第三章細胞生物學(xué)研究方法(xiugai)

本章內(nèi)容提要

第一節(jié)細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察方法一、光學(xué)顯微鏡二、電子顯微鏡第二節(jié)細胞組分的分析方法第三節(jié)細胞培養(yǎng)與細胞工程本文檔共92頁；當(dāng)前第1頁；編輯于星期三\10點23分第一節(jié)細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察方法

形態(tài)觀察是細胞生物學(xué)最基本的研究方法其工具主要為顯微鏡。根據(jù)光源的不同，可將顯微鏡分為：光學(xué)顯微鏡可見光和紫外光電子顯微鏡電子束本文檔共92頁；當(dāng)前第2頁；編輯于星期三\10點23分本文檔共92頁；當(dāng)前第3頁；編輯于星期三\10點23分

在光學(xué)顯微鏡中，照明系統(tǒng)是可見光，使用的是玻璃透鏡系統(tǒng)，可直接通過目鏡觀察鏡像。在電子顯微鏡中，照明系統(tǒng)為電子束，使用電磁透鏡，通過熒光屏觀察樣品的鏡像本文檔共92頁；當(dāng)前第4頁；編輯于星期三\10點23分—、光學(xué)顯微鏡技術(shù)（一）普通復(fù)式光學(xué)顯微鏡1.構(gòu)成：①照明系統(tǒng):光源和聚光鏡,有的還有折光鏡，有時附加濾光片控制光的波長。②光學(xué)放大系統(tǒng):目鏡和物鏡組成。③機械和支架系統(tǒng)：主要保證光學(xué)系統(tǒng)的準(zhǔn)確配置和靈活調(diào)控本文檔共92頁；當(dāng)前第5頁；編輯于星期三\10點23分本文檔共92頁；當(dāng)前第6頁；編輯于星期三\10點23分2.原理：經(jīng)物鏡形成倒立實像，經(jīng)目鏡放大成虛像。本文檔共92頁；當(dāng)前第7頁；編輯于星期三\10點23分3.分辨率

透鏡最重要的性質(zhì)是它的分辨率，是指能分辨出的相鄰兩個物點間最小距離的能力（區(qū)分開兩個質(zhì)點間的最小距離），這種距離稱為分辨距離。分辨距離越小，分辨能力越高。一般規(guī)定：顯微鏡或人眼在25cm明視距離處，能清楚地分辨被檢物體細微結(jié)構(gòu)最小間隔的能力，稱為分辨率。人眼分辨率是100um;光學(xué)顯微鏡的最大分辨率是0.2um本文檔共92頁；當(dāng)前第8頁；編輯于星期三\10點23分光學(xué)顯微鏡的分辨率

D=0.61λ/(N.sinα/2)其中λ為入射光線波長；α=物鏡鏡口角（樣品對物鏡鏡口的張角，也稱角孔徑）；N=介質(zhì)折射率；

N.sinα/2的量稱為物鏡的數(shù)值孔徑(numericalaperture),縮寫為NA,因此，顯微鏡的分辨率公式可表示為D=0.61λ/NA。NA被刻在物鏡鏡筒外側(cè)和聚光鏡上本文檔共92頁；當(dāng)前第9頁；編輯于星期三\10點23分顯微鏡的幾個光學(xué)特點n介質(zhì)折射率越接近鏡頭玻璃的（1.7）越好?？諝庵蠳=1，油鏡介質(zhì)為香柏油，介質(zhì)折射率可接近1.5；n最好的玻璃透鏡的鏡口角是140°，sinα/2的最大值為0.94；n可見光的波長范圍為400~700nm，而可見光中的藍色光的波長最短，為450nm；n用空氣作介質(zhì)，普通光鏡的最大分辨率約為0.3um，用油作介質(zhì)，最大分辨率為0.2um，人眼的分辨力為0.2mm，因此普通光學(xué)顯微鏡的最大有效倍數(shù)為1000X。本文檔共92頁；當(dāng)前第10頁；編輯于星期三\10點23分光鏡樣本制作樣品→固定(甲醛)→包埋(石蠟)→切片(5um)→染色（如伊紅和美藍能與蛋白質(zhì)結(jié)合；品紅能與DNA結(jié)合）本文檔共92頁；當(dāng)前第11頁；編輯于星期三\10點23分

