ELISA實(shí)驗(yàn)原理,方法,儀器,流程圖和注意事項(xiàng)_第1頁
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文檔簡介

酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)

(ELISA)

目的和要求掌握ELISA的原理、操作過程及注意事項(xiàng)了解ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果的讀取和分析實(shí)驗(yàn)原理借助酶標(biāo)記抗體（或抗原）在體外與抗原（或抗體）結(jié)合，通過相應(yīng)底物被酶解后出現(xiàn)顯色反應(yīng)。反應(yīng)顏色深淺與抗原（或抗體）量的多少有關(guān)。特點(diǎn)：靈敏、特異類型：雙抗體夾心法、競爭法、間接法等

雙抗夾心法ELISA

競爭法

ELISA實(shí)驗(yàn)材料BSA包被的測定板酶標(biāo)抗鼠IgG抗體待檢血清，陽性血清，陰性血清洗滌液：PBS＋吐溫-20底物液：鄰苯二胺（OPD）終止液：10%H2S04實(shí)驗(yàn)步驟加入稀釋好的待測血清每孔100ul，

37℃孵育40min加入100ul酶標(biāo)抗體,37℃孵育30min洗板3次,每次1min洗板3次,每次1min實(shí)驗(yàn)步驟加入100ulTMB底物液避光室溫孵育15min終止反應(yīng):每孔加1滴10％硫酸結(jié)果觀察注意芳事項(xiàng)加樣：應(yīng)盼將所窗加物鳥加在EL拖IS荷A板孔印的底陸部，不并注距意不即可濺粗出，騾不可胳產(chǎn)生蜓氣泡饒。洗板：每極次洗傘液加傲入后狐，應(yīng)嶺靜置逗1分精鐘使溫清洗爬更加喇徹底碧。末拋次洗輸板盡志量將京水甩彩干。液體混全部樓加完花后，壞可將睜酶標(biāo)補(bǔ)板在蒜桌子勾上平緣瑞行輕稻輕晃廁動3雪0秒戀，混勻液體憶。底物心有毒性，終坊止液獄對皮緒膚有索腐蝕創(chuàng)性，粱盡量佳避免戰(zhàn)接觸姨。將待爪測血胸清1:幣10獻(xiàn)0稀釋紀(jì)后，聚再做容倍比恨稀釋品到各擦孔，徑每孔10循0μ籌l，見蘆表。商注意混勻。1:1001:2001:4001:8001:16001:32001:64001:12800陰性血清陰性血清10參0u市l(wèi)血清姜稀釋嚼及加課樣1:1001:2001:4001

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