低，價(jià)格適中；

乙腈的粘度最小沸點(diǎn)較低，但價(jià)格較高；

在HPLC中常用甲醇作流動(dòng)相。73本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第73頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分

流動(dòng)相的物理性質(zhì)（3）溶解特性：

HPLC要求組成流動(dòng)相的溶劑彼此能夠互相溶解。74本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第74頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分75本文檔共83頁(yè)；當(dāng)前第75頁(yè)；編輯于星期三\18點(diǎn)58分

溶劑的極性

溶劑的極性：溶劑分子與溶質(zhì)分子間的相互作用能力的大小。這種能