大多數(shù)細胞總重量的70%是水，對可見光幾乎是透明的，只有很少的內(nèi)含物不透光。染色的目的就是給細胞的不同組分帶上可區(qū)別的顏色特征。如蘇木精(hematoxylin)對負電荷分子有親和性，能顯示出細胞內(nèi)核酸的分布；酸性染料如伊紅(eosin)可使細胞質(zhì)染色；蘇丹染料(Sudandyes)在脂肪中的溶解度比在乙醇中大，所以蘇丹染料的乙醇飽和溶液能使脂肪著色。本文檔共92頁；當(dāng)前第12頁；編輯于星期三\10點23分（二）倒置顯微鏡

倒置顯微鏡的結(jié)構(gòu)組成與普通顯微鏡一樣，所不同的只是它的物鏡與照明系統(tǒng)的位置顛倒過來。前者置于載物臺之下，而后者在載物臺的上方。聚光器與載物臺之間的工作距離提高，可以放置培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶等容器，直接對培養(yǎng)的細胞進行照明和觀察。本文檔共92頁；當(dāng)前第13頁；編輯于星期三\10點23分本文檔共92頁；當(dāng)前第14頁；編輯于星期三\10點23分（三）熒光顯微鏡(Fluorescencemicroscope)

以紫外線為光源照射被檢物體，使之發(fā)出熒光（自發(fā)熒光、次生熒光），然后在顯微鏡下觀察物體的形態(tài)及其所在位置。用于研究細胞內(nèi)物質(zhì)的吸收、運輸以及化學(xué)物質(zhì)的分布及定位等。能對特異蛋白質(zhì)等生物大分子進行定性定位研究。本文檔共92頁；當(dāng)前第15頁；編輯于星期三\10點23分熒光顯微鏡特點：光源為短波光；有兩個特殊的濾光片；照明方式通常為落射式。尼康E800熒光DIC顯微鏡熒光顯微鏡本文檔共92頁；當(dāng)前第16頁；編輯于星期三\10點23分本文檔共92頁；當(dāng)前第17頁；編輯于星期三\10點23分熒光顯微鏡和普通顯微鏡有以下的區(qū)別：1.照明方式通常為落射式，即光源通過物鏡投射于樣品上；2.光源為紫外光，波長較短，分辨力高于普通顯微鏡；3.有兩個特殊的濾光片，光源前的用以濾除可見光，目鏡和物鏡之間的用于濾除紫外線，用以保護人目。本文檔共92頁；當(dāng)前第18頁；編輯于星期三\10點23分用于觀察能激發(fā)出熒光的結(jié)構(gòu)。用途：免疫熒光觀察、基因定位、疾病診斷。本文檔共92頁；當(dāng)前第19頁；編輯于星期三\10點23分葉綠體自發(fā)熒光本文檔共92頁；當(dāng)前第20頁；編輯于星期三\10點23分（四）相差顯微鏡

1934-1935荷蘭物理學(xué)家Zernike設(shè)計和發(fā)明相差顯微鏡，并獲得諾貝爾獎。?

相差顯微鏡在結(jié)構(gòu)上進行了特別設(shè)計，尤其是光學(xué)系統(tǒng)有很大的不同，可用于觀察未染色的活細胞，提高活細胞結(jié)構(gòu)反差。?

基本原理：把透過標(biāo)本的可見光的光程差變成振幅差，從而提高細胞各種結(jié)構(gòu)間的對比度，使各種結(jié)構(gòu)變得清晰可見。本文檔共92頁；當(dāng)前第21頁；編輯于星期三\10點23分相差顯微鏡有不同于普通光學(xué)顯微鏡兩個特殊之處：1.環(huán)狀光闌（annulardiaphragm）：位于光源與聚光器之間。2.相位板（phaseplate）：物鏡中加了涂有氟化鎂的相位板，可將直射光或衍射光的相位推遲1/4λ。本文檔共92頁；當(dāng)前第22頁；編輯于星期三\10點23分

光學(xué)部件及光線通路本文檔共92頁；當(dāng)前第23頁；編輯于星期三\10點23分（五）暗視野顯微鏡（darkfieldmicroscope）

聚光鏡中央有擋光片，照明光線不直接進入物鏡，只允許被標(biāo)本反射和衍射的光線進入物鏡，因而視野背景是黑的，物體邊緣是亮的?？捎^察4~200nm的微粒子，分辨率比普通顯微鏡高50倍。本文檔共92頁；當(dāng)前第24頁；編輯于星期三\10點23分本文檔共92頁；當(dāng)前第25頁；編輯于星期三\10點23分（六）熒光漂白恢復(fù)技術(shù)（FRAP)起源于20世紀70年代，使用與蛋白質(zhì)或脂質(zhì)耦聯(lián)的親脂性或親水性的熒光分子，如熒光素、綠色熒光蛋白等，檢測活體細胞表面或細胞內(nèi)部的分子運動以及各種結(jié)構(gòu)上分子動態(tài)變化率的大小。本文檔共92頁；當(dāng)前第26頁；編輯于星期三\10點23分二、電子顯微鏡

1932年Ruska發(fā)明了以電子束為光源的透射電子顯微鏡（transmissionelectronmicroscope，TEM），電子束的波長要比可見光和紫外光短得多，利用樣品對電子的散射和透射形成明暗反差成像。本文檔共92頁；當(dāng)前第27頁；編輯于星期三\10點23分（一）、激光掃描共聚焦顯微鏡

激光掃描共聚焦顯微鏡是在傳統(tǒng)熒光顯微鏡成像的基礎(chǔ)上，采用激光作為光源，使用激光掃描裝置和共軛聚焦裝置，利用微機控制的數(shù)字化圖像采集和處理的技術(shù)。

本文檔共92頁；當(dāng)前第28頁；編輯于星期三\10點23分

用于熒光組織光學(xué)切片分析,3維圖像重建分析,細胞物理和生物化學(xué)測定(如分子擴散,膜電位)研究,熒光定量和定位分析,細胞中離子的實時定量分析,熒光漂白恢復(fù)研究（FRAP）技術(shù)研究，胞間通訊研究，細胞膜流動性測定。本文檔共92頁；當(dāng)前第29頁；編輯于星期三\10點23分

激光掃描共聚焦顯微鏡本文檔共92頁；當(dāng)前第30頁；編輯于星期三\10點23分本文檔共92頁；當(dāng)前第31頁；編輯于星期三\10點23分本文檔共92頁；當(dāng)前第32頁；編輯于星期三\10點23分（1）超薄切片用于電鏡觀察的標(biāo)本須制成厚度僅50nm的超薄切片，用超薄切片（ultramicrotome）制作。通常以鋨酸和戊二醛固定樣品，丙酮逐級脫水，環(huán)氧樹脂包埋，以熱膨脹或螺旋推進的方式切片，重金屬（鈾、鉛）鹽染色。制制樣樣技技術(shù)（二）主要電鏡制樣技術(shù)介紹本文檔共92頁；當(dāng)前第33頁；編輯于星期三\10點23分本文檔共92頁；當(dāng)前第34頁；編輯于星期三\10點23分(2)負染技術(shù)（Negativestaining）用重金屬鹽(如磷鎢酸或醋酸雙氧鈾)染色；吸去染料干燥后，樣品凹陷處鋪了一層重金屬鹽，而凸出的地方?jīng)]有染料沉積，從而出現(xiàn)負染效果，分辨力可達1.5nm左右。本文檔共92頁；當(dāng)前第35頁；編輯于星期三\10點23分(3)冰凍蝕刻freeze-etching亦稱冰凍斷裂。標(biāo)本置于干冰或液氮中冰凍。然后斷開，升溫后，冰升華，暴露出了斷面結(jié)構(gòu)。向斷裂面上噴涂一層蒸汽碳和鉑。然后將組織溶掉，把碳和鉑的膜剝下來，此膜即為復(fù)膜（replica）。本文檔共92頁；當(dāng)前第36頁；編輯于星期三\10點23分?是分離細胞器（如細胞核、線粒體、高爾基體）及各種大分子基本手段。?

轉(zhuǎn)速小于2500r/min的離心機稱為高速離心機。?

轉(zhuǎn)速2500-50000r/min，稱為超速離心機。?轉(zhuǎn)速高于50000r/min，稱為超高速離心機。?

目前超速離心機的最高轉(zhuǎn)速可達100000r/min一、離心技術(shù)第二節(jié)細胞組分的分析方法本文檔共92頁；當(dāng)前第37頁；編輯于星期三\10點23分1）差速離心（differentcentrifugation）用途：分離大小相差懸殊的細胞和細胞器。?

沉降順序：核——線粒體——溶酶體——內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與高爾基體——核蛋白體。LowspeedHighspeed本文檔共92頁；當(dāng)前第38頁；編輯于星期三\10點23分2）密度梯度離心?用途：分離密度不等的顆粒。（速度沉降和等密度沉降）常用介質(zhì)：氯化銫、蔗糖、多聚蔗糖。?

原理：樣品各成分在連續(xù)梯度的介質(zhì)中經(jīng)過一定時間的離心則沉降到與自身密度相等的介質(zhì)處，并停留在那里達到平衡，從而將不同密度的成分分離。本文檔共92頁；當(dāng)前第39頁；編輯于星期三\10點23分速度沉降(velocitysedimentation)用途：分離密度相近而大小不等的細胞或細胞器。特點：介質(zhì)密度較低，介質(zhì)的最大密度應(yīng)小于被分離生物顆粒的最小密度。原理：介質(zhì)密度梯度平緩，分離物按各自的沉降系數(shù)以不同的速度沉降而達到分離本文檔共92頁；當(dāng)前第40頁；編輯于星期三\10點23分等密度沉降

isopycnic

sedimentation用途：分離密度不等的顆粒。特點：介質(zhì)密度較高，陡度大，介質(zhì)的最高密度應(yīng)大于被分離組分的最大密度。所需的力場通常比速率沉降法大10~100倍，往往需要高速或超速離心。原理：樣品各成分在連續(xù)梯度的介質(zhì)中經(jīng)過一定時間的離心則沉降到與自身密度相等的介質(zhì)處，并停留在那里達到平衡，從而將不同密度的成分分離。本文檔共92頁；當(dāng)前第41頁；編輯于星期三\10點23分二、細胞內(nèi)核酸、蛋白質(zhì)、酶、糖與脂類等的顯示方法原理：利用一些顯色劑與所檢測物質(zhì)的特殊集團特異性結(jié)合，通過顯色劑在細胞中的定位及顏色的深淺來判斷檢測物質(zhì)的分布和含量。福爾根（Feulgen）反應(yīng)DNA的分布PAS反應(yīng)多糖的存在細胞中的醛基可使希夫試劑中的無色品紅變成紅色酶的顯示酸性磷酸酶的顯示本文檔共92頁；當(dāng)前第42頁；編輯于星期三\10點23分本文檔共92頁；當(dāng)前第43頁；編輯于星期三\10點23分

免疫細胞化學(xué)（immunocytochemistry）是根據(jù)免疫學(xué)原理，利用抗體同特定抗原專一結(jié)合，對抗原進行定位測定的技術(shù)?？乖饕獮榇蠓肿踊蚺c大分子相結(jié)合的小分子；抗體則是由漿細胞針對特定的抗原分泌的蛋白。如果將抗體結(jié)合上標(biāo)記物，再與組織中的抗原發(fā)生反應(yīng)，即可在光鏡或電鏡下顯示出該抗原存在于組織中的部位。

三、特異蛋白抗原的定位與定性本文檔共92頁；當(dāng)前第44頁；編輯于星期三\10點23分一般步驟：1、抗原的選擇2、抗體的分離與提純3、抗體的標(biāo)記4、標(biāo)記抗體引入組織細胞5、光鏡或電鏡樣品制備6、染色觀察、結(jié)果分析用途：1）對細胞表面或細胞內(nèi)部的抗原進行定位；2）了解抗體合成過程中的動態(tài)變化；3）抗原—抗體復(fù)合物結(jié)構(gòu)細節(jié)；4）鑒定免疫損傷引起的細胞病理變化等。本文檔共92頁；當(dāng)前第45頁；編輯于星期三\10點23分

常用的標(biāo)記物有熒光素和酶：熒光素標(biāo)記的稱為免疫熒光法（immunofluorescent

technique）常用的熒光素有異硫氰酸熒光素（fluorescein

isothiocyanate）、羅丹明（rhodamine）等。酶標(biāo)記的稱為酶標(biāo)免疫法(enzyme-labeled

antibody

method)，常用的酶有辣根過氧化物酶（horseradish

peroxidase），酶與底物發(fā)生反應(yīng)后形成不透明的沉積物，從而顯示出抗原存在的部位。（一）免疫熒光技術(shù)本文檔共92頁；當(dāng)前第46頁；編輯于星期三\10點23分免疫熒光法特點：快速、靈敏、有特異性，但其分辨率有限。本文檔共92頁；當(dāng)前第47頁；編輯于星期三\10點23分本文檔共92頁；當(dāng)前第48頁；編輯于星期三\10點23分（二）免疫電鏡技術(shù)：

免疫鐵蛋白技術(shù)：鐵蛋白提取繁瑣，分子量大，不易進入細胞。免疫酶標(biāo)技術(shù)：反應(yīng)沒有特異性，不能進行感受部位的點對點對應(yīng)。免疫膠體金技術(shù)：是以膠體金作為示蹤標(biāo)志物應(yīng)用于抗原抗體的一種新型的免疫標(biāo)記技術(shù)。膠體金是直徑1-100nm的金顆粒分散在水中形成的金溶膠。特異性強，容易識別。分辨率高。應(yīng)用：通過對分泌蛋白的定位，可以確定某種蛋白的分泌動態(tài)；胞內(nèi)酶的研究；膜蛋白的定位與骨架蛋白的定位等。本文檔共92頁；當(dāng)前第49頁；編輯于星期三\10點23分免疫膠體金技術(shù)本文檔共92頁；當(dāng)前第50頁；編輯于星期三\10點23分具有互補核苷酸序列的兩條單鏈核苷酸分子片段，在適當(dāng)條件下，通過氫鍵結(jié)合，形成DNA-DNA，DNA-RNA或RNA-RNA雜交的雙鏈分子。這種技術(shù)可用來測定單鏈分子核苷酸序列間是否具有互補關(guān)系。Southernblot檢測基因的拷貝數(shù)Northernblot檢測某種基因時空表達

原位雜交基因在細胞內(nèi)或染色體上的定位及其表達四、細胞內(nèi)特異核酸的定位與定性本文檔共92頁；當(dāng)前第51頁；編輯于星期三\10點23分原位雜交技術(shù)：用標(biāo)記的核酸探針通過分子雜交,經(jīng)放射自顯影或非放射檢測體系，確定特殊核苷酸序列在染色體或細胞中位置的方法。分RNA原位雜交和染色體原位雜交兩大類。最初是使用放射性DNA探針，后來又發(fā)明了免疫探針法。光鏡水平的原位雜交技術(shù)：用同位素標(biāo)記或熒光素標(biāo)記探針。電鏡水平的原位雜交技術(shù)：生物素標(biāo)記的探針與抗生物素抗體相連的膠體金標(biāo)記結(jié)合。（一）原位雜交（insituhybridization）本文檔共92頁；當(dāng)前第52頁；編輯于星期三\10點23分1、RNA原位雜交標(biāo)記特異性探針RNA被固定的組織切片若細胞中存在與探針互補的mRNA分子放射自顯影或酶促免疫顯色放射性物質(zhì)或非放射性（如地高辛、生物素）對該基因的表達產(chǎn)物在細胞水平上做出定位定量的分析反應(yīng)本文檔共92頁；當(dāng)前第53頁；編輯于星期三\10點23分

熒光原位雜交顯示的端粒

2、熒光原位雜交技術(shù)FISH（fluorescenceinsituhybridization）熒光原位雜交顯示的人體著絲粒衛(wèi)星DNA檢測熒光素來確定與探針DNA序列雜交的互補序列在染色體或DNA上的位置熒光素標(biāo)記探針DNA染色體DNA本文檔共92頁；當(dāng)前第54頁；編輯于星期三\10點23分（二）分子雜交技術(shù)Southern雜交：是體外分析特異DNA序列的方法，操作時先用限制性內(nèi)切酶將核DNA或線粒體DNA切成DNA片段，經(jīng)凝膠電泳分離后，轉(zhuǎn)移到醋酸纖維薄膜上，再用DNA探針雜交，通過放射自顯影，即可辨認出與探針互補的特殊核苷序列。將RNA轉(zhuǎn)移到薄膜上，用DNA探針雜交，則稱為Northern雜交。本文檔共92頁；當(dāng)前第55頁；編輯于星期三\10點23分分子雜交實驗①②③本文檔共92頁；當(dāng)前第56頁；編輯于星期三\10點23分目的：用于研究標(biāo)記化合物在機體、組織和細胞中的分布、定位、排出以及合成、更新、作用機理、作用部位等等。原理：將放射性同位素標(biāo)記的化合物導(dǎo)入生物體內(nèi)，經(jīng)過一段時間后，制取切片，涂上鹵化銀乳膠，經(jīng)放射性曝光，使乳膠感光。實現(xiàn)對細胞內(nèi)生物大分子進行動態(tài)和追蹤研究。五、放射自顯影技術(shù)一般用14C和3H標(biāo)記。常用3H-TDR來顯示DNA，用3H-UDR顯示RNA；用3H氨基酸研究蛋白質(zhì)，用3H甘露糖、3H巖藻糖研究多糖。本文檔共92頁；當(dāng)前第57頁；編輯于星期三\10點23分六、定量細胞化學(xué)分析技術(shù)細胞顯微分光光度術(shù)（Microspectrophotometry）利用細胞內(nèi)某些物質(zhì)對特異光譜的吸收，測定這些物質(zhì)(如核酸與蛋白質(zhì)等)在細胞內(nèi)的含量。

包括：紫外光顯微分光光度測定法可見光顯微分光光度測定法

流式細胞儀（FlowCytometry）主要應(yīng)用：可定量測定細胞中的DNA、RNA或某一特異蛋白的含量；測定細胞群體中不同時相細胞的數(shù)量；從細胞群體中分離某些特異染色的細胞；分離DNA含量不同的中期染色體。本文檔共92頁；當(dāng)前第58頁；編輯于星期三\10點23分本文檔共92頁；當(dāng)前第59頁；編輯于星期三\10點23分第三節(jié)細胞培養(yǎng)、細胞工程與顯微操作技術(shù)一、細胞培養(yǎng)

1.動物細胞培養(yǎng)（原代細胞培養(yǎng)，永生細胞系）

2.植物細胞培養(yǎng)（單倍體細胞培養(yǎng)，原生質(zhì)體培養(yǎng)，體細胞培養(yǎng)）

3.非細胞體系（DNA復(fù)制、RNA轉(zhuǎn)錄、蛋白質(zhì)合成、高爾基體的膜泡運輸，細胞核裝配等）

本文檔共92頁；當(dāng)前第60頁；編輯于星期三\10點23分細胞培養(yǎng)

細胞培養(yǎng)技術(shù)也叫細胞克隆技術(shù)。指在無菌條件下，模擬體內(nèi)的生理環(huán)境，培養(yǎng)從有機體中取出的細胞，使之生存和生長的技術(shù)。本文檔共92頁；當(dāng)前第61頁；編輯于星期三\10點23分細胞培養(yǎng)的優(yōu)點實驗條件容易控制重復(fù)性好方法簡便經(jīng)濟迅速結(jié)果易分析本文檔共92頁；當(dāng)前第62頁；編輯于星期三\10點23分動物細胞培養(yǎng)原代細胞（primaryculturecell）繼代細胞（subculturecell）指從機體取出后立即培養(yǎng)的細胞。有人把培養(yǎng)的第2代細胞與傳10代以內(nèi)的細胞統(tǒng)稱為原代細胞指適應(yīng)在體外培養(yǎng)條件下持續(xù)傳代培養(yǎng)的細胞本文檔共92頁；當(dāng)前第63頁；編輯于星期三\10點23分細胞系（cellline）永生細胞系指從原代培養(yǎng)細胞群中篩選出的具有特定性質(zhì)或標(biāo)志的細胞群。特點：保持原來的二倍體數(shù)量和接觸抑制的行為。指從腫瘤組織培養(yǎng)建立的細胞群或培養(yǎng)過程中發(fā)生突變或轉(zhuǎn)化的細胞，可無限繁殖。特點：呈亞二倍體或非整倍體；失去接觸抑制的行為。細胞在生長過程中，如果細胞相互接觸，則生長和增值受到抑制，這種現(xiàn)象稱為接觸抑制動物細胞培養(yǎng)本文檔共92頁；當(dāng)前第64頁；編輯于星期三\10點23分接觸抑制本文檔共92頁；當(dāng)前第65頁；編輯于星期三\10點23分

細胞克?。河脝渭毎寺∨囵B(yǎng)或通過藥物篩選的方法從某一細胞系中分離出單個細胞，并由此增值形成的，具有基本相同的遺傳性狀的細胞群體。細胞株(cellstrain)：經(jīng)過生物學(xué)鑒定，如具有特殊的遺傳標(biāo)記或性質(zhì)，由單細胞增殖形成的細胞群體。本文檔共92頁；當(dāng)前第66頁；編輯于星期三\10點23分人的細胞培養(yǎng)本文檔共92頁；當(dāng)前第67頁；編輯于星期三\10點23分實驗室中常見的幾種細胞系本文檔共92頁；當(dāng)前第68頁；編輯于星期三\10點23分Hela細胞(a)和CHO(b)細胞的培養(yǎng)細胞株本文檔共92頁；當(dāng)前第69頁；編輯于星期三\10點23分1.外植體培養(yǎng)：誘發(fā)產(chǎn)生愈傷組織。用于研究植物的生長發(fā)育、分化和變異；進行無性繁殖；制取代謝產(chǎn)物。2.懸浮細胞培養(yǎng)：適合于進行產(chǎn)業(yè)化大規(guī)模細胞培養(yǎng)，制取植物代謝產(chǎn)物。3.原生質(zhì)體培養(yǎng)：培養(yǎng)脫壁后的細胞，特點：①比較容易攝取外來的遺傳物質(zhì)，如DNA；②便于進行細胞融合，形成雜交細胞；③適宜條件下可產(chǎn)生細胞壁，經(jīng)誘導(dǎo)分化成完整植株。4.單倍體培養(yǎng)：通過花藥或花粉培養(yǎng)可獲得單倍體植株。植物細胞培養(yǎng)本文檔共92頁；當(dāng)前第70頁；編輯于星期三\10點23分PlantCellCulture本文檔共92頁；當(dāng)前第71頁；編輯于星期三\10點23分本文檔共92頁；當(dāng)前第72頁；編輯于星期三\10點23分本文檔共92頁；當(dāng)前第73頁；編輯于星期三\10點23分本文檔共92頁；當(dāng)前第74頁；編輯于星期三\10點23分本文檔共92頁；當(dāng)前第75頁；編輯于星期三\10點23分植物組織培養(yǎng)本文檔共92頁；當(dāng)前第76頁；編輯于星期三\10點23分原生質(zhì)體培養(yǎng)本文檔共92頁；當(dāng)前第77頁；編輯于星期三\10點23分植物組織培養(yǎng)是進行植物轉(zhuǎn)基因的重要步驟本文檔共92頁；當(dāng)前第78頁；編輯于星期三\10點23分（一）細胞融合(cellfusion)與細胞雜交技術(shù)通過培養(yǎng)和介導(dǎo)，兩個或多個細胞合并成一個雙核或多核細胞的過程稱為細胞融合或細胞雜交。同核融合細胞：相同基因型的細胞融合而成。異核融合細胞：不同基因型的細胞融合而成。自發(fā)融合：同種細胞在培養(yǎng)過程中自發(fā)合并的現(xiàn)象。誘發(fā)融合：異種間的細胞必須經(jīng)誘導(dǎo)劑處理才能融合。誘導(dǎo)細胞融合的方法：生物方法（仙臺病毒、副流感病毒和新城雞瘟病毒）、化學(xué)方法（聚乙二醇PEG）、物理方法（電擊和激光）。

二、細胞工程本文檔共92頁；當(dāng)前第79頁；編輯于星期三\10點23分本文檔共92頁；當(dāng)前第80頁；編輯于星期三\10點23分（二）單克隆抗體技術(shù)本文檔共92頁；當(dāng)前第81頁；編輯于星期三\10點23分本文檔共92頁；當(dāng)前第82頁；編輯于星期三\10點23分（三）細胞拆合與顯微操作技術(shù)

細胞拆合：把核與質(zhì)分離開來，然后把不同來源的細胞質(zhì)和細胞核相互配合，形成核質(zhì)雜交細胞